HPLC測定藏藥川西千里光中綠原酸的含量

孫 楠 王海英 孫躍寧 杜連平

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司，青海 西寧 810007)

千里光屬(Senecio L.)是菊科(Compositae)中最大的屬，也是整個植物界最大的屬之一，全屬共有1500個種以上，我國有160余種，主要分布于陜西、甘肅、青海等地［1，2］。藏藥川西千里光(Senecio solidagineus Hand.－Mazz.)藏藥名葉格興，系菊科千里光屬植物，多年生草本，產(chǎn)西藏(拉薩、朗縣、米林、波密、八宿、松宗、則當(dāng)、隆子)、四川西南部(巴塘、道孚、茂縣)、云南(德欽)。生于海拔2900～2900m開曠陽坡。具有清熱解毒治瘡、接骨，清肝膽諸熱等功效，花序或全草入藥，主治傷口發(fā)炎、腫脹、急性結(jié)膜炎、皮炎、瘡癤、跌打損傷等癥［3］?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，其主要成分為黃酮類、倍半萜類成分等［4，5］。為了有效地控制川西千里光的質(zhì)量，本文建立了綠原酸的HPLC定量的方法，為川西千里光的研究和開發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:KQ－2500型超聲波清洗器;島津LC－20AT高效液相色譜儀;電子天平。

1.2 試藥:川西千里光(購于青海九康藥材公司，批號:20120801，20120802，20120803);綠原酸對照品(批號:110753－200413，購自中國藥品生物制品鑒定所);雙蒸餾水(自制);乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈－0.5%磷酸溶液(15∶85)為流動相;檢測波長327nm［6］。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于5000。在上述條件下，綠原酸的保留時間在8min左右，且無雜質(zhì)干擾，分離度良好(圖1)。

圖1 綠原酸對照品及供試品圖譜

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:取綠原酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液1mL，置10mL容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，作為供試品溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍:精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10、12μL注入液相色譜儀測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得綠原酸回歸方程為Y=20275X+973，r=0.9999。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，綠原酸在0.042～0.252μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗:吸取對照品溶液10μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果對照品的 RSD為0.88%(n=6)，說明儀器性能良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗:吸取同一供試品溶液10μL，于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果供試品的RSD為0.95%(n=5)，說明測定時間內(nèi)供試品穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗:取同一批號樣品5份，分別按樣品溶液制備法制備，測定其綠原酸峰面積值，其結(jié)果樣品中綠原酸平均含量為 6.8mg·g－1，RSD 為0.93%(n=5)，表明分析方法精密度良好。

2.7 加樣回收率試驗:取已知含量的樣品6份，分別精密加入濃度為0.2125mg·mL－1的綠原酸對照品溶液5mL，按含量測定方法操作制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定，計算得綠原酸平均回收率為96.51%，RSD為0.62%(n=6)。結(jié)果見下表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.8 樣品的測定結(jié)果:按上述色譜條件，依法測定3批樣品中綠原酸的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中綠原酸的含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 本試驗考察了綠原酸的提取方法，對樣品進(jìn)行了回流提取和超聲提取對比研究，結(jié)果以超聲提取方法簡便快速、效果最好，可消除對待測成分的干擾并且綠原酸含量較高。

3.2 由方法學(xué)考察結(jié)果可見，本法具有回收率高、精密度好、重現(xiàn)性好、分析快速的優(yōu)點，色譜峰之間能有效的分離，方法可行，可用于川西千里光的質(zhì)量控制。

［1］中國植物志編委會.中國植物志［M］.第76卷.北京:科學(xué)出版社，1979:55

［2］李笑顏.藏藥川西千里光化學(xué)成分的研究［D］.蘭州:蘭州理工大學(xué)，2010

［3］中國科學(xué)院西北高原生物研究所.藏藥志［M］.西寧:青海人民出版社，1991:322

［4］楊愛梅，李笑顏，馮艷.藏藥川西千里光中倍半萜類成分的研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報.2011，39(5):66－68

［5］楊愛梅，李笑顏，李玉蘭.藏藥川西千里光中黃酮類成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定［J］.中成藥.2012，03

［6］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.中國醫(yī)藥文化社，2010:205－206