雞樅菌多糖對免疫抑制小鼠免疫功能的影響

王思蘆，汪開毓，趙 玲，陳德芳，周趙英

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，四川 雅安 625014;2.西昌學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，四川 西 昌 615013;3.動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川雅安 625014)

自1969年日本學(xué)者千原首次報道了從香菇子實體中分離出一種抗腫瘤多糖以來，真菌多糖的生物活性和功能已受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，現(xiàn)代研究表明許多真菌多糖具有明顯的免疫調(diào)節(jié)活性［1-4］。雞樅菌多糖［Termitomyces albuminosus(Berk.)Heim.polysaccharides，TAP］是從野生食用真菌雞樅菌中提取到的一種生物活性多糖，目前在國外尚未見到TAP藥理活性的相關(guān)報道，國內(nèi)對其研究也較少。據(jù)馮寧等［5］報道TAP對高血脂癥小鼠有降低血脂的作用，能使機體免疫反應(yīng)處于個相對較低的穩(wěn)定狀態(tài)，避免劇烈的免疫反應(yīng)產(chǎn)生免疫損傷。王一心等［6］研究表明云南野生雞樅菌對高膽固醇血癥大鼠有明顯的抗氧化作用。本試驗以黃芪多糖(astragalus polysaccharides，APS)為陽性對照，首次探討TAP對環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，為開發(fā)TAP免疫增強劑提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 主要藥品與試劑 雞樅菌多糖(TAP，雞樅菌子實體干品購自西昌市涼山山珍銷售處，經(jīng)過水提后乙醇沉淀得到粗制多糖，經(jīng)過Sevage法除蛋白和透析得到分子量在8 000以上的多糖，苯酚-硫酸法測定雞樅菌多糖提取物中多糖含量為92.17%，由動物疫病與人類健康四川省重點實驗室制備)，環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)(江蘇恒瑞醫(yī)藥)，黃芪多糖(江蘇華東貝爾生物藥業(yè))，臺盼藍(lán)(Sigma)，RPMI1640培養(yǎng)液(Hyclon)，刀豆蛋白 A(ConA，Sigma)，脂多糖(LPS，Sigma)，MTT(Sigma)，二甲亞砜(DMSO)，pH 7.2 PBS，5% 雞紅細(xì)胞(CRBC)，豚鼠血清(廣州蕊特生物)，小鼠細(xì)胞因子IL-2，IL-4 和 IFN-γ 檢測試劑盒(BOSTER)，CD3+(FITC Hamster anti-mouse)單克隆抗體，CD4+(PE rat anti-mouse)單克隆抗體，CD8+(PerCP rat antimouse)單克隆抗體(BOSTER)，溶血素(VersalyseTMLysing Solution)。

1.2 試驗動物 清潔級昆明種小白鼠120只，體質(zhì)量20±2 g，♀♂各半，由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗動物中心提供。

1.3 主要儀器 紫外可見光分光光度計(上海精密科學(xué)儀器)，流式細(xì)胞儀(BD FACSCcalibur TM)，超凈工作臺(AIRTECH)，倒置顯微鏡(Motic)，離心機(Thermo)，酶聯(lián)免疫檢測儀(BIO-RAD)，CO2培養(yǎng)箱(Thermo)。

2 方法

2.1 動物分組及處理 將60只健康小鼠隨機分為空白組、模型組、陽性組及雞樅菌多糖(TAP)高、中、低劑量組，每組10只?？瞻捉M和模型組每天腹腔注射生理鹽水0.2 ml、陽性組每天腹腔注射20 g·L-1APS 0.2 ml，TAP高、中、低劑量組分別每天腹腔注射 20、10、5 g·L-1TAP 0.2 ml，連續(xù)7 d;給藥后 d 5～7，除空白對照組外其余各組每天腹腔注射CTX 100 mg·kg-1。

