穴位埋線對大鼠運動疲勞緩解機制的推測及實驗研究

卞伯高，范春，劉剛

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)體育健康學(xué)院，廣東廣州 510006;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)團委，廣東廣州 510006)

運動性疲勞的恢復(fù)過程，一直是體育科學(xué)研究的重要課題。近年來國內(nèi)越來越多的學(xué)者選用我國傳統(tǒng)的針灸治療方法，用于消除長時間大運動訓(xùn)練給身體帶來的疲勞。其中穴位埋線與傳統(tǒng)意義上的針刺和灸法比較又有許多優(yōu)勢。

穴位埋線療法是將羊腸線植入特定穴位，利用植入的羊腸線對穴位的連續(xù)刺激來激發(fā)機體經(jīng)絡(luò)氣血達到防治疾病作用的一種方法。相比于傳統(tǒng)針灸而言具有延長傳統(tǒng)針刺的作用時間、方便了患者，一次埋線功效相當(dāng)于1個月連續(xù)針刺。新型藥物性羊腸線的使用，使埋線的同時還有藥物作用，療效更好的優(yōu)點。本研究通過對運動大鼠足三里穴位埋線的方法，檢測血清中SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)的含量，以及測取脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，根據(jù)研究結(jié)果探討足三里穴位埋線對大鼠運動疲勞的緩解機制。

1 研究對象與方法

1.1 實驗對象

SPF級雄性SD大鼠，180g～220g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號:SYXK(粵)2008－0085。于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心SPF級實驗室內(nèi)進行實驗，常規(guī)分籠喂養(yǎng)，自由飲水進食，動物室內(nèi)溫度21℃ ～24℃，相對濕度40% ～55%，室內(nèi)空氣流通，光照時間12h。

1.2 動物分組與造模方法

實驗動物適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，以10m/min，5min/天的運動量對動物進行為期4天的篩選，淘汰不適應(yīng)跑臺大鼠。按體重對35只實驗動物進行隨機平均分組，安靜組11只，訓(xùn)練組12只，訓(xùn)練+穴位埋線組12只。

每天訓(xùn)練前以10m/min的速度運動5min后正式進行訓(xùn)練，每周的速度以5m/周遞增，前4周速度逐漸遞增，達到此周的最高速度30m/min。此后4周，訓(xùn)練速度恒定在30m/min，每次訓(xùn)練時間為30min。

1.3 穴位取位及干預(yù)

1.3.1 穴位取位

大鼠的“足三里”穴位定位參照《實驗針灸學(xué)》(李忠仁主編，2003年1月中國中醫(yī)藥出版社)取穴。位置為大鼠后肢膝關(guān)節(jié)下方胖骨小頭下約5mm處。

1.3.2 干預(yù)

安靜組和訓(xùn)練組不進行任何干預(yù)，訓(xùn)練+穴位埋線組于第1、3、5、7周開始前埋線，八周共埋線4次。埋植方法參照《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)針灸技術(shù)操作規(guī)范一穴位埋線》，具體操作如下:先將4/0號外科醫(yī)用羊腸線剪成3mm小段若干，置于95%酒精中浸泡，并放進7號一次性套管埋線針的前端，在小鼠用乙醚霧化吸入麻醉后(實驗用麻醉是為了防止小鼠過度掙扎)，穴位及穴周皮膚常規(guī)消毒，術(shù)者用一手的拇指和食指固定穴位，另一只手持針，順著經(jīng)絡(luò)走行方向，斜刺入足三里穴位，緩慢將針頭內(nèi)的羊腸線推入穴位，將羊腸線埋植在足三里穴位的皮下組織，埋線完畢后，小鼠穴區(qū)無需任何處理。

1.4 實驗取材

實驗結(jié)束后，于第2天上午給每只大鼠稱重并將實驗大鼠用乙醚麻醉后，快速斷頭取血6ml，保存在4℃的冰水中，3500r/min離心8min，分離血清，冷藏保存待測。并迅速取脾臟、胸腺置于預(yù)冷的生理鹽水中洗凈血污，用濾紙吸干，稱重記錄。

1.5 檢測方法

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)方法測定血清中SOD(超氧化物歧化酶)，采用TBA(硫代巴比妥酸法)測定MDA(丙二醛)的含量。試劑盒由南京建成科技有限公司提供。

1.6 統(tǒng)計方法

所有測試數(shù)據(jù)運用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理。以P＜0.05作為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果及分析

2.1 穴位埋線對訓(xùn)練大鼠體重的影響

表1 穴位埋線對訓(xùn)練對大鼠體重的影響

從表1可以看出經(jīng)過八周的遞增負荷耐力訓(xùn)練，訓(xùn)練組和訓(xùn)練+穴位埋線組體重均有明顯的增加，且體重增加幅度訓(xùn)練+穴位埋線組相對訓(xùn)練組有顯著性增加，訓(xùn)練組與安靜組有異常顯著性差異，安靜組相對于訓(xùn)練+穴位埋線組又有顯著性增加。從中可以看出安靜組體重增加幅度最大，訓(xùn)練+穴位埋線組增加幅度居中，訓(xùn)練組增加幅度最小。由此說明足三里穴位埋線可以提升耐力訓(xùn)練大鼠的體重。

