梅毒患者氧化應(yīng)激反應(yīng)的研究

魏 娟， 程 江， 馬雅靜， 曹文疆， 張麗翠

(新疆石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆石河子832008)

梅毒是一種由蒼白密螺旋體引起的浸潤(rùn)多組織和慢性感染的性傳播疾病。目前已成為我國(guó)發(fā)病率最高的性傳播疾病，是我國(guó)重點(diǎn)防治的性傳播疾病之一。近年來越來越多的研究表明人體疾病的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體的氧化應(yīng)激狀態(tài)密切相關(guān)［1-2］。梅毒是一個(gè)多階段累及各系統(tǒng)的疾病，所有的臨床表現(xiàn)都是長(zhǎng)期慢性炎癥反應(yīng)的一個(gè)過程，處于慢性氧化應(yīng)激狀態(tài)［3］。氧化應(yīng)激對(duì)梅毒患者造成的病理?yè)p害可能有多方面的影響，包括免疫功能喪失、氧化應(yīng)激破壞各種生物分子誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等。目前科學(xué)家在病毒性感染疾病的控制上已有嘗試應(yīng)用抗氧化劑作為治療手段［2］。因此，通過氧化應(yīng)激指標(biāo)反映梅毒感染患者體內(nèi)的疾病發(fā)展過程，對(duì)梅毒的診斷和治療有著十分重要的價(jià)值。為深入了解梅毒患者氧化應(yīng)激狀態(tài)，我們檢測(cè)了血漿超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、隱性氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)、硫氧還原蛋白(TRX)水平，探討氧化應(yīng)激指標(biāo)在梅毒病程中的變化情況，為梅毒的診斷和治療提供更加有力的證據(jù)。

材料和方法

一、研究對(duì)象

選取2011年8月至2012年9月期間來新疆石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的經(jīng)過相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)合臨床表現(xiàn)診斷［4-5］為梅毒的住院患者100例，男56例，女44例，年齡(37±12)歲，排除人類免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒感染和各種慢性病(如糖尿病、高血壓等)。選擇同期來新疆石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院以皮膚和黏膜病變?yōu)榘Y狀就診但梅毒血清學(xué)檢測(cè)均為陰性反應(yīng)的50例患者作為非梅毒組，男26例，女24例，年齡(37±15)歲。選取同期來新疆石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的正常人100名作為正常對(duì)照組，男47名，女53名，年齡(40±11)歲。

二、標(biāo)本采集與處理

所有研究對(duì)象均空腹采靜脈血3 mL，肝素鈉抗凝，離心后收集血漿500μL，－80℃冰箱保存直至檢測(cè)。所有梅毒患者的血漿經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)初步篩選后，采用美國(guó)疾病預(yù)防控制中心2002年推薦的梅毒確證試驗(yàn)——明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA，日本富士公司)進(jìn)一步確診。

三、檢測(cè)指標(biāo)

采用分光光度法測(cè)定SOD，采用硫代巴比妥酸比色法檢測(cè)MDA，試劑盒的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)及質(zhì)控參數(shù)均在允許范圍內(nèi)，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。TRX、AOPP采用ELISA試劑盒由上海西唐生物科技有限公司和上海索萊寶生物科技有限公司提供，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、梅毒組、正常對(duì)照組、非梅毒組一般資料比較

梅毒組、正常對(duì)照組、非梅毒組經(jīng)過嚴(yán)格篩選后進(jìn)行均衡性比較，其中年齡、性別構(gòu)成比經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

二、梅毒組、正常對(duì)照組、非梅毒組血漿氧化應(yīng)激水平比較

梅毒組SOD活性及AOPP、TRX水平與非梅毒組、正常對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);梅毒組MDA水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05);梅毒不同病程的各項(xiàng)氧化應(yīng)激指標(biāo)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 梅毒組、正常對(duì)照組、非梅毒組血漿氧化應(yīng)激指標(biāo)比較(±s)

表1 梅毒組、正常對(duì)照組、非梅毒組血漿氧化應(yīng)激指標(biāo)比較(±s)

注:與梅毒組比較，*P＜0.05、＊＊P＜0.01

隱性梅毒 14 76.86±7.39 37.93±8.61 4.46±0.90 74.36±11.63非梅毒組 50 39.30±11.00* 21.74±3.71＊＊ 4.13±0.73 131.30±30.98＊＊正常對(duì)照組 100 29.74±7.79＊＊ 19.93±4.79＊＊ 4.03±0.79* 142.13±48.50＊＊

