不同菌落形態(tài)鮑曼不動桿菌生物特征的分析

王國戧， 婁婷葉

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科，河南衛(wèi)輝453100)

鮑曼不動桿菌是目前臨床上重要的條件致病菌，其分離率居高不下，并且耐藥性強(qiáng)［1］，使鮑曼不動桿菌的感染在臨床的治療和預(yù)防上成為一個棘手的問題。本研究通過對臨床分離到的不同菌落形態(tài)鮑曼不動桿菌體外生物被膜形成能力和藥物敏感性分析來研究鮑曼不動桿菌生物學(xué)特征，希望能為臨床治療和預(yù)防鮑曼不動桿菌的感染做一些工作。

材料和方法

一、試驗菌株

試驗研究所用的鮑曼不動桿菌來自于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2011年1至6月間住院患者的痰液、分泌物、胸腹水等標(biāo)本，其中痰標(biāo)本均經(jīng)過涂片鏡檢適合用于細(xì)菌培養(yǎng)，即鏡檢白細(xì)胞(WBC)＞25個/低倍視野，上皮細(xì)胞＜10個/低倍視野。我們將試驗菌株分為2組，第1組菌落為黏液型鮑曼不動桿菌，共48株;第2組菌落為非黏液型鮑曼不動桿菌，共64株。

二、方法

1.不同菌落形態(tài)鮑曼不動桿菌生物被膜生成能力檢測 用結(jié)晶紫染色法［2］對臨床分離的不同菌落形態(tài)鮑曼不動桿菌進(jìn)行生物被膜生成能力檢測。具體方法如下:用細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)比濁管將不同組別的鮑曼不動桿菌菌液調(diào)節(jié)至0.5麥?zhǔn)蠞岫?，?0μL加入96孔平底組織培養(yǎng)板中(每孔含200μL 1∶50稀釋的LB培養(yǎng)液)。每株菌做3個復(fù)孔，一個空白對照孔只加培養(yǎng)液，37℃靜止培養(yǎng)48 h;每個菌的3個復(fù)孔中分別加入150μL 0.25 g/L的結(jié)晶紫染液，室溫下染色20 min;生理鹽水沖洗5次后晾干;每孔加入95%乙醇300μL，室溫脫色10 min;用紫外可見分光光度計檢測每孔脫色液在570 nm處的吸光度(A570)值。每個菌的A570值等于其3個復(fù)孔A570值的平均值減去空白對照孔A570值。

2.不同菌落形態(tài)鮑曼不動桿菌體外藥物敏感性試驗 用紙片擴(kuò)散法檢測2組鮑曼不動桿菌體外藥物敏感性，共檢測哌拉西林、替卡西林-克拉維酸、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、安曲南、亞胺培南、阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、復(fù)方磺胺甲口惡唑等14種藥物，結(jié)果判斷參照美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)2011年判斷標(biāo)準(zhǔn)。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，2組鮑曼不動桿菌生物被膜生成能力的差異(A570值)用兩獨立樣本t檢驗，體外藥物敏感性試驗差異用兩樣本率的χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、不同菌落形態(tài)鮑曼不動桿菌生物被膜形成能力檢測

第1組48株黏液型鮑曼不動桿菌生物被膜生成能力檢測結(jié)果為(1.459±0.353);第2組64株非黏液型鮑曼不動桿菌生物被膜生成能力檢測結(jié)果為(0.508±0.248)，2組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

二、不同菌落形態(tài)鮑曼不動桿菌體外藥物敏感性試驗

黏液型和非黏液型鮑曼不動桿菌對常用的10余種抗菌藥物除亞胺培南、替卡西林-克拉維酸、妥布霉素、安曲南外，體外耐藥率都超過了50%。除替卡西林-克拉維酸外，2組鮑曼不動桿菌對其他抗菌藥物的耐藥率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 2組鮑曼不動桿菌的體外耐藥情況比較［株(%)］

討 論

鮑曼不動桿菌是一種臨床常見的條件致病菌，在非發(fā)酵菌種中是僅次于銅綠假單胞菌的第2位條件致病菌。臨床上分離到的鮑曼不動桿菌依據(jù)菌落形態(tài)的不同分為黏液型鮑曼不動桿菌和非黏液型鮑曼不動桿菌。本研究通過研究2種菌落形態(tài)的鮑曼不動桿菌在體外生物被膜的形成能力和體外藥物敏感性試驗發(fā)現(xiàn)，黏液型鮑曼不動桿菌的生物被膜形成能力顯著高于非黏液型(P＜0.05)。銅綠假單胞菌主要成分是細(xì)菌分泌到體外的多糖復(fù)合物，而復(fù)合物的主要成分是藻酸鹽，藻酸鹽加強(qiáng)了菌體與固體表面的黏附，這有利于生物被膜的形成，鮑曼不動桿菌的黏液型菌落主要成分是否也是由多糖復(fù)合物組成，這些多糖復(fù)合物的主要成分是否也是藻酸鹽，有待進(jìn)一步研究。

