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    基于CYP450酶系對比研究香附與來曲唑?qū)Υ笫舐雅莅l(fā)育的影響及其機制

    2013-11-27 07:44:08周婷
    關(guān)鍵詞:動情周期芳香化曲唑

    周婷

    (湖南省長沙市中醫(yī)院 長沙410100)

    近年來第三代芳香化酶抑制劑來曲唑在促排卵中的應用愈來愈受到關(guān)注,其可阻斷雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素,降低雌激素濃度,從而增加促性腺激素的分泌而促進卵泡發(fā)育。臨床研究也表明中醫(yī)中藥可以促卵泡發(fā)育及排卵,其中香附使用率高,因香附有“氣中之司,婦科之帥”之稱,為婦科調(diào)經(jīng)之要藥。筆者通過動物實驗對比觀察香附與來曲唑?qū)β殉步M織P450arom的影響,探討香附的作用靶點和作用機制,以更好地指導臨床用藥。

    1 資料與方法

    1.1 實驗材料

    1.1.1 實驗動物 清潔級成熟雌性SD大鼠48只,購自上海斯萊克實驗動物中心 [許可證號:SCXK(滬)2009-0005號],周齡 6周,體重 180~200 g,平均(192±10)g。每日定時作陰道涂片檢查,選擇動情周期4~5 d,連續(xù)兩個正常動情周期的大鼠用于實驗。全部動物均于湖南中醫(yī)藥大學普通動物房飼養(yǎng),恒溫22℃,12h光照,12h黑暗交替,自由攝取食物和水。

    1.1.2 實驗藥物及主要試劑 來曲唑(芙瑞):2.5 mg/片(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司,購自湖南中醫(yī)附一醫(yī)院,產(chǎn)品批號09061656);醋香附中藥配方顆粒:0.5g/袋,每袋相當于中藥飲片10 g(廣東一方制藥有限公司,購自湖南中醫(yī)附一醫(yī)院,產(chǎn)品批號0908044);Aromatase試劑盒(購自于武漢博士德有限公司)。

    1.2 實驗方法 將具有規(guī)律動情周期的48只清潔級雌性SD大鼠按隨機排列表法分為四組并編號:A組:空白對照組(12只);B組:香附組(12只);C組:來曲唑組(12只);D組:香附+來曲唑組(12只)。同步化大鼠性周期后于大鼠的第一個性周期的動情前期開始灌胃,用藥劑量按照人與大鼠用藥劑量換算公式計算,分別溶于2 mL蒸餾水溶液中對大鼠進行灌胃:A組:蒸餾水溶液10 mL/kg灌胃;B組:香附水溶液10 mL/kg灌胃,藥物濃度為0.1 g/mL(取人1 d用藥劑量10倍實驗);C組:來曲唑水溶液10 mL/kg灌胃,藥物濃度為0.025 mg/mL;D組:來曲唑水溶液10 mL/kg+香附水溶液10 mL/kg灌胃。每日同一時間灌胃一次,持續(xù)灌胃9 d后斷頭處死,取卵巢標本行免疫組化和HE染色。各級卵泡采用計數(shù),免疫組織化學結(jié)果采用平均灰度值。

    1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS15.0軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料采用χ2檢驗,計量資料以(±S)表示,采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    B、C、D三組均可增加大鼠次級卵泡數(shù)目,其中C組較B組增加更多,D組則多于C組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);B、C、D三組均能抑制卵巢顆粒細胞中P450arom的表達,其中D組和C組的抑制效果最強,而B組作用優(yōu)于A組但弱于C組。見表1。

    表1 各組大鼠次級卵泡計數(shù)及卵巢組織P450arom的表達 (±S)

    表1 各組大鼠次級卵泡計數(shù)及卵巢組織P450arom的表達 (±S)

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    3 討論

    第三代芳香化酶抑制劑是治療絕經(jīng)期乳腺癌的內(nèi)分泌新藥,其中來曲唑在促排卵中的應用愈來愈受到關(guān)注。臨床用于促排卵一般在月經(jīng)周期第3~7天,2.5 mg/d,口服,其通過與亞鐵血紅蛋白中的鐵原子結(jié)合,與內(nèi)源性底物競爭芳香化酶的活性位點,從而可逆地抑制該酶的活性,選擇性抑制雌激素生物合成,有效地阻斷雄烯二酮及睪酮向雌激素轉(zhuǎn)化,且只降低體內(nèi)雌激素水平,而不影響其他甾體激素生物合成[1]。香附味辛、微苦、微甘、平,歸肝、脾、三焦經(jīng),有行氣解郁、調(diào)經(jīng)止痛之功效。現(xiàn)代藥理研究表明,香附具有雌激素樣作用,可使子宮平滑肌松弛,皮下注射或陰道內(nèi)給藥,以子香烯的作用最強,可出現(xiàn)陰道上皮細胞完全角質(zhì)化,此可能是治療月經(jīng)不調(diào)的主要理論依據(jù)之一[2]。臨床研究表明中醫(yī)中藥調(diào)經(jīng)以促卵泡發(fā)育、促排卵療效確切、可提高妊娠率的中藥為主,其中香附使用率高,其能解氣、血、痰、火、濕、食六般郁邪,調(diào)經(jīng)常配合當歸、川芎、熟地、紅花、川楝子、桃仁等,因此香附為婦科調(diào)經(jīng)之要藥。在卵巢內(nèi)部,由于p450arom受抑制,使雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素受阻,導致雄激素在卵泡內(nèi)短暫積聚,從而增強FSH受體的表達并促使卵泡發(fā)育。說明P450arom在卵泡發(fā)育和排卵過程中起著重要作用,是卵泡發(fā)育和排卵的關(guān)鍵機制之一。本研究從卵泡數(shù)目、卵巢組織P450arom方面對比觀察香附和來曲唑?qū)Υ笫舐雅莅l(fā)育及排卵的影響,以探索香附調(diào)經(jīng)的作用靶點及其機制。實驗結(jié)果表明:(1)香附和來曲唑都可促進大鼠卵泡發(fā)育;(2)香附和來曲唑均能下調(diào)卵巢組織P450arom表達,以促進卵泡發(fā)育和排卵;(3)通過香附與來曲唑?qū)Υ笫舐殉步M織P450arom的表達,進一步推測兩者促卵泡發(fā)育可能具有相同的作用靶點和作用機制。

    [1]Kilic-Okman T,Kucuk M,Altaner S.Comparison of the effects of letrozole and clomiphene citrate on ovarian follicles,endometrium,and hormonelevelsin therat[J].Fertil Steril,2003,80(6):1 330-1 332

    [2]王潔琳,鄭志群.第三代芳香化酶的促排卵作用的研究進展[J].醫(yī)學綜述,2007,13(15):1 176-1 178

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