張 雅 王劍波 李穆瓊 曹 蔚 王四旺
第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系天然藥物學(xué)教研室(西安710032)
復(fù)方地榆栓是由地榆、白及、鐵莧菜、冰片等六味藥材組成的復(fù)方中藥新藥,具有清熱解毒,利濕消腫,止血止痛的功效。2008年獲得國家SFDA臨床批件,現(xiàn)已進(jìn)行三期臨床研究,主要用于內(nèi)痔、外痔、混合痔等引起的便血、腫脹和疼痛。其中冰片,味辛、苦,微寒;功能開竅醒神,清熱止痛[1]。本方主要取其“清熱止痛”之功,可直達(dá)病所,為方中使藥。為更有效控制復(fù)方地榆栓的內(nèi)在質(zhì)量,參考文獻(xiàn)[2,3],本文建立了以氣相色譜法測定復(fù)方地榆栓中冰片的含量,為控制該制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。
1 儀器與試藥 1.1 儀 器 Thermo fisher ISQ型氣相色譜儀,F(xiàn)ID檢測器(美國Thermo fisher公司);Sartorius AG ME235S型電子分析天平(德國Sartorius公司);SK250LHC型超聲波振蕩器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)。
1.2 試藥 冰片對照品(批號為110743-200905)購自中國藥品生物制品檢定所;水楊酸甲酯(批號為110707-201011)購自中國藥品生物制品檢定所;復(fù)方地榆栓樣品(第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所提供);其他試劑均為分析純。
2 色譜條件 采用彈性石英毛細(xì)管柱GsBPINOWAX-MS(柱長30m,內(nèi)徑0.25mm,膜厚度0.25μm);柱溫140℃;進(jìn)樣口溫度220℃,檢測器溫度220℃;分流比為50∶1。
3 方法與結(jié)果 3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取水楊酸甲酯適量,精密稱定,加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度,搖勻即得,濃度為1.90mg/mL的溶液。
3.2 對照品溶液制備 精密稱取冰片對照品80.4mg,置10mL容量瓶中,加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品母液。
3.3 供試品溶液的制備 取復(fù)方地榆栓樣品5粒,切碎,混勻,取1g精密稱定,置25mL具塞錐形瓶中,精密加入內(nèi)標(biāo)溶液 (1.90mg/mL)5mL,超 聲(53KHz)處理30min,取出搖勻,靜置濾過。
3.4 陰性對照溶液的制備 按處方量制備不含冰片的陰性供試品,按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。
3.5 線性關(guān)系 精密量取對照品母液(8.04mg/mL)0.2,0.5,1,1.5,2,2.5mL分別各置于5mL容量瓶中,加入內(nèi)標(biāo)溶液(5.08mg/mL)2mL,加乙酸乙酯至刻度,搖勻。在上述色譜條件下分別精密吸取1μL,注入氣相色譜儀,記錄峰面積。以冰片對照品的濃度為橫坐標(biāo),冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為:y=0.751x-0.0069,相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果表明,冰片對照品在0.3216~4.0200mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1和圖1。
表1 冰片對照品濃度與峰面積值的關(guān)系
3.6 專屬性試驗 取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照溶液,按本文條件分別進(jìn)樣,色譜圖見圖2,結(jié)果表明,本條件下陰性無干擾。
圖1 冰片對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
圖2 對照品溶液、樣品溶液、陰性對照溶液色譜圖
3.7 精密度試驗 精密吸取對照品溶液1μL,按上述色譜條件操作,連續(xù)進(jìn)樣6次,測定冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值,其比值的RSD值為0.23%;精密吸取供試品溶液1μL,按上述色譜條件操作,連續(xù)進(jìn)樣6次,測定冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值,其比值的RSD值為0.26%。結(jié)果見表2。
3.8 穩(wěn)定性實驗 將對照品溶液和供試品溶液,每間隔一定時間(0,2,4,6,8,12h)分別進(jìn)樣1次,對照品中冰片的峰面積與水楊酸甲酯的峰面積的比值的RSD為0.72%;供試品中冰片的峰面積與水楊酸甲酯的峰面積的比值的RSD為0.72%。結(jié)果表明對照品溶液和供試品溶液在12小時內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表3。
表2 精密度試驗結(jié)果
表3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果
3.9 重復(fù)性實驗 取同一批(批號為111101)樣品,按供試品溶液的制備方法,制備6份供試品溶液。按上述色譜條件操作,進(jìn)樣測定結(jié)果;冰片平均含量為1.09%,RSD%為0.31%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性好。結(jié)果見表4。
3.10 回收率實驗 采用加樣回收法,取已測知含量的復(fù)方地榆栓(含量為1.09%),分別添加冰片對照品,按供試品溶液制備法操作,按上述色譜條件進(jìn)行測定,以下式計算回收率,結(jié)果見表5,表明本方法具有良好的回收率。
表4 重復(fù)性試驗結(jié)果
表5 加樣回收率試驗結(jié)果
3.11 含量測定 取復(fù)方地榆栓樣品三批(091103,091104,091105),按照供試品溶液處理方法制備供試液,進(jìn)樣測定,結(jié)果見表6,表明本方法穩(wěn)定。
表6 復(fù)方地榆栓樣品測定結(jié)果
3.12 含量測定限度制定 根據(jù)上述樣品中冰片含量測定結(jié)果及復(fù)方地榆栓重量(1.5g/粒)進(jìn)行計算,樣品中冰片的含量范圍在15.95mg~16.17mg之間,考慮到不同來源的冰片藥材含量有一定的變動范圍,故將本品的含量測定限度暫定為:每粒含冰片的總量不得少于12mg。
4 討 論 用氣相色譜法對本品進(jìn)行含量測定,在不同柱溫130℃、140℃、150℃,不同分流比10∶1、30∶1、40∶1、50∶1及不同流速0.8mL/min、1mL/min、1.2mL/min、1.5mL/min下測定,所得出的保留時間、分離度、對稱性得到一定的改善,當(dāng)柱溫為140℃、分流比為50∶1、流速為1mL/min時,使本品的保留時間確定在12min內(nèi),分離度好,對稱性好。
本實驗分別用乙酸乙酯、石油醚、環(huán)己烷為溶劑對復(fù)方地榆栓中冰片的含量進(jìn)行了測定。結(jié)果表明用乙酸乙酯為溶劑提取的冰片含量較高,故使用乙酸乙酯為溶劑。
本實驗還對溶劑量進(jìn)行了考察,分別在5mL、10mL、30mL條件下進(jìn)行了實驗。結(jié)果表明用5mL提取的冰片含量較高且節(jié)省溶劑。
對提取方法(超聲和搖晃)、超聲時間(10min、20min、30min、45min)進(jìn)行了選擇,根據(jù)結(jié)果,最終選擇了超聲30min進(jìn)行提取。
以上實驗結(jié)果表明,用氣相色譜法對本品中冰片進(jìn)行含量測定,方法簡便、準(zhǔn)確、可靠,可用于該制劑的質(zhì)量控制。
[1]中國藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:136.
[2]張秋瓊,劉文志,張秋菊,等.GC法測定復(fù)方苦參栓中冰片含量.湖北中醫(yī)學(xué)院報,2010,12(5):36-37.
[3]楊亞麗,吳 芳.氣相色譜法測定三七傷藥片中冰片的含量[J].陜西中醫(yī),2011,32(8):1067-1069.