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    Bub1和Mad2蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義

    2013-12-19 07:56:44莊雪儀李愛香
    關(guān)鍵詞:紡錘體整倍體關(guān)卡

    莊雪儀,李 玲,李愛香

    2.河南省人口與計劃生育科學(xué)研究院 生殖科,鄭州450052

    子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢。苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白-1(Bub1)和有絲分裂阻滯缺陷蛋白-2(Mad2)蛋白是紡錘體關(guān)卡的重要組成部分,其功能是監(jiān)控細(xì)胞有絲分裂,保證其過程忠實有序的進(jìn)行。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測Bub1和Mad2蛋白在人正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生和子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況,并分析其與子宮內(nèi)膜癌患者的臨床分期、病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系,探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及臨床意義。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料 選取2009年6月-2012年6月確診為子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)切除存檔蠟塊標(biāo)本72例,為子宮內(nèi)膜癌組(A組),年齡(50.37±4.54)歲(42~57歲),其中絕經(jīng)患者58例。病理類型:內(nèi)膜樣腺癌46例,腺癌伴鱗狀上皮化生16例,漿液性腺癌9例,透明細(xì)胞癌1例;臨床分期:Ⅰ期43例,Ⅱ期19例,Ⅲ期7例,Ⅳ期3例;病理分級:G1(高分化)43例,G2(中分化)20例,G3(低分化)9例;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例,未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例。選取同期子宮內(nèi)膜不典型增生石蠟包埋組織標(biāo)本40例,為不典型增生組(B組),年齡(47.87±5.32)歲;正常子宮內(nèi)膜石蠟包埋組織標(biāo)本40例,為正常子宮內(nèi)膜組(C組),年齡(48.63±3.80)歲。3組間年齡差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有患者術(shù)前均未接受激素治療、放療或化療。

    1.2 方法

    1.2.1 試劑 一抗兔抗人多克隆抗體Bub1和Mad2(工作濃度為1∶100,美國Abcom公司);SP試劑盒和DAB顯色劑(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)。

    1.2.2 檢測方法及判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測各組中Bub1和Mad2蛋白的表達(dá)情況,子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)和/或胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。判定標(biāo)準(zhǔn):采用半定量、2人雙盲法觀察結(jié)果,每例切片選擇10個高倍視野(10×40),按照陽性細(xì)胞數(shù)占視野中總細(xì)胞數(shù)的百分比分為4級:無陽性著色或陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為(-),11% ~30% 為 (+),31% ~50% 為 (),≥51%為();(-)為陰性表達(dá),(+)~()為陽性表達(dá)[1]。若2人觀察結(jié)果相差10%則重新評定。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)以±s表示,采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理。定性資料比較采用χ2檢驗,Bub1和Mad2蛋白的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)系數(shù)分析,α=0.05設(shè)為檢驗水準(zhǔn)。

    2 結(jié) 果

    2.1 Bub1和 Mad2蛋白檢測結(jié)果 A,B,C組Bub1蛋白的陽性表達(dá)率分別為27.78%,57.50%,85.00%;Mad2蛋白的陽性表達(dá)率分別為86.11%,57.50%,22.50%;2種蛋白3組間兩兩比較差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    2.2 Bub1及Mad2蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Bub1蛋白在臨床分期為Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ期的患者中的陽性表達(dá)率比較差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而 Mad2蛋白則無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);2種蛋白在病理分級為 G1,G2,G3的患者中陽性表達(dá)率差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者中,Bub1蛋白的陽性表達(dá)率分別為0%及31.75%,Mad2蛋白的陽性表達(dá)率分別為88.89%及85.71%,差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05,圖1,表1)。

    圖1 子宮內(nèi)膜癌組織中Bub1及Mad2蛋白的表達(dá)(DAB染色 ×400)Fig 1 Immunohistochemical figure of Bud1and Mad2(DAB ×400)

