高效液相色譜法測(cè)定感冒靈沖劑中馬來(lái)酸氯苯那敏含量*

劉彬果，郭海萍，任 濤

(中國(guó)人民解放軍第二五四醫(yī)院，天津 300142)

感冒靈顆粒為清熱解毒藥，是本院制劑，臨床主要用于感冒發(fā)燒、咽喉疼痛、頭痛等。其處方中含有復(fù)方乙酰水楊酸、馬來(lái)酸氯苯那敏等化學(xué)藥，還有蒲公英、敗醬草等中藥浸膏。馬來(lái)酸氯苯那敏具有較強(qiáng)的抗組織胺作用，可引起嗜睡及輕度抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。其現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有中藥定性鑒別的方法，沒(méi)有馬來(lái)酸氯苯那敏的含量測(cè)定方法，為了更好的控制感冒靈顆粒的質(zhì)量，我們采用高效液相色譜法測(cè)定了馬來(lái)酸氯苯那敏的含量。經(jīng)方法學(xué)考查，認(rèn)為本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，無(wú)干擾，可用于本品質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

LC-10AT 高效液相色譜儀，515 泵，Waters 996 檢測(cè)器，Waters2010 色譜工作站;UV -1800 可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)。

馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100047 -200606);甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

感冒靈沖劑為本院制劑(批號(hào) 12060117、12060235、12480135)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相:乙腈- 水(含0. 3% 冰乙酸和0.2%三乙胺);流速:1.0 ml/min;柱溫:室溫;檢測(cè)波長(zhǎng):262 nm，進(jìn)樣量:10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取105 ℃下干燥的馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋成39.2 μg/ml 溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，精密稱(chēng)定5 g，置50 ml 量瓶中，加甲醇約40 ml，超聲處理30 min，放冷后，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，除去初濾液，取續(xù)濾液，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，備用。

2.2.3 陰性對(duì)照液的制備 按照處方組成比例，制備不含馬來(lái)酸氯苯那敏的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照液，并按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果在與馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰，說(shuō)明本品中的其他成分對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏的測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)陰性對(duì)照(C)HPLC 圖譜

2.3 線性關(guān)系考查 精密稱(chēng)取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品制成濃度為6. 09、12. 18、24. 36、48. 72、97. 44 和194.88 μg/ml 的溶液。按上述色譜條件測(cè)定，以馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程:A =3610. 1 C -485. 37(r=0.9998)，結(jié)果表明:馬來(lái)酸氯苯那敏在6.09 ～194.88 μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定5 次，依法測(cè)定，結(jié)果峰面積RSD 為0.42%(n =5)，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6 份，按供試品溶液制備方法制得，依法測(cè)定，結(jié)果RSD 為0.92%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品溶液在室溫下放置不同時(shí)間(0、1、4、8、10、12 和24 h)，測(cè)定，其峰面積RSD 為1.33%，表明樣品液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的同一批號(hào)的樣品(12060235)5 份，研細(xì)，分別精密稱(chēng)取，并精密加入定量的馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品，按供試品溶液制備法制備，并按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為97.5%，RSD 為2.86%。見(jiàn)表1。

2.6 樣品測(cè)定 取樣品3 批，按上述方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定，外標(biāo)法定量。結(jié)果3 個(gè)批次的樣品馬來(lái)酸氯苯那敏含量分別為標(biāo)示量的97.2%、95.6%和94.8%。

表1 馬來(lái)酸氯苯那敏加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 經(jīng)過(guò)對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜測(cè)定，樣品和對(duì)照溶液均在262 nm 處有最大吸收，故選擇262 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 方法學(xué)研究結(jié)果表明 本方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，空白無(wú)干擾，可作為感冒靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定的方法。

1 中國(guó)藥典［S］. 二部.2010:49

2 冉曉靜，胡德福，王杰. 高效液相色譜法測(cè)定感冒靈膠囊中4 種組分的含量［J］. 藥物分析雜志，2001，21(5):369