富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代魚粉對羅非魚生產(chǎn)性能及免疫功能的影響

山東寶來利來生物工程股份有限公司 李曉穎 王 靜 谷 巍

抗菌肽是生物體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的一類抵抗外界病原體感染的小分子肽類物質(zhì)，具有非特異性的抗菌、抗病毒等作用，且不破壞正常細胞。本試驗以高產(chǎn)抗菌肽的乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕添加到羅非魚日糧中，部分替代魚粉，研究富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代魚粉對羅非魚生長性能及免疫功能的影響，為植物發(fā)酵蛋白在水產(chǎn)飼料中的應用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 抗菌肽發(fā)酵豆粕：為產(chǎn)抗菌肽乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕，由山東寶來利來生物工程股份有限公司提供。

1.2 試驗設計 選取平均體重為（56.0±0.56）g的健康羅非魚240條，隨機分成4組，每組3個重復，每個重復20條，馴養(yǎng)10 d。對照組飼喂基礎日糧，試驗基礎日料參照NRC魚類營養(yǎng)需要，以全魚粉作為蛋白源，配制羅非魚配合日糧。試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別用20%、40%、60%富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代基礎日糧中等量的魚粉。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗羅非魚飼養(yǎng)在室內(nèi)水族箱內(nèi)，按體重的3%投喂飼料，每天2次，投飼時間為 09∶00和17∶00， 投飼后2 h撈取剩余飼料，烘干，稱重。試驗期為40 d。試驗期間每天記錄羅非魚的攝食量和死亡魚數(shù)量，試驗結(jié)束后尾椎靜脈采血，4000 r/min，離心15 min，分離血清。測定血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、溶菌酶（LZM）含量。

1.4 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進行單因子方差分析，用LSD進行組間多重比較，試驗結(jié)果均以“平均數(shù)±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚生產(chǎn)性能的影響由表1可知，在試驗開始時，各試驗組平均體重差異均不明顯，10日齡時，與對照組相比，試驗Ⅰ組的平均日采食量和平均日增重分別降低2.95%和3.73%，但差異均不顯著（P＞0.05）；試驗Ⅰ組餌料系數(shù)比對照組提高1.14%，但差異不顯著（P＞0.05）；與試驗Ⅰ組和對照組相比，試驗Ⅱ組和Ⅲ組日增重、日采食量均顯著降低，餌料系數(shù)顯著升高（P＜0.05）；試驗Ⅱ組日增重和日采食量均顯著高于試驗Ⅲ組（P＜0.05）。這說明在日糧中用抗菌肽發(fā)酵豆粕替代魚粉是可行的，但是高劑量添加會影響羅非魚的生長。

表1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚生產(chǎn)性能的影響

20日齡時，各組的初始體重雖然差異不顯著，但是對照組和試驗Ⅰ組的體重均高于試驗Ⅱ組、Ⅲ組，與試驗Ⅰ組和對照組相比，試驗Ⅱ組、Ⅲ組，平均日增重和平均日采食量顯著降低，試驗Ⅱ組和Ⅲ組的餌料系數(shù)均顯著高于試驗Ⅰ組和對照組（P＜0.05）。試驗Ⅱ組平均日增重和平均日采食量與試驗Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05）。

30日齡時，對照組與試驗Ⅰ組的初始體重差異不顯著，但均顯著高于試驗Ⅱ組、Ⅲ組 （P＜0.05）；試驗結(jié)束時，對照組和試驗Ⅰ組的日增重和餌料系數(shù)差異均不顯著（P>0.05），但均與試驗Ⅱ組和Ⅲ組差異顯著（P＜0.05）；試驗Ⅱ組的平均日增重和平均日采食量與試驗Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），分別較試驗Ⅲ組提高18.25%和9.27%。通過比較不同添加水平抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚不同生長階段生長性能的影響可以看出，抗菌肽發(fā)酵豆粕在飼料中替代魚粉是可行的，但高劑量的添加對羅非魚生長發(fā)育具有明顯的抑制作用。

2.2 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚血清生化指標的影響

2.2.1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚血清TP、ALB含量的影響 由圖1可知，試驗Ⅰ組TP含量比對照組提高1.58%，但差異不顯著（P＞0.05），而試驗Ⅱ組、Ⅲ組的TP含量分別比對照組降低5.66%（P＞0.05）和10.46%（P＜0.05）。試驗Ⅰ組ALB含量最高，比對照組高10.54%，差異顯著（P＜0.05）；試驗Ⅱ組、Ⅲ組的ALB含量與對照組相比差異均不顯著（P＞0.05），但均顯著低于試驗Ⅰ組。

由圖2可知，隨著日齡的增加各試驗組的TP、ALB含量均有所增加，但各組間TP、ALB含量差異均不明顯，其中，試驗Ⅰ組TP、ALB含量最高，分別比對照組提高1.2%和0.77%。