2.2 穴位埋線對訓(xùn)練大鼠血清中SOD、MDA的影響

表2 足三里穴位埋線對訓(xùn)練大鼠血清SOD、MDA的影響

從表2看出三組大鼠血清SOD活性大小依次是訓(xùn)練+穴位埋線組、訓(xùn)練組、安靜組，且訓(xùn)練+穴位埋線組與兩組都有顯著性差異;三組大鼠血清MDA含量大小依次是訓(xùn)練組、穴位埋線組、安靜組，三組沒有顯著性差異。

2.3 穴位埋線對訓(xùn)練大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響

表3中三組胸腺指數(shù)，訓(xùn)練組相比安靜組和訓(xùn)練+穴位埋線組有顯著性下降，安靜組和訓(xùn)練+穴位埋線組沒有顯著性差異;從這三組脾臟指數(shù)指標(biāo)來看，訓(xùn)練組與安靜組對比有異常顯著性下降，和訓(xùn)練+穴位埋線組相比有顯著性下降，訓(xùn)練+穴位埋線組相比安靜組有顯著性下降。

表3 足三里穴位埋線對訓(xùn)練大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響

3 討論

足三里出自《靈樞·本輸》，別名下陵、鬼邪，為足陽明經(jīng)合穴、胃下合穴。唐代孫思邈總結(jié)出“一切病皆灸三里”。脾胃為后天之本，脾主運化水谷，脾胃強盛，則水谷精微生化有源，氣血旺盛，元氣充沛，人體全身得到充足的營養(yǎng)物質(zhì)，機體抵抗力強盛，從而有效提高機體的免疫功能。研究證明足三里穴具有解除平滑肌痙攣、調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)、增強機體應(yīng)激能力、增強免疫功能、提高機體抗病能力等作用，對循環(huán)、呼吸、泌尿等系統(tǒng)均具有良好的調(diào)節(jié)作用［1］。

穴位埋線的機理是將羊腸線作為一種異體蛋白，埋入穴位后，在體內(nèi)軟化、分解、液化和吸收的過程，能有效促進和提高機體的營養(yǎng)代謝和應(yīng)激能力，機體的血管通透性和血液循環(huán)也能得到適當(dāng)?shù)母纳疲且环N融多種療法、多種效應(yīng)于一體的復(fù)合型治療方法，其刺激感應(yīng)維持時間可長達20天或更長時間，從而彌補了針灸時間短和就診次數(shù)多的缺點［2］。機體的微觀組織及結(jié)構(gòu)在穴位埋線的影響下也產(chǎn)生相應(yīng)的改變，它能改善與穴位相關(guān)的神經(jīng)并且影響到包括組織器官的活動能力、血液循環(huán)、新陳代謝等等，從而改善它們的功能并達到提高機體運動能力，緩解機體運動疲勞的作用。

3.1 足三里穴位埋線對耐力訓(xùn)練大鼠體重變化的影響

已有的研究表明，長期運動可以減緩大鼠體重的增加，本實驗研究結(jié)果也顯示，各組別大鼠體重均有不同程度的增加，各組體重增加幅度安靜組＞訓(xùn)練+穴位埋線組＞訓(xùn)練組，而且訓(xùn)練組和訓(xùn)練+穴位埋線組體重有顯著性差異?？赡艿脑蜻x取的刺激部位“足三里”所在的經(jīng)絡(luò)一足陽明胃經(jīng)有關(guān)。運動可以導(dǎo)致人體胃腸功能紊亂，祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認為“胃和脾相表里，主受納，運化水谷，輸布精氣、津液于全身。足三里為胃經(jīng)之主要穴位，有理脾胃，調(diào)氣血，主消化，補虛弱之功效”，脾胃為后天之本，脾主運化水谷，脾胃強盛，則水谷精微生化有源，氣血旺盛，元氣充沛，人體全身才能得到充足的營養(yǎng)物質(zhì)，機體營養(yǎng)物質(zhì)的吸收功能加強，促進了機體內(nèi)能量物質(zhì)的儲備［3］。

3.2 足三里穴位埋線對耐力訓(xùn)練大鼠血清SOD、MDA的影響

SOD是體內(nèi)超氧陰離子的有效清除劑，其活性的變化可間接反映機體內(nèi)自由基的生成和代謝情況。實驗結(jié)果提示足三里穴位埋線可顯著提高耐力訓(xùn)練大鼠的血清SOD活性。MDA是機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物。MDA含量常?？煞从硻C體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度間接地反映出細胞損傷的程度。本實驗結(jié)果顯示血清MDA含量沒有顯著性變化。