討 論

正常的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能需要通過重要的氧化還原途徑來維持調(diào)節(jié)，氧化應(yīng)激是由自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負(fù)面作用，持續(xù)的氧化應(yīng)激破壞了細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。近年來研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞和組織的破壞與多種疾病的病理密切相關(guān)［6］。此外，馮新青等［7］發(fā)現(xiàn)二期梅毒患者的細(xì)胞免疫功能存在缺陷，這與氧化應(yīng)激是否有關(guān)?隨著梅毒患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)逐步為人們所揭示，本研究即從氧化應(yīng)激方面來探討梅毒螺旋體對(duì)機(jī)體可能的損傷作用。

梅毒引起的臨床癥狀是由于梅毒螺旋體誘導(dǎo)產(chǎn)生的持久的慢性炎癥反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)不同病程的梅毒患者檢測(cè)氧化應(yīng)激的水平并無差異。梅毒螺旋體雖然缺乏典型的外膜脂多糖結(jié)構(gòu)，但其擁有豐富的脂蛋白類物質(zhì)。這些脂蛋白通過單核細(xì)胞吞噬溶酶體的釋放從而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)。通過ROS的連鎖反應(yīng)，可使其產(chǎn)生部位及遠(yuǎn)離產(chǎn)生部位的其他部位攻擊包括DNA、蛋白質(zhì)等在內(nèi)的幾乎所有的生物分子，這種破壞可引起機(jī)體死亡。此外，梅毒螺旋體缺乏大部分的鐵結(jié)合蛋白［8］，梅毒螺旋體還是一種微需氧微生物，這些特點(diǎn)使得其必須具有氧化結(jié)構(gòu)來抗氧化和炎癥增值反應(yīng)［3］。

AOPP是氧化應(yīng)激的標(biāo)志物，可激發(fā)中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的呼吸爆發(fā)［9-10］，刺激合成及其釋放大量促炎性細(xì)胞因子，引起全身微炎癥反應(yīng)，作為氧化應(yīng)激蛋白質(zhì)氧化的產(chǎn)物，可進(jìn)一步促進(jìn)氧化應(yīng)激的發(fā)生，引起脂質(zhì)過氧化。MDA則是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)主要代謝產(chǎn)物。TRX則是測(cè)定抗氧化能力的標(biāo)志，是體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)最重要的成員之一，對(duì)氧化應(yīng)激起關(guān)鍵作用。TRX通過其特有的二硫化物活性中心，可逆的催化多種氧化還原反應(yīng)，是近年來新興發(fā)展的檢測(cè)梅毒螺旋體的方法［11-12］。本研究發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體感染后機(jī)體TRX表達(dá)增強(qiáng)。氧化應(yīng)激產(chǎn)生大量的ROS，進(jìn)一步促進(jìn)脂質(zhì)過氧化。本研究發(fā)現(xiàn)梅毒組AOPP、TRX均高于正常對(duì)照組和非梅毒組(P＜0.01)，而SOD水平明顯低于正常對(duì)照組和非梅毒組(P＜0.01)。但對(duì)于MDA來說，二期梅毒組和正常對(duì)照組有差異(P＜0.05)，可能是機(jī)體短期的氧化反應(yīng)造成的。SOD是氧自由基的自然天敵，是機(jī)體內(nèi)氧自由基的頭號(hào)殺手，正常人體內(nèi)含有足量的SOD等抗氧化物質(zhì)，以對(duì)抗體內(nèi)不斷產(chǎn)生的MDA等自由基產(chǎn)物。當(dāng)梅毒患者體內(nèi)脂質(zhì)過氧化作用增強(qiáng)的同時(shí)抗氧化酶SOD作用也增強(qiáng)，從而使脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA減少以維護(hù)機(jī)體氧化和抗氧化系統(tǒng)的平衡。

綜上所述，不同病程的梅毒患者體內(nèi)均存在明顯的氧化應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)對(duì)其疾病的診斷和治療有著十分重要的價(jià)值和參考意義。在梅毒診斷、治療及定期隨訪中應(yīng)用氧化應(yīng)激指標(biāo)的監(jiān)測(cè)，有利于患者病情的控制和觀察，有待于進(jìn)一步研究。

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