關(guān)于儲藏物螨類兩種標本制作方法比較的研究

殷 凱 ，王慧勇

（淮北職業(yè)技術(shù)學(xué)院 醫(yī)學(xué)系 ，安徽 淮北 235000）

儲藏物螨類又叫倉儲螨類，至今我國已發(fā)現(xiàn)大約100種左右。全世界已知蜱螨約5萬種，估計以后將達到50萬種以上［1～4］。制作出良好的螨蟲玻片標本，對螨蟲的鑒定以及新種的發(fā)現(xiàn)有極其重要的作用［5］。筆者在調(diào)查儲藏食物螨類時，由于分離的螨蟲較多，很多螨蟲來不及制作玻片標本，而暫放入保存液中。經(jīng)過不同保存液保存的螨蟲制作的玻片標本可能在標本質(zhì)量上發(fā)生改變。為此我們用70%乙醇和MA80液分別對螨蟲進行保存，觀察螨蟲在保存液中變化以及對玻片標本制作的影響，探討兩種制作方法的應(yīng)用價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

根據(jù)所采集的樣本的形狀和性質(zhì)特性，采用振篩分離法和光照驅(qū)螨法從儲藏食物（如：面粉，大米，玉米等）中分離出螨蟲2000只。

面粉類粉末狀樣本采用光照驅(qū)螨法：選平底搪瓷盤上墊一張黑紙，將面粉平鋪在黑紙上，厚度不超過1cm。將樣本置于光照下3～5分鐘，螨蟲受光線刺激向黑紙板下爬，把樣本輕輕地拍轉(zhuǎn)到下方，用毛發(fā)針將螨挑出。

玉米類固體狀樣本采用振篩分離法：通常選用40～160目／寸的分樣篩。在最上面的分樣篩內(nèi)放樣本，蓋上篩蓋，放在電振動篩機上。如沒有電振動篩機，也可手執(zhí)分樣篩分離螨。本試驗主要用60目／寸的分樣篩對螨蟲進行分離。取篩網(wǎng)下的阻留物，置連續(xù)變倍顯微鏡下，用毛發(fā)針將螨蟲挑出；或者對阻留物進行光照驅(qū)螨法分離螨蟲。

1.2 保存方法

將分離出的2000只螨蟲分別放入70%乙醇和MA80液（MA80＝醋酸︰甲醇︰蒸餾水＝2︰2︰1）保存。在保存8h、16h、24h時觀察保存液中螨蟲是否發(fā)生蟲體萎縮和足彎曲現(xiàn)象。

1.3 玻片標本制作

用玻璃棒取一些封固劑滴加在載玻片中央2～3滴，將上述保存24h，且形態(tài)良好的螨蟲各100只移至含有封固劑的玻片上，加蓋玻片。封固劑要適量，以蓋玻片正好鋪滿不外溢為宜。對背部隆起的螨蟲，可在封固劑中放入3～4塊碎蓋玻片再加蓋玻片，以免標本被壓碎或變形。用酒精燈加熱玻片標本，當封固劑出現(xiàn)氣泡或開始沸騰時，停止加熱，冷卻即可。觀察標本中螨蟲的伸展情況。

2 結(jié)果

螨蟲浸在70%乙醇中，很快就沉入液底，但浸在MA80液中螨蟲大多浮在液體表面。同時浸在兩種保存液的螨蟲，短期內(nèi)蟲體不發(fā)生變化；超過24h，浸在70%乙醇中螨蟲蟲體萎縮且足明顯向內(nèi)彎曲，而在MA80液中的螨蟲很少發(fā)生這種形態(tài)變化。詳見表1。

用70%乙醇保存的螨蟲制作的玻片標本，即使加熱也很難使蟲體和足伸展；而用 MA80液保存的標本，只有小部分的蟲體和足不能完全伸展。詳見表2。

表1 兩種保存液中螨蟲形態(tài)改變的比較

表2 兩種保存液對玻片標本制作影響的比較

3 討論

玻片標本能避免標本相關(guān)的信息的流失，確保標本的保存品質(zhì)和壽命。尤其是避免了標本與其它物件的接觸，延長標本的儲藏年限。因此玻片標本被廣泛應(yīng)用在科研和教學(xué)上，是一種即傳統(tǒng)而又十分實用的方法［6］。

本文用70%乙醇和MA80液對標本進行保存，發(fā)現(xiàn)螨蟲在投入保存液的姿勢不同。特別是在MA80液中，螨蟲浮在液面上，這樣在下次浸入螨蟲時會對浮在液面上的螨蟲進行積壓，導(dǎo)致下層螨蟲壓損。同時長期浸漬在保存液中螨蟲，隨著保存液的蒸發(fā)留在玻璃管壁的螨蟲會干燥破裂，因此螨蟲在MA80液中不宜長期保存。而用70%乙醇保存的螨蟲可避免此現(xiàn)象發(fā)生。

通過對兩種保存液不同時間段螨蟲形態(tài)改變的觀察發(fā)現(xiàn)16小時內(nèi)兩者對螨蟲形態(tài)改變差異無顯著性（▲.＝2.68，P＞0.05）；16小時以后保存在70%的乙醇螨蟲有53.3%的足明顯地向內(nèi)側(cè)彎曲，在MA80液保存的螨蟲只有5.4%有此種現(xiàn)象，兩種差異顯著性（▼.＝553.25，P＜0.01）；同時兩者在24小時內(nèi)對螨蟲形態(tài)的改變差異也有顯著性（★.＝548.38，P＜0.01），說明 MA80液能將儲藏物螨蟲以很好狀態(tài)固定。

在相同的條件下，兩種保存液保存的螨蟲對以后玻片標本的制作也有影響。MA80液保存的螨蟲制作的玻片標本明顯地好于70%乙醇保存的螨蟲，差異有顯著性（.＝35.16，P＜0.01）?？赡艿脑颍?0%的乙醇能很快使螨蟲脫水變形；MA80液保存的螨蟲體內(nèi)含有微氣泡，使螨蟲保持一定的柔軟性。

本文結(jié)果表明70%乙醇和MA80液保存液對儲藏物螨類的保存各有優(yōu)缺點。要根據(jù)當時的情況選擇適宜的保存液，例如：短期內(nèi)的保存可單獨用MA80液；但長期的保存可先用MA80液，過數(shù)周后用70%的乙醇置換或者直接用70%的乙醇進行保存。

［1］Cotter M，Siebers R，Pike A，et al.Storage mites in flour samples in Wellington，New Zealand［J］.J Investig Allergol Clin Immunol，2011，21（5）：410－411.

［2］Cevzc Bostan K，et al.A view of mites infestation on cheese and stored foods in terms of public health［J］.Turkiye Parazitol Derg，2010，34（3）：191－199.

［3］朱萬春，諸葛洪祥.居室內(nèi)粉螨孳生及分布情況［J］.環(huán)境與健康，2007，24（4）：210－212.

［4］王慧勇，沈靜，宋富春，等.淮北地區(qū)倉儲環(huán)境中粉螨的群落及季節(jié)消長［J］.環(huán)境與健康，2009，26（12）：1119－1120.

［5］王明春.昆蟲標本的制作［J］.陜西林業(yè)科技，2000（3）：40－43.

［6］繆峰，劉永春，等.現(xiàn)場調(diào)查寄生蟲標本的收集、固定和保存方法［J］.中國寄生蟲學(xué)和寄生蟲病，2002，20（6）：379.