2.2 腹腔巨噬細(xì)胞功能及免疫器官指數(shù)檢測 按“2.1”處理，各組分別于給藥后d 7稱重，并腹腔注射5%雞紅細(xì)胞0.5 ml，8 h后處死小鼠，腹腔注入PBS 2 ml，輕揉小鼠腹部1 min，吸取腹腔液體0.5 ml于載玻片上在37℃孵育30 min，1∶1丙酮-甲醇液固定5 min，Giemsa染色，每張涂片油鏡下計數(shù)200個巨噬細(xì)胞，按以下公式［7］計算吞噬率和吞噬指數(shù)。吞噬率/%=(吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個巨噬細(xì)胞數(shù))×100%，吞噬指數(shù)=(被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/200個巨噬細(xì)胞數(shù))÷2。另取各組小鼠脾和胸腺稱重，按以下公式計算［7］:脾臟指數(shù)=脾臟重量(mg)/體重(g)，胸腺指數(shù)=胸腺重量(mg)/體重(g)。

2.3 外周血 CD3+、CD4+和 CD8+T淋巴細(xì)胞亞群檢測 另取60只小鼠處理同“2.1”，末次給藥12 h后，摘眼球采血0.5 ml，并以4%EDTA-Na2抗凝，取100 μl抗凝全血與 CD3+、CD4+和 CD8+單抗各5 μl混勻，4℃避光染色30 min，各管加入溶血素1 ml，混勻后避光反應(yīng)10 min，加入 PBS 1 ml混勻，1 000 r·min-15 min得到細(xì)胞沉淀，加2 ml PBS洗滌2次，棄上清液，將細(xì)胞沉淀用500 μl PBS重懸后上流式細(xì)胞儀分析。同時設(shè)各種單克隆抗體單標(biāo)管各1支、空白對照管1支。

2.4 外周血溶血素及細(xì)胞因子IL-2，IL-4和IFN-γ含量檢測 分組與采血同“2.3”，另于給藥d 3，腹腔注射5%雞紅細(xì)胞0.2 ml致敏，末次給藥12 h后，摘眼球采血 0.5 ml，常溫放置 2 h，2 000 r·min-110 min，取上層血清20 μl用生理鹽水稀釋100倍，于冰浴中將稀釋后的小鼠血清1 ml、10%豚鼠血清2 ml和5% 雞紅細(xì)胞(CRBC)2 ml混勻，置于37℃ 30 min后冰浴終止反應(yīng)，2 000 r·min-1離心10 min，取上清液備測;以不含小鼠血清的空白管調(diào)零，測定各管吸光值(A540)。溶血素含量表示為所測A540×100。細(xì)胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的檢測方法均按照試劑盒使用說明進(jìn)行。

2.5 脾淋巴細(xì)胞增殖試驗 分組與采血同“2.3”，各組均隨機選取5只小鼠，無菌取出其脾臟置于培養(yǎng)皿中，將其碾碎混勻，PBS沖洗，細(xì)胞懸液過200目細(xì)胞篩，1 500 r·min-13 min，棄去上清后每管加入溶血素 1 ml靜置 5 min，1 500 r·min-13 min，沉淀用RPMI 1640培養(yǎng)液洗滌2次，臺盼藍(lán)染色后鏡檢活細(xì)胞數(shù)大于95%，再調(diào)節(jié)細(xì)胞量至1×109·L-1。將各組的細(xì)胞懸液再分成3份，分別加入含25 mg·L-1ConA、10 mg·L-1LPS以及不含前兩者的培養(yǎng)液后加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100 μl，每個樣設(shè)4個重復(fù);于37℃ 5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)44 h后各孔加入2 g·L-1的MTT 20 μl繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去培養(yǎng)液上清 180 μl，每孔加 150 μl二甲基亞砜，充分溶解沉淀后讀取吸光值(A570)。

2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 采用SPSS 13.0分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，方差分析組間差異。

3 結(jié)果

3.1 雞樅菌多糖對免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能和免疫器官指數(shù)的影響 與空白組比較，模型組的各項指標(biāo)均明顯降低(P＜0.01)，其中巨噬細(xì)胞(M?)吞噬率下降44.5%，吞噬指數(shù)下降40.5%，脾臟和胸腺指數(shù)則分別下降63.4%和74.8%。而與模型組相比，陽性組的黃芪多糖(APS)與中、高劑量的雞樅菌多糖(TAP)均能明顯提高吞噬率和吞噬指數(shù)(P＜0.05或P＜0.01)。與陽性組比較，中劑量TAP組的吞噬率與吞噬指數(shù)差異均無顯著性(P＞0.05)，而高劑量TAP能使免疫抑制小鼠的吞噬率、吞噬指數(shù)分別升高42.4%和52.0%，明顯高于陽性組的提升值22.6%和15.1%(P＜0.01)。模型組脾臟及胸腺指數(shù)均小于空白組(P＜0.01)。APS與各劑量TAP均能提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)(P＜0.01或P＜0.05);其中陽性組與中、低劑量TAP組比差異無顯著性(P＞0.05)，但與高劑量TAP組差異有顯著性(P＜0.01)，Tab 1。

