蓽茇多糖提取與含量測(cè)定

烏云塔娜 齊明玉 劉 敏

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)興安盟科右中旗巴仁哲里木蘇木衛(wèi)生院，內(nèi)蒙古 興安盟 029425;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065;3.內(nèi)蒙古神州硅業(yè)有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010070

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

蓽茇 (piper Longum L)胡椒科植物蓽茇的干燥近成熟果穗)，均購(gòu)自呼和浩特天力藥業(yè)，產(chǎn)地:海南省，批號(hào):AA200072，

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

乙醇:批號(hào) 20070115，常熟市晉陽(yáng)遠(yuǎn)化學(xué)有限公司。

乙醇丙酮:批號(hào) 0810201，汕頭市西隴化工廠。

乙醇苯酚:批號(hào) 0702072，汕頭市西隴化工廠。

硫酸:批號(hào) 200705063，萊陽(yáng)市康德化學(xué)有限公司。

乙醚:天津化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào):2D040512。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

LD5－2A低溫離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠制造。T－500型電子天平，美國(guó)雙杰兄弟有限公司。AL－204型電子天平，上海梅特—托利多儀器有限公司。

KQ－250B型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

210 型分光光度計(jì)，日本島津。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 蓽茇多糖提取

①先蓽茇粉碎后過(guò)80目篩。

②800g蓽茇粉加8 000 mL蒸餾水，益煮3次，各煮0.5、1、1.5h，次濾布過(guò)濾。

③合并3次過(guò)濾液，濃縮原體積的1/10，得1 350 mL溶液。

④取300mL溶液加90%乙醇1 200 mL，攪拌后靜置24h。

⑤24h后過(guò)濾，棄去濾液，殘?jiān)^續(xù)以500mL蒸餾水溶解，再濃縮成25mL溶液。

⑥加入80%乙醇靜止12h后抽濾，無(wú)水乙醇沉淀、丙酮反復(fù)洗滌多次，60℃溫度干燥，得到白色無(wú)定形粉末3.04g。

2.2 蓽茇多糖含量測(cè)定

①葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置:精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖50.2mg，用蒸餾水溶解并定容到500mL，即為100.4ug/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

②5%苯酚溶液的配置:精稱苯酚18.7g，加50mL蒸餾水溶解后的容量66mL，再加308 mL蒸餾水，置棕色瓶?jī)?nèi)放冰箱備用。

③標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、mL，分別加蒸餾水使成 2.0 mL，再分別加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻后再加濃H2SO45mL，充分搖勻，于室溫下放置5min，置水浴中加熱15min，取出冷卻至室溫。另以蒸餾水同上操作作為空白對(duì)照，在490nm處測(cè)定吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程:A=0.0127C+0.0053(A為吸光度，C為濃度)，R2=0.9994。

④樣品溶液的配制:精密稱取蓽茇多糖22.2mg，加蒸餾水溶解后容量瓶中定容100ml，搖勻，濃度為222ug/ml。

⑤重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn):對(duì)同一批樣品重復(fù)取樣5次，按樣品測(cè)定方法操作。

表1 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

⑥精密度試驗(yàn):用樣品溶液在相同的條件下連續(xù)測(cè)定5次。這5次測(cè)定值的RSD為1.48%。

⑦回收率實(shí)驗(yàn):精密吸取樣品液0.2ml(5份)，分別精密加入0.4ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加蒸餾水使成2.0 mL，按測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣方法測(cè)定吸光度值，按下公式計(jì)算回收率平均值。結(jié)果見(jiàn)表2。

回收率%=(測(cè)得重量－樣品重量)/標(biāo)準(zhǔn)重量

表2 回收率實(shí)驗(yàn)

⑧蓽茇多糖含量測(cè)定:精密吸取樣品溶液0.2 mL，加蒸餾水使成1.0 mL，再加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻后再加濃H2SO45mL，充分搖勻，于室溫下放置5min，置水浴中加熱15min，取出冷卻至室溫。另以蒸餾水同上操作作為空白對(duì)照，在490nm處測(cè)定吸光度值。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 蓽撥多糖的含量

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:蓽茇多糖含量為75.92%，回收率為99.43%。糖類含量測(cè)定法硫酸－苯酚法的原理是寡糖或多糖在濃硫酸的作用下水解成單糖分子，并迅速脫水生成糖醛衍生物，在這種強(qiáng)酸性條件下與苯酚反應(yīng)，生成橙色衍生物，該衍生物在490nm處和一定濃度范圍內(nèi)吸收值和糖濃度呈線性關(guān)系，從而可用比色法測(cè)定單糖的含量，再根據(jù)單糖計(jì)算出多糖的含量。

3.2 多糖類化合物是多種植物藥中的有效成份之一，具有多種生物活性，目前多糖的研究不斷深入，而且不斷有新的多糖被發(fā)現(xiàn)，但蓽茇多糖還未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)首次蓽茇中提取出多糖，并對(duì)其含量進(jìn)行了測(cè)定。

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