    表1 Bub1及Mad2蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)關(guān)系Tab 1 Parameter relationship between positive expression rate of Bub1and Mad2and clinical stage,pathology classification and lymph node etastasis

    2.3 Bub1和Mad2蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的相關(guān)性分析 2種蛋白在子宮內(nèi)膜癌組中均為陽性表達(dá)的有13例,均為陰性的有3例。根據(jù)其陽性細(xì)胞數(shù)占視野中總細(xì)胞數(shù)的百分比,二者在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.01,表2)。

    表2 子宮內(nèi)膜癌組織中Bub1和Mad2的相關(guān)性Tab 2 The correlation of Bub1and Mad2

    3 討 論

    子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病年齡逐漸年輕化且發(fā)病率呈顯著上升趨勢。近年來的研究表明,細(xì)胞周期調(diào)控紊亂與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[2]。Bub1和Mad2蛋白是紡錘體關(guān)卡的重要組成部分,在細(xì)胞有絲分裂過程中監(jiān)控紡錘體形態(tài)、染色體著絲點與微管聯(lián)接以及染色體位置和排列,如果其表達(dá)和/或功能異常時,紡錘體關(guān)卡就會忽略染色體損傷,繼續(xù)有絲分裂周期,染色體分配過程就有可能發(fā)生錯誤,造成染色體的不穩(wěn)定性[1]。

    本研究結(jié)果表明,Bub1蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì),其在子宮內(nèi)膜癌患者中的陽性表達(dá)率明顯低于正常子宮內(nèi)膜,且內(nèi)膜癌的分化程度越低、臨床分期越晚,陽性表達(dá)率越低,但與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān),提示Bub1蛋白表達(dá)可能與內(nèi)膜癌預(yù)后相關(guān)。Bub1基因發(fā)生突變的機(jī)率極低,Bub1蛋白在內(nèi)膜癌組織中表達(dá)降低,可能由于癌組織中Bub1的上游基因發(fā)生突變而導(dǎo)致Bub1表達(dá)降低,Bub1表達(dá)缺乏會導(dǎo)致P53介導(dǎo)的受損細(xì)胞早期凋亡通路中紡錘體關(guān)卡功能受損,導(dǎo)致非整倍體染色體的形成和積累[3]。有研究表明,內(nèi)膜癌組織中非整倍體染色體細(xì)胞率明顯高于不典型增生和正常子宮內(nèi)膜組織,非整倍體可以獨立于基因突變而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生[4-5]。

    本研究也顯示,Mad2蛋白在子宮內(nèi)膜癌患者中的陽性表達(dá)率明顯高于正常子宮內(nèi)膜,且子宮內(nèi)膜癌的分化程度越低,陽性表達(dá)率越高,但與臨床分期和是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。Mad2蛋白同樣以細(xì)胞質(zhì)表達(dá)為主,在細(xì)胞有絲分裂過程中可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白,使細(xì)胞進(jìn)行染色體的分離[6]。Mad2基因也極少發(fā)生突變,可能是由于某種或多種因素導(dǎo)致Mad2蛋白在內(nèi)膜癌中表達(dá)增高,繼而使紡錘體檢測點功能受損,引起紡錘體檢查點控制失常,導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定性增加,染色體缺失的機(jī)率升高[7]。Sotillo等研究表明,Mad2過表達(dá)可以刺激小鼠體內(nèi)不同亞型腫瘤的啟動和進(jìn)展[8]。