Tab 1 Effects of TAP on macrophage function and immuneorgan index in immunosuppressive mice(±s，n=10)

Tab 1 Effects of TAP on macrophage function and immuneorgan index in immunosuppressive mice(±s，n=10)

△△P＜0.01 vs control;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs CTX;#P＜0.05，##P＜0.01 vs APS

Group Phagocytosis rate/%Phagocytosis index Spleen index Thymus index Control 35.5±3.71 0.255±0.02 5.54±0.64 3.57±0.54 CTX 19.7±3.34△△ 0.152±0.02△△ 2.03±0.24△△ 0.90±0.28△△CTX+APS 24.15±2.60* 0.175±0.03* 3.74±0.36＊＊ 1.47±0.32＊＊CTX+TAP High dose 28.05±4.30# 0.231± 0.02## 4.33±0.65## 1.81±0.43##CTX+TAP Middle dose 23.75±4.56 0.197±0.04 3.90±0.52 1.51±0.20 CTX+TAP Low dose 21.15±4.67 0.183±0.02 3.32±0.53 1.45±0.28

3.2 雞樅菌多糖對免疫抑制小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響 與空白組相比，環(huán)磷酰胺(CTX)使脾臟淋巴細(xì)胞總數(shù)降低，但能明顯升高T淋巴細(xì)胞CD3+(P＜0.01)和 CD4+陽性率(P＜0.01)，并降低CD8+比率(P＜0.01)，使各組 CD4+/CD8+比值明顯升高(P＜0.01);APS與 TAP也能明顯升高CD3+(P＜0.01)和 CD4+的比率(P＜0.01)，并隨TAP劑量增大CD3+和CD8+比率均有增大的趨勢，而CD4+比率則減小。

與模型組相比:高、中劑量 TAP能明顯升高CD3+比率(P＜0.01)，而APS組與TAP低劑量組差異均無顯著性(P＞0.05);APS與高劑量TAP均有降低CD4+的趨勢，且以高劑量TAP效果最好，但二者差異沒有顯著性(P＞0.05);APS與不同劑量TAP均能不同程度的升高免疫抑制小鼠的CD8+值，其中高劑量TAP能提高CD8+比率達(dá)81.6%明顯高于陽性組的3.1%(P＜0.01);高劑量TAP能明顯降低CD4+/CD8+比值(P＜0.01)，中劑量TAP能明顯降低CD4+/CD8+比值(P＜0.05)，陽性組有降低CD4+/CD8+比值的趨勢，但差異無顯著性(P＞0.05)，Tab 2。

Tab 2 Effects of TAP on lymphocyte subpopulation in immunosuppressive mice(±s，n=10)

Tab 2 Effects of TAP on lymphocyte subpopulation in immunosuppressive mice(±s，n=10)

△△P＜0.01 vs control;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs CTX;#P＜0.05，##P＜0.01 vs APS

Group CD3+/% CD4+/% CD8+/% CD4+/CD8+Control 71.02±4.96 34.48±3.86 30.62±3.59 1.14±0.19 CTX 88.16±4.79△△ 72.00±6.26△△ 14.75±1.48△△ 4.94±0.79△△CTX+APS 91.07±4.28 71.62±6.21 15.21±1.95 4.77±0.67 CTX+TAP High dose 94.71±2.32＊＊ 67.96±5.28 26.78±4.99＊＊##2.63±0.59＊＊##CTX+TAP Middle dose 93.67±2.01＊＊ 73.56±6.32 17.22±1.44 4.3±0.53*CTX+TAP Low dose 91.05±4.21 74.4±3.58 16.47±2.24 4.61±0.80