由圖3可知，到試驗結(jié)束時，各試驗組間TP、ALB含量差異均不顯著，試驗Ⅰ組的TP、ALB的含量最高，分別比對照組提高0.29%和0.38%。

2.2.2 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚血清LZM含量的影響 由圖4可知，對照組和試驗Ⅰ組LZM含量呈現(xiàn)逐漸遞增趨勢，而試驗Ⅱ組、Ⅲ組含量呈現(xiàn)遞減趨勢，在試驗前期對照組LZM含量最低，各試驗組LZM含量均高于對照組。其中，試驗Ⅱ組LZM含量最高，較對照組提高20.81%，各組間差異均顯著（P＜0.05）；隨著日齡的增加對照組和試驗Ⅰ組LZM含量逐漸增加，試驗Ⅱ組、Ⅲ組逐漸降低，到試驗結(jié)束時，試驗Ⅰ組含量最高，比對照組提高4.59%，差異不顯著（P>0.05），但顯著高于試驗Ⅱ組、Ⅲ組（P＜0.05）。

3 討論

抗菌肽作為飼料添加劑，已在畜牧生產(chǎn)中廣泛應用。宋理平等（2010）研究發(fā)現(xiàn)，在凡納濱對蝦的飼料中添加重組抗菌肽制劑，可使其攝食量增加，相對增重率顯著提高。王阿榮等（2011）研究表明，抗菌肽能提高斷奶仔豬的生長性能和免疫功能。黃永彤等（2004）研究報道，抗菌肽在代替抗生素防治肉雞病害方面有明顯效果，并對多種細菌有較明顯的殺滅作用。

豆粕的蛋白質(zhì)含量為42%～45%，且必需氨基酸含量、氨基酸構(gòu)成比例以及消化率均優(yōu)于其他植物性餅粕類原料，經(jīng)過微生物發(fā)酵處理的豆粕，營養(yǎng)素水平有所提高，并可獲得有益微生物，同時抗營養(yǎng)因子水平顯著降低。盡管發(fā)酵豆粕有效能含量和氨基酸水平不及魚粉，但大量飼養(yǎng)試驗表明，發(fā)酵豆粕替代全部或部分魚粉不會影響動物的生產(chǎn)性能和健康水平（劉勇，2009；Refstie 等，2005）。

本試驗結(jié)果表明，在飼料中適量添加含有抗菌肽成分的發(fā)酵豆粕代替魚粉，能促進羅非魚的生長發(fā)育、提高采食量及降低餌料系數(shù)，但值得注意的是，添加中、高劑量抗菌肽發(fā)酵豆粕會嚴重影響羅非魚的生長性能，原因可能是乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕替代魚粉，影響了飼料適口性及氨基酸組成。高劑量抗菌肽發(fā)酵豆粕替代魚粉時，影響作用更為明顯。此外，陳曉生等（2006）研究表明，添加高劑量抗菌肽可能會抑制腸道有益菌的生長。

通過測定不同組別的血液指標，可以看出在整個試驗過程中，低劑量替代組即試驗Ⅰ組TP、ALB含量均最高，但與其他各組均無顯著差異。一定濃度范圍內(nèi)的發(fā)酵豆粕對羅非魚血清TP、ALB含量無顯著影響，這表明，羅非魚具有自身穩(wěn)定調(diào)節(jié)系統(tǒng)，可以保持血清TP、ALB含量處在穩(wěn)定狀態(tài)。

LZM是機體非特異性免疫功能的重要體液因素，在試驗前期試驗Ⅱ組、Ⅲ組的含量高于對照組和試驗Ⅰ組，說明高劑量替代能顯著增加血清中LZM含量，但是隨著日齡的增加，這兩組LZM含量明顯下降，原因可能是試驗Ⅱ組、Ⅲ組羅非魚在后期采食量下降影響了免疫功能。姜珊等（2011）研究報道，高劑量的抗菌肽對肝臟組織有一定的破壞性作用。LZM含量的下降，可能與該因素也有一定的關系，有待進一步驗證。

劉勇（2009）研究表明，鮮雜魚-豆粕替代奧尼羅非魚幼魚飼料中2／3魚粉 （占飼料6%），不影響機體生長性能。在本試驗中，抗菌肽發(fā)酵豆粕替代20%魚粉（占飼料5.4%），對羅非魚的生長性能影響不大，進一步說明抗菌肽發(fā)酵豆粕代替魚粉的適宜比例與品種和生長階段等有一定關系。本試驗結(jié)果證實，富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代20%的魚粉（占飼料5.4%），對羅非魚生長性能及血清免疫指標具有促進和增強作用。

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