HPLC法對小米辣中辣椒素含量測定的研究

王海英 孫 楠 孫躍寧

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司，青海 西寧 810003)

小米辣，藏名子扎嘎，為茄科植物小米辣Capsicum frutescens L.的干燥成熟果實。圓錐形或紡錘形，常帶有宿萼及果柄，長1 ～3.8cm，粗徑0.4 ～0.9cm。表面紅色或橙紅色，稍嫩者黃綠色至青綠色，有光澤，具不同程度的皺縮。氣特異，具催嚏性，味極辛辣。秋季果熟時采收，曬干。具有祛寒化痞，消食，調(diào)肝益腎。用于食積不化，胃腸肝區(qū)疼痛，腎病，腸病，中毒，風(fēng)寒引起的痞瘤等功效。［1］

小米辣作為藏藥中單方或復(fù)方制劑的開發(fā)應(yīng)用，已有久遠的歷史。為更好的控制小米辣的質(zhì)量，本實驗擬建立小米辣中有效成分辣椒素的含量測定方法?，F(xiàn)另有研究表明，小米辣還可以補充人體必需的 Fe、Zn、Cu、Co、Cr、Ni等微量元素。［2］

1 儀器與試藥

1.1 儀器:KQ－250型超聲波清洗器;島津LC－20AT高效液相色譜儀;電子分析天平。

1.2 試藥:小米辣(購于青海九康藥材公司);辣椒素對照品(批號:110839－200403，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);甲醇為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:用迪馬 C18柱(250mm ×4.6mm，5.0μm);甲醇－水(65:35)為流動相;檢測波長為280nm。理論板數(shù)按辣椒素峰計算應(yīng)不低于2000。在此色譜條件下，辣椒素對照品及樣品的色譜圖見圖1。

圖1 小米辣HPLC圖

2.2 溶液的制備［3、4］

2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取辣椒素對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品粉末1g，精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.2.3 提取方法考察:對樣品采取不同的制備方法進行處理、結(jié)果以超聲處理效果最好，可消除對所有待測組分的干擾并且含量較高。結(jié)果見表1。［5］

表1 提取方法考察試驗結(jié)果(n=6)

2.2.4 標準曲線與線性范圍:精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10μL 注入液相色譜儀測定，按2.2.1 項下的色譜條件測定峰面積，以進樣量為橫坐標(X)，以峰面積的積分值為縱坐標(Y)繪制標準曲線。得辣椒素的回歸方程為Y=59406.6X+30297.4，r=0.9996。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，辣椒素在0.22～1.1μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗:精密吸取辣椒素10μL，在上述色譜條件下分別連續(xù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果辣椒素RSD為0.85%，說明儀器性能良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗:精密吸取辣椒素10μL，分別于0、2、4、6、8h進樣，測定峰面積，結(jié)果辣椒素的RSD分別為0.59%，說明測定時間內(nèi)供試品穩(wěn)定。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗:取同一批號樣品5份，分別按樣品溶液制備法制備，測定辣椒素峰面積值，其結(jié)果樣品中辣椒素平均含量為 0.063mg/g－1，RSD 為 0.62%(n=5)，表明分析方法精密度良好。

2.2.8 加樣回收率試驗［6］:取已知含量的樣品6份，分別精密加入辣椒素對照品溶液，按含量測定方法操作制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見下表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果(n=5)

表3 樣品的含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 小米辣［7］，不僅作為藥品用來為我們治療疾病［8］，而且還被用作調(diào)味品，出現(xiàn)在我們的日常生活中;研究還發(fā)現(xiàn)它還可以補充人體必需的微量元素［9－10］。本實驗表明，此方法線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均良好，該方法適用于小米辣中辣椒素的含量測定。

3.2 本實驗中，對樣品的制備方法進行研究，發(fā)現(xiàn)超聲處理的提取方法提取率較高，且方法簡便、快捷，故采用該方法處理樣品;并用甲醇－水(65:35)為流動相時，色譜峰對稱性好，干擾小。本實驗建立了高效液相色譜法測定小米辣中辣椒素的含量，該法簡便、靈敏、準確，可有效地控制小米辣的產(chǎn)品質(zhì)量。

［1］青海省藏藥標準［S］.1992.

［2］王寶森，白紅麗，等.云南金平小米辣微量元素含量分析［J］.食品科技，2010.

［3］潘永峰，盧玉斌，等.HPLC法測定辣椒中辣椒堿的含量［J］.中國藥品標準，2006，7(5):47 －48.

［4］陸文瑾，華新農(nóng)，等.辣椒風(fēng)濕膏質(zhì)量標準研究［J］.國際中醫(yī)中藥雜志，2006，7(2):214 －216.

［5］魏永鋒，閆宏濤.反相高效液相色支測定卡斯舒中桂皮酸及辣椒素含量［J］.藥物分析雜志.

［6］朱亦赤，劉志敏.辣椒素類物質(zhì)的測定、提取及應(yīng)用研究進展［J］.辣椒雜志;2007，1

［7］昆明植物研究所.小米辣.中國高等植物數(shù)據(jù)庫全庫.中國科學(xué)院微生物研究所.［2009－02－26］

［8］陳龍.云南十種辣椒抗氧化及抑菌活性的研究［J］.昆明理工大學(xué)，2010，12 －01.

［9］王寶森，等.云南食品拿刀辣與小米辣礦質(zhì)元素含量分析［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，6

［10］白紅麗，郭俊明，張虹，等.紅河州小米辣中礦物元素比較［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，5