3.3 雞樅菌多糖對免疫抑制小鼠血清溶血素和細(xì)胞因子的影響 模型組血清溶血素含量明顯低于空白組(P＜0.01);與模型組比較，APS與高、中劑量TAP均能明顯提高免疫抑制小鼠的血清溶血素(P＜0.01)，并以高劑量TAP效果最好;陽性組與高劑量TAP比較差異有顯著性(P＜0.01)，與中劑量TAP比較差異有顯著性(P＜0.05);結(jié)果表明，高劑量TAP可提高免疫抑制小鼠的血清溶血素達(dá)105.8%，明顯高于陽性組的72.1%(P＜0.01)。

與空白組相比，各組小鼠血清IL-2、IL-4及IFN-γ含量均明顯降低(P＜0.01)。與模型組相比，APS與不同劑量的TAP均能明顯提高IL-2和IFN-γ(P＜0.01或P＜0.05);高劑量TAP組各細(xì)胞因子與陽性組比較差異均有顯著性(P＜0.01)。結(jié)果表明，高劑量TAP可使免疫低下小鼠IL-2、IFN-γ水平分別上升312.3% 和88.1%，其中高劑量組IFN-γ與空白組相比差異無顯著性(P＞0.05)。對IL-4的影響表明，APS及TAP可能與環(huán)磷酰胺具有協(xié)同作用，使小鼠的IL-4含量進(jìn)一步降低(P＜0.01)，且降低幅度與TAP的劑量成反比;與模型組相比，陽性組IL-4含量降低了26.8%，而低劑量TAP組降低了40.1%，二者差異有顯著性(P＜0.01)，見Tab 3。

Tab 3 Effects of TAP on blood serum hemolysin and cytokine in immunosuppressive mice(±s，n=10)

Tab 3 Effects of TAP on blood serum hemolysin and cytokine in immunosuppressive mice(±s，n=10)

△△P＜0.01 vs control;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs CTX;#P＜0.05，##P＜0.01 vs APS

Group Hemolysin(A540 ×100)IL-2/ng·L-1 IL-4/ng·L-1 IFN-γ/ng·L -1 Control 2.57±0.34 15.36±2.16 26.40 ±1.74 324.29±44.47 CTX 1.04±0.19△△ 3.09± 0.91△△18.40±2.44△△ 161.11±37.96△△CTX+APS 1.79±0.21＊＊ 7.44 ±1.33＊＊13.46±1.73＊＊ 224.81±34.53＊＊CTX+TAP High dose 2.14±0.34## 12.74±2.25## 15.76±1.44## 303.05±32.72##CTX+TAP Middle dose 1.53±0.25# 8.87±1.77 13.66±2.16 216.43±33.83 CTX+TAP Low dose 1.21±0.20 7.62±1.22 11.02±1.91##201.84±47.26

3.4 雞樅菌多糖對免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖的影響 各組 T、B淋巴細(xì)胞在有、無 ConA或LPS的情況下的增殖均低于空白組(P＜0.01);在ConA或LPS協(xié)同下，APS與高、中劑量TAP均能明顯促進(jìn)免疫抑制小鼠脾T或B淋巴細(xì)胞增殖(P＜0.01);同時在未加ConA或LPS的情況下，APS與各劑量TAP也均能明顯提高免疫抑制小鼠T或B淋巴細(xì)胞增殖(P＜0.01)，表明兩種多糖均有類似促分裂原的作用，可直接促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，并與TAP有劑量依賴關(guān)系。結(jié)果顯示，高、中劑量TAP促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖作用相當(dāng)(P＞0.05)或明顯強于APS(P＜0.01)，見 Tab 4。

Tab 4 Effects of TAP on splenic lymphocyte proliferation in immunosuppressvie mice(±s，n=4)

Tab 4 Effects of TAP on splenic lymphocyte proliferation in immunosuppressvie mice(±s，n=4)

△△P＜0.01 vs control;*P＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs CTX;#P ＜0.05，##P ＜0.01 vs APS