對于耐力運動導(dǎo)致機體SOD活性的變化，目前國內(nèi)外的研究結(jié)果并不一致。大部分學(xué)者認為一次短時間劇烈運動可引起機體各組織SOD活性增高。而國內(nèi)學(xué)者張愛芳，王貴，胡艷龍等在研究機體紅細胞抗氧化能力及對ATP酶的活性影響發(fā)現(xiàn)，一次性遞增負荷運動后即刻紅細胞中SOD的活性表現(xiàn)為顯著下降［4］;而國外學(xué)者P.Mena(1991年)報道完成規(guī)定定量負荷運動后機體紅細胞SOD活性顯著升高［5］;通過長期的有氧鍛煉可以使機體組織SOD活性提高這一觀點也被越來越多的研究證實。本實驗研究也支持這一觀點，并認為通過足三里穴位埋線干預(yù)耐力訓(xùn)練大鼠，能夠顯著性的提高大鼠血清SOD活性，其機理可能是穴位埋線刺激足三里提高了大鼠的應(yīng)激能力，促進了心臟工作能力的提高，在祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，心主血，脾為氣血化生之源，脾氣健運，心血足使心有所主，提高了血清SOD、GSH－PX、CAT等抗氧化酶的活性，降低了細胞膜脂質(zhì)過氧化程度，保持了細胞膜的完整性，減少了細胞的過氧化損傷。

國內(nèi)許多研究結(jié)果顯示刺激足三里穴能有效控制脂質(zhì)過氧化損傷(MDA含量)，梁宜，方劍喬等認為跑臺大鼠力竭運動后即刻自由基生成增多、脂質(zhì)過氧化程度嚴重，而TEAS治療可有效控制脂質(zhì)過氧化損傷［6］。本研究結(jié)果顯示血清MDA含量沒有顯著性差異，但訓(xùn)練組略高于穴位埋線組，穴位埋線組又略高于安靜組。表明足三里穴位埋線對控制血清MDA含量有作用，但不明顯。研究者認為隨著跑臺運動量的增加，機體處于應(yīng)激狀態(tài)，此時血清MDA含量隨之增加;當(dāng)運動量增加到固定值，經(jīng)過幾周的鍛煉，機體產(chǎn)生了適應(yīng)，SOD等抗氧化酶活性的增強對自由基產(chǎn)生了抑制作用，此時血清MDA含量隨之下降到合理水平。

3.3 穴位埋線對胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響

該實驗結(jié)果顯示，穴位埋線組大鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯高于非埋線訓(xùn)練組大鼠，提示通過穴位埋線，大鼠胸腺和脾臟重量的未明顯降低，功能相對非埋線組有明顯改善。穴位埋線對訓(xùn)練大鼠免疫器官指數(shù)的改變，可能與其能減少運動引起的體內(nèi)自由基，增強集體的抗氧化能力，減輕生物膜的脂質(zhì)過氧化，從而使免疫器官免受自由基攻擊，達到保護機體的功效。

3.4 穴位埋線對大鼠運動疲勞緩解機制的推測

動物機體有一套有效的抗氧化防御系統(tǒng)，正常情況下機體自由基的產(chǎn)生和消除處于動態(tài)平衡［7］。SOD活性水平的升高和降低將直接影響機體的抗氧化能力［8］。MDA的含量反映的是自由基的生成情況及脂質(zhì)氧化程度［9］。實驗結(jié)果表明，足三里穴位埋線可顯著提高耐力訓(xùn)練大鼠的血清SOD活性，血清MDA含量沒有顯著性差異。由此可證明運動使機體自由基堆積，通過穴位埋線對足三里穴的刺激使機體氧化能力增強抗氧化酶活性提高，但當(dāng)機體抗氧化酶活性提高、機體抗氧化能力增強時，MDA基本不變化，機體抗氧化能力的增強沒有逆向引發(fā)自由基穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)反應(yīng);機體還原能力較氧化能力具一定的滯后性［10］。實驗結(jié)果顯示，穴位埋線組大鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯高于非埋線訓(xùn)練組大鼠，可能與大鼠大量運動時，機體產(chǎn)生大量的自由基，降低了胸腺、脾臟清除自由基的能力，使自由基在體內(nèi)大量積累，導(dǎo)致細胞膜的流動性、通透性增加，細胞膜遭到損傷，從而影響到其他功能的發(fā)揮，表明了逐漸遞增耐力運動對大鼠胸腺、脾臟組織抗氧化能力具有一定程度的損傷。而穴位埋線刺激足三里穴提高了大鼠的應(yīng)激能力，促進了心臟工作能力的提高，提高了血清SOD抗氧化酶的活性，降低了胸腺、脾臟細胞膜脂質(zhì)過氧化程度，保持了細胞膜的完整性，減少了細胞的過氧化損傷。

結(jié)合本實驗結(jié)果，與非穴位埋線訓(xùn)練組比較，穴位埋線訓(xùn)練組大鼠血清中SOD活性上升，胸腺指數(shù)和脾指數(shù)提高，揭示足三里穴位埋線是一種較好的抗機體氧化方式，這種刺激能有效提升機體的體重，對遞增負荷機體自由基代謝有調(diào)節(jié)作用，能緩解主要免疫性器官胸腺和脾臟的萎縮，進而緩解機體的運動性疲勞。

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