    本研究結(jié)果還表明,Bub1和Mad2蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。Bub1是Bub家族的成員之一,基因定位于2q14,其表達(dá)產(chǎn)物是紡錘體關(guān)卡的必要組分。Bub1蛋白是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,在各種生物中,Bub1是招募 Mad1、Mad2、蛋白瞵酸酶(PP)等到動點所必須的。Bubl蛋白表達(dá)異常會使紡錘體關(guān)卡功能受損,導(dǎo)致細(xì)胞有絲分裂過程中染色體分配錯誤,造成非整倍體和染色體不穩(wěn)定性(Chromosomeinstability,CIN)的產(chǎn)生[9]。Mad2是Mad家族的成員之一,其基因定位于4q27,Mad2蛋白是紡錘體關(guān)卡的必要組成部分,其位于游離染色體著絲點上,參與監(jiān)控著絲點與紡錘體微管的聯(lián)接,并發(fā)出聯(lián)結(jié)缺損信號。在信號級聯(lián)中,Bub1位于信號級聯(lián)的上游,為Mad2檢測張力動粒所必須。當(dāng)染色體受到損傷,紡錘體關(guān)卡被激活,Mad2通過抑制后期促進(jìn)復(fù)合體的活性,阻止細(xì)胞向后期轉(zhuǎn)變[10]。Bub1表達(dá)降低,使Mad2定位動粒的能力降低,忽略染色體的異常,加快有絲分裂的進(jìn)程[11]。Bub1和 Mad2蛋白均表達(dá)異常,可能會加重染色體不穩(wěn)定的發(fā)生,具有染色體不穩(wěn)定性質(zhì)的細(xì)胞易于發(fā)生染色體畸變,最終可能會導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

    綜上所述,Bubl和Mad2蛋白表達(dá)異常會造成染色體不穩(wěn)定和非整倍體細(xì)胞,最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,二者相互作用,在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程起重要作用。因此聯(lián)合檢測兩個指標(biāo)較單一檢測其中某一個指標(biāo)更具有臨床意義。

    [1]Ito D,Saito Y,Matsumoto T.Centromere-tethered Mps1 pombe homolog(Mph1)kinase is a sufficient marker for recruitment of the spindle checkpoint protein Bub1,but not Mad1[J].ProcNatlAcadSciUSA,2012,109(1):209-214.

    [2]李志琴,章靜波.細(xì)胞周期調(diào)控與腫瘤[J].癌癥進(jìn)展雜志,2004,2(2):146-150.

    [3]Gao F,Ponte J F,Papageorgis P,etal.hBub1deficiency triggers a novel p53mediated early apoptotic checkpoint pathway in mitotic spindle damaged cells[J].CancerBiolTher,2009,8(7):627-635.

    [4]馬 哲,劉 力.子宮內(nèi)膜癌DNA倍體、SPF的檢測及其臨床意義的研究[J].中國婦幼保健,2006,(22):3173-3175.

    [5]Todorovic-Rakovic N.Genome-based versus gene-based theory of cancer:possible implications for clinical practice[J].Biosc,2011,36(4):719-724.

    [6]Du J,Du Q,Zhang Y,etal.Expression of cell-cycle regulatory proteins BUBR1,MAD2,Aurora A,cyclin A and cyclin E in invasive ductal breast carcinomas[J].HistolHistopatho,2011,26(6):761-768.

    [7]Kabeche L,Compton D A.Checkpoint-independent stabilization of kinetochore-microtubule attachments by Mad2in human cells[J].CurrBio,2012,22(7):638-644.

    [8]Sotillo R,Hernando E,Díaz-Rodríguez E,etal.Mad2overexpression promotes aneuploidy and tumorigenesis in mice[J].CancerCell,2007,11(1):9-23.

    [9]李愛香.Bubl、Mad2和突變型p53蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義[D].鄭州:鄭州大學(xué),2012.

    [10]Ge S,Skaar J R,Pagano M.APC/C-and Mad2-mediated degradation of Cdc20during spindle checkpoint activation[J].CellCycle,2009,8(1):167-171.

    [11]Saitoh S,Kobayashi Y,Ogiyama Y,etal.Dual regulation of Mad2localization on kinetochores by Bub1and Dam1/DASH that ensure proper spindle interaction[J].MolBiolCel,2008,19(9):3885-3897.

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