關(guān)于2種菌落形態(tài)的鮑曼不動桿菌的體外藥物敏感性試驗，我們的研究結(jié)果表明，除了亞胺培南、替卡西林-克拉維酸、妥布霉素、安曲南外，2種鮑曼不動桿菌對10余種抗菌藥物都有較高的耐藥率，耐藥率在50%以上，并且除了替卡西林-克拉維酸外2種菌落形態(tài)的鮑曼不動桿菌的體外耐藥率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，也就是說生物被膜的形成并不影響細(xì)菌在體外的藥物敏感性。關(guān)于這一點我們的試驗結(jié)果和部分國內(nèi)外的報道有差異。部分國內(nèi)和國外的研究報道稱生物被膜形成能力和體外藥物敏感性結(jié)果呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系［3-4］，但是也有部分研究稱生物被膜形成能力和體外藥物敏感性結(jié)果呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系［5-6］，各種關(guān)于細(xì)菌生物被膜形成能力和體外藥物敏感性結(jié)果的關(guān)系研究呈現(xiàn)不一致甚至相反的結(jié)論，說明細(xì)菌生物被膜形成能力和體外藥物敏感性結(jié)果并沒有必然聯(lián)系。之所以出現(xiàn)相反的結(jié)論我認(rèn)為與以下因素有關(guān):這些不同結(jié)果的標(biāo)本來自不同的地域和國度，因此這些細(xì)菌面臨的生存環(huán)境和抗菌藥物抑制不盡相同，可能導(dǎo)致了上述不同甚至相反的結(jié)論;再者各家報道的細(xì)菌來源是否可以代表他們所在的區(qū)域，如果他們所用的細(xì)菌標(biāo)本受來源的限制，只代表很小范圍來源的細(xì)菌，那就不具有普遍性，這也可能會產(chǎn)生一些誤差。

了解細(xì)菌生物被膜的形成能力對指導(dǎo)臨床治療細(xì)菌感染有很重要的價值。細(xì)菌一旦形成生物被膜，其在體內(nèi)耐藥性將大幅度增加，這一現(xiàn)象已是共識，并且生物被膜是形成慢性持續(xù)性細(xì)菌感染的重要原因。

綜上所述，通過本研究我們知道了黏液型鮑曼不動桿菌具有很強(qiáng)的生物被膜形成能力，因此我認(rèn)為，臨床微生物工作人員在向臨床報告微生物鑒定和藥物敏感性結(jié)果的同時應(yīng)告知臨床鮑曼不動桿菌的菌落形態(tài)特征，這樣可以提醒臨床醫(yī)師在選擇對鮑曼不動桿菌敏感抗菌藥物的同時，采用適當(dāng)?shù)姆椒A(yù)防生物被膜的形成，這樣可減少鮑曼不動桿菌慢性持續(xù)性感染的發(fā)生率。

［1］岳文香，黃紹光，饒 潔，等.重癥監(jiān)護(hù)室鮑曼不動桿菌的分子流行病學(xué)［J］.中華傳染病雜志，2002，20(2):43-45.

［2］楊維青，劉曉峰，黃 震.銅綠假單胞菌臨床菌株生物被膜的定量分析［J］.中國抗生素雜志，2009，34(3):181-183.

［3］孟 婕，胡成平，羅百靈.臨床分離銅綠假單胞菌mucA基因突變與藻酸鹽合成的關(guān)系［J］.中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2009，52(12):1196-1201.

［4］王 政，劉 丁，黃冬梅，等.鮑曼不動桿菌臨床分離株生物被膜形成能力與耐藥性的研究［J］.中國病原生物學(xué)雜志，2010，23(6):405-407.

［5］Rodríguez-Ba?o J，MartíS，Soto S，etal.Biofilm formation in Acinetobacter baumannii:associated features and clinical implications［J］.Clin Microbiol Infect，2008，14(3):276-278.

［6］Hassan A，Usman J，Kaleem F，etal.Detection and antibiotic susceptibility pattern of biofilm producing Gram positive and Gram negative bacteria isolated from a tertiary care hospital of Pakistan［J］.Malaysian J Microbiol，2011，7(1):57-60.