Group A570(+10 mg·L-1LPS)A570(+2.5 mg·L-1ConA) A570 Control 0.454±0.028 0.423±0.011 0.316±0.010 CTX 0.195±0.023△△ 0.24±0.015△△ 0.145±0.013△△CTX+APS 0.319±0.048＊＊ 0.335±0.015＊＊ 0.2±0.008＊＊CTX+TAP High dose 0.404±0.036## 0.39±0.007## 0.268±0.009##CTX+TAP Middle dose 0.326±0.019 0.355±0.013 0.232±0.008 CTX+TAP Low dose 0.277±0.035 0.252±0.014 0.169±0.007

4 討論

小鼠免疫抑制模型可使用環(huán)磷酰胺(CTX)、地塞米松和氫化可的松等藥物來制作，其中CTX是一種常用的細(xì)胞毒化療藥物，同時也是一種免疫抑制劑，使小鼠細(xì)胞免疫功能受到明顯的抑制，可建立長期免疫低下模型［8-9］。本研究通過連續(xù)3 d對小鼠腹腔注射100 mg·kg-1CTX造模，使其脾臟和胸腺明顯萎縮，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)、血清溶血素、細(xì)胞因子IL-2、Il-4、IFN-γ和脾淋巴細(xì)胞增殖能力均明顯降低，表明小鼠細(xì)胞及體液免疫功能明顯下降。

小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(M?)是一種多功能的免疫細(xì)胞，在機體的特異性和非特異性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要功能。研究表明，高劑量TAP能顯著提高免疫低下小鼠M?對雞紅細(xì)胞的吞噬率與吞噬指數(shù)，提示TAP對非特異免疫功能有明顯促進(jìn)作用且效果優(yōu)于APS。脾臟與胸腺是機體重要的外周免疫器官，是淋巴細(xì)胞成熟分化和再循環(huán)的重要場所，CTX可使脾淋巴細(xì)胞總數(shù)急劇減少導(dǎo)致小鼠的脾臟和胸腺重量明顯降低，而TAP能明顯拮抗CTX的細(xì)胞毒作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，提高免疫抑制小鼠的脾和胸腺重量及器官指數(shù)，對免疫器官有明顯保護(hù)作用。

T淋巴細(xì)胞(CD3+)可分為輔助T淋巴細(xì)胞(CD4+)和抑制T淋巴細(xì)胞(CD8+)。研究表明，正常小鼠外周血CD4+/CD8+的比值在1～2之間，是評價機體免疫平衡的重要指標(biāo);注射了CTX的小鼠淋巴細(xì)胞總數(shù)降低的同時CD3+比例明顯升高，提示CTX可能對B淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞具有更明顯的細(xì)胞毒作用;而TAP在明顯提高免疫低下小鼠CD3+%和CD8+%的同時也使淋巴細(xì)胞總數(shù)升高，表明TAP在促進(jìn)T細(xì)胞增殖的同時對B細(xì)胞及單核細(xì)胞也具有增殖作用，從而提高機體免疫功能;此外，免疫低下小鼠的CD4+/CD8+比值也明顯高于正常值，高劑量TAP能通過升高CD8+%的同時降低CD4+%，使免疫抑制小鼠CD4+/CD8+明顯降低并接近正常值，表明了TAP可改善CTX引起的機體細(xì)胞免疫功能紊亂，且效果優(yōu)于APS。

溶血素在本研究中即為小鼠被雞紅細(xì)胞(CRBC)致敏后產(chǎn)生的抗CRBC抗體，反映了機體的特異性免疫水平。多糖還可通過提高免疫低下小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ水平，從而活化免疫細(xì)胞，提高機體免疫功能［10-11］。研究表明，高劑量TAP可明顯提高免疫低下小鼠外周血溶血素、IL-2、和IFN-γ水平，由于IL-2具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子，活化巨噬細(xì)胞等作用，提示TAP對免疫反應(yīng)起正調(diào)節(jié)作用;IL-4是促進(jìn)B細(xì)胞增殖的因子，并對免疫反應(yīng)起負(fù)調(diào)節(jié)作用，低劑量TAP表現(xiàn)出對IL-4的產(chǎn)生具有明顯的抑制作用。

脾淋巴細(xì)胞增殖能力是評價機體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)之一。脾臟含有T、B兩種淋巴細(xì)胞，LPS是B淋巴細(xì)胞促分裂因子，而ConA則有明顯地促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分裂的作用。研究表明，高劑量TAP可單獨明顯地促進(jìn)免疫低下小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，并與ConA或LPS有協(xié)同作用，提示TAP對活化的淋巴細(xì)胞具有促進(jìn)其增殖的作用。

