藏藥前列寧膠囊中沒(méi)食子酸的含量測(cè)定

陳海蓮 杜連平 王金霞 賀世娟

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)有限公司，青海 西寧 810003)

藏藥前列寧膠囊由菥蓂子、石韋、蒲公英、刺柏、訶子、刀豆等13味中藥組成，具有清熱解毒，化瘀通淋等功效，用于熱毒瘀阻所引起的尿頻、尿急、尿痛屬中醫(yī)淋證者。本文采用高效液相色譜法，測(cè)定了前列寧膠囊中沒(méi)食子酸含量，方法簡(jiǎn)便、快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

LC－10AT高效液相色譜儀;SPD－M10A vp型紫外檢測(cè)器;CLASS－VP工作站;電子天平;沒(méi)食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，純度99%以上，供含量測(cè)定用，批號(hào)110831－200302);甲醇、四氫呋喃為色譜純，水為重蒸餾水;其余試劑為分析純。前列寧膠囊 批號(hào)為:20110216。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 分析溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備:精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品0.0109g，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取上述沒(méi)食子酸溶液1mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含沒(méi)食子酸21.8μg)。

2.1.2 供試品溶液制備:取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取1g，精密稱定，加甲醇30mL，超聲處理60min，濾過(guò)，用少量甲醇分次洗滌濾渣及濾器，洗液并入濾液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，作為供試品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照液的制備:按處方比例稱取除訶子以外的其他藥材適量，依照前列寧膠囊的制備工藝和供試品溶液的制備方法，制得陰性對(duì)照溶液。

2.2 分析方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱:Shim－pack C18柱(150×4.6mm)。流動(dòng)相:甲醇－四氫呋喃－冰乙酸－水(0.08:0.64:2:97.28)為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng):273nm;柱溫:35℃;流速為1mL/min。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算不低于1500。

2.2.2 陰性干擾實(shí)驗(yàn):按照處方比例，取除去訶子的陰性樣品溶液，按樣品測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性樣品在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上無(wú)吸收峰。說(shuō)明處方中其它成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響(見(jiàn)圖1)，專屬性好。

圖1 :陰性干擾實(shí)驗(yàn)液相色譜圖(上:沒(méi)食子酸對(duì)照品圖譜中:前列寧膠囊樣品圖譜下:前列寧膠囊陰性對(duì)中樣品圖譜)

2.2.3 線性范圍考察:分別精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液4、8、12、16、20μL 注入液相色譜儀，在上述色譜條件下，測(cè)定峰面積積分值，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)上述測(cè)定數(shù)據(jù)，求得回歸方程:沒(méi)食子酸:Y=67562X －2963 r=0.999，表明沒(méi)食子酸在 0.0872 ～0.436μg之間進(jìn)樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察

2.2.4 精密度試驗(yàn):精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得沒(méi)食子酸峰面積積分值，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)

2.2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn):按擬定的含量測(cè)定方法，取同一批號(hào)(20110216)的樣品5份，按2.1.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，計(jì)算沒(méi)食子酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液及同一供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，每隔一定的時(shí)間測(cè)定各峰面積值，結(jié)果見(jiàn)表4。表明沒(méi)食子酸及供試品溶液均在8h內(nèi)以沒(méi)食子酸峰面積積分值穩(wěn)定。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.2.7 加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知沒(méi)食子酸含量的樣品3份(批號(hào)20110216，沒(méi)食子酸含量0.20mg/粒)適量，分別加入3種不同量的沒(méi)食子酸對(duì)照品，揮去溶劑后按2.1.2項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定沒(méi)食子酸的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2.8 樣品測(cè)定:取3個(gè)批號(hào)的樣品，按2.1.2項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，精密吸取該溶液10μL，注入液相色譜儀按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算沒(méi)食子酸的含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

曾采用乙腈 －0.01 mol/L 磷酸溶液(5∶100)［1］、甲醇－0.1%磷酸(6:94)［2］為流動(dòng)相，結(jié)果分離效果欠佳，分離度不好。經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定采用以甲醇－四氫呋喃－冰醋酸－水(0.08:0.64:2:97.28)為流動(dòng)相，結(jié)果顯示，此流動(dòng)相分離度好，陰性無(wú)干擾。曾采用HPLC法對(duì)方中訶子中的β－谷甾醇［3］的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有干擾，最終確定了以甲醇 －四氫呋喃 －冰醋酸 － 水(0.08:0.64:2:97.28)為流動(dòng)相測(cè)定沒(méi)食子酸的含量，結(jié)果分離度好、方法準(zhǔn)確快速能夠有效控制制劑的質(zhì)量。

［1］孫立立，江波，袁振海，等.HPLC測(cè)定地榆飲片中沒(méi)食子酸的含量［J］.中成藥，2006，(8);57 －60.

［2］聶少平，王遠(yuǎn)興，謝明勇，等.高效液相色譜法測(cè)定猴耳環(huán)消炎膠囊中沒(méi)食子酸的含量［J］.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2003，(2);3 －4.

［3］付煜萊，張萬(wàn)明，陳桂敏，等.景天三七中沒(méi)食子酸和總酚酸含量測(cè)定［J］.中成藥，2006，(7):85－87.