以上結(jié)果提示，TAP能對CTX引起的免疫低下小鼠體液及細(xì)胞免疫功能均有促進(jìn)作用，TAP有望成為一種新的安全高效的免疫調(diào)節(jié)劑，其作用機理有待進(jìn)一步研究。

［1］Forland D T，Johnson E，Tryggestad A M，et al.An extract based on the medicinal mushroom Agaricus blazei Murill stimulates monocyte-derived dendritic cells to cytokine and chemokine productionin vitro［J］.Cytokine，2010，49(3):245-50.

［2］Zheng R，Jie S，Hanchuan D，et al.Characterization and immunomodulating activities of polysaccharide from Lentinus edodes［J］.Inter Immunopharmacol，2005，5:811-20.

［3］葉 紅，余為一.藥用真菌葡聚糖免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展［J］.中國藥理學(xué)通報，2009，25(2):153-6.

［3］Ye H，Yu W Y.Progress on the studies of the immunomodulating activity of glucans from macrofungi［J］.Chin Pharmacol Bull，2009，25(2):153-6.

［4］張彩鳳，田莉瑛，張雪梅，等.真菌多糖免疫調(diào)節(jié)活性的研究進(jìn)展［J］.生命科學(xué)儀器，2008，6(10):17-22.

［4］Zhang C F，Tian L Y，Zhang X M，et al.Recent studies on immunomodulating activity of fungal polysaccharide［J］.Life Sci Instruments，2008，6(10):17-22.

［5］馮 寧，吳海嬰，陳光明，等.高血脂癥小鼠模型腹腔注射雞樅多糖的研究［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6(11):862-3.

［5］Feng N，Wu H Y，Chen G M，et al.Effects of collybia albuminsa polysaccharide by celiac injection on reducing lipid in experimental hyperlipidemia mice［J］.Laboratory Med Clin，2009，6(11):862-3.

［6］王一心，狄 勇，楊桂芝.雞樅菌在大鼠高膽固醇血癥中的抗氧化作用［J］.中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2005，6(1):10-2.

［6］Wang Y X，Di Y，Yang G Z.Antioxidation of termitomyces albuminosus in hypercholesterolemia rats［J］.China Prevent Med，2005，6(1):10-2.

［7］李 榮，李 俊，胡成穆，等.橙皮苷對免疫功能低下小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的實驗研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2007，23(2):169-72.

［7］Li R，Li J，Hu C M，et al.Immunomodulative effect of hesperidin on immunodepressed mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23(2):169-72.

［8］楊 穎，蔡 玟，黃志彪，等.環(huán)磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立與評價［J］.中國公共衛(wèi)生，2008，24(5):581-3.

［8］Yang Y，Cai W，Huang Z B，et al.Establishment and evaluation of immunosuppressive model in mice influenced by cyclophosphamide［J］.Chin J Public Health May，2008，24(5):581-3.

［9］胡成穆，陳 琳，李 榮，等.豹皮樟總黃酮對免疫低下小鼠免疫功能的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2007，23(6):804-8.

［9］Hu C M，Chen L，Li R，et al.Immunomodulatory property of total flavonoids from Litsea coreana leveille on immunosuppressive mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23(6):804-8.

［10］王洪武，姜美杰，趙海霞，等.竹節(jié)參皂苷與多糖組合物對免疫低下小鼠免疫功能的影響［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2010，31(20):2620-2.

［10］Wang H W，Jiang M J，Zhao H X，et al.Immunomodulatory effects of saponin-polysaccharide and Panax japonicus composition on cyclophosphamide induced immunosuppressed mice［J］.Guangdong Med J，2010，31(20):2620-2.

［11］牛曉暉，紀(jì)鳳蘭，張 偉，等.云芝多糖對小鼠細(xì)胞因子的影響［J］.中國免疫學(xué)雜志，2006，22:1124-7.

［11］Niu X H，Ji F L，Zhang W，et al.Influence of CVPS on IL-1，IL-2，IFN-γ and TNF［J］.Chin J Immunol，2006，22:1124-7.