痔瘡止血丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

汝秋明，韓潤(rùn)淑

(1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.永吉縣食品藥品監(jiān)督管理局，吉林 永吉 132000)

痔瘡止血丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

汝秋明1*，韓潤(rùn)淑2

(1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.永吉縣食品藥品監(jiān)督管理局，吉林 永吉 132000)

目的：建立痔瘡止血丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC鑒別處方中的地榆、陳皮和荊芥。用HPLC測(cè)定槐花中蘆丁的含量。用DiamonsilTM(鉆石)C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)，流速為1 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為257 nm，柱溫為30 ℃。結(jié)果：TLC鑒別色譜特征斑點(diǎn)明顯。蘆丁進(jìn)樣量在0.130 9～1.9741 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。平均回收率為99.8%，RSD=0.9%(n=6)。結(jié)論：所建立的TLC和HPLC方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于痔瘡止血丸的質(zhì)量控制。

痔瘡止血丸；TLC；HPLC；地榆；陳皮；荊芥

痔瘡止血丸收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第十冊(cè)，由槐花、荊芥、陳皮、地榆等6味中藥組成的復(fù)方制劑，具有清熱解毒，滲濕利尿功效，用于腎盂腎炎和急慢性尿路感染治療。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有定性鑒別項(xiàng)目，我們通過(guò)研究，在痔瘡止血丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加了荊芥、陳皮、地榆的TLC鑒別和槐花的含量測(cè)定項(xiàng)，為該制劑的質(zhì)量控制提供了可靠的方法。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010C高效相色譜儀；日本島津UV-2201紫外-可見分光光度計(jì)；ZF-I紫外光燈。預(yù)制硅膠G薄層板、預(yù)制硅膠GF254薄層板、預(yù)制硅膠H薄層板(薄層層析用，青島海洋化工集團(tuán))。

沒食子酸對(duì)照品、橙皮苷對(duì)照品及荊芥對(duì)照藥材、蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100080-200306，供含量測(cè)定用)，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。痔瘡止血丸(吉林長(zhǎng)源藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20070201，20050501，20061001)。乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 地榆的鑒別 取本品60粒，剪碎，加硅藻土3 g研勻，加水50 mL，煮沸30 min，放冷，離心，取上清液，用鹽酸飽和的乙醚15 mL振搖提取，分取乙醚層，揮干，加甲醇約1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取沒食子酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺地榆陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液[1-3]。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，見圖1。

1.沒食子酸對(duì)照品；2～4.樣品；5.陰性對(duì)照品圖1 地榆薄層色譜圖

2.1.2 陳皮的鑒別 取本品剪碎，稱取3 g，加硅藻土2 g研勻，加50%甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺陳皮陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液[4-7]，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，見圖2。

1.橙皮苷對(duì)照品；2～4.樣品；5.陰性對(duì)照品圖2 陳皮薄層色譜圖

2.1.3 荊芥的鑒別 取本品剪碎，稱取1 g，加硅藻土0.7 g，加石油醚(60～90 ℃)20 mL，密塞，時(shí)時(shí)振搖，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另取荊芥對(duì)照藥材0.8 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺荊芥陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛的5%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，見圖3。

1～3.樣品；4.荊芥對(duì)照藥材；5.陰性圖3 荊芥薄層色譜圖

2.2 槐花含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 采用迪馬-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；柱溫：30 ℃；流速：1 mL·min-1；流動(dòng)相：乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)；檢測(cè)波長(zhǎng)257 nm；進(jìn)樣量：10 μL；理論板數(shù)按蘆丁峰計(jì)應(yīng)不低于4 000[8]。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取120 ℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL中含0.1 mg的溶液，即得，見圖4。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品，剪碎，取適量，精密稱定，精密加入等量的硅藻土，研勻，精密稱取約1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定重量，放置過(guò)夜，超聲處理(功率250 W，33 kHz)40 min，放冷，稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得，見圖5。

2.2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn) 按處方比例取相當(dāng)于0.5 g中所含群藥適量(不含槐花)，按工藝制備缺槐花陰性對(duì)照品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液，量取10 μL注入液相色譜儀，按上述方法測(cè)定，結(jié)果表明陰性對(duì)照的色譜圖在蘆丁相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，見圖6。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取蘆丁對(duì)照品20 mg，置200 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，精密量取1，3，5，7，9，11，13，15，17，19 μL分別注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程Y=1 797 716X+1.460，r=1.000，結(jié)果表明蘆丁進(jìn)樣量在0.130 9～1.974 1 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖4 蘆丁對(duì)照品HPLC圖

圖5 痔瘡止血丸供試品HPLC圖

圖6 陰性對(duì)照品HPLC圖

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，記錄峰面積，結(jié)果RSD=0.6%。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別在0，4，8，12，24 h進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果RSD=0.8%，表明24 h內(nèi)供試品溶液中蘆丁的含量基本穩(wěn)定。

2.2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取本品(批號(hào)：20070201)，照2.2.3方法制備6份樣品測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果平均含量為9.790 mg·g-1，RSD=1.2%。

2.2.9 回收率試驗(yàn) 取本品(批號(hào)：20070201，含量為9.790 mg·g-1)，剪碎，取適量，精密稱定，精密加入等量的硅藻土，研勻，精密稱取約0.5 g，精密加入蘆丁對(duì)照品溶液(0.103 9 mg·mL-1)25 mL，70%甲醇25 mL，照上述方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.2.10 樣品含量測(cè)定 按上述方法測(cè)定3批樣品(20070201，20050501，20061001)含量，結(jié)果蘆丁含量分別為9.790，6.308，4.494 mg·g-1。

表1 蘆丁對(duì)照品回收率試驗(yàn)

3 討論

3.1 展開劑的選擇

地榆鑒別試驗(yàn)參考《中國(guó)藥典》2010年版一部“地榆”項(xiàng)下【鑒別】(2)的方法[9]，由于原展開劑Rf值小，將用水飽和的甲苯改為甲苯，Rf適中。

3.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取蘆丁對(duì)照品的70%甲醇溶液，經(jīng)UV-2201紫外-可見分光光度計(jì)在220～300 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，確定蘆丁在257 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇257 nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3 流動(dòng)相的選擇

參照《中國(guó)藥典》2010年版一部槐花藥材含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相，即甲醇-1%冰醋酸溶液(32∶68)[10]，但本品用此流動(dòng)相分離效果不好，而改為乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)。

3.4 提取方法的考察

供試品溶液分別超聲30，40，60 min，計(jì)算蘆丁含量分別為8.493，9.890，9.871 mg·g-1。說(shuō)明超聲40 min，基本能使樣品提取完全，因此采用上述供試品溶液的制備方法。

3.5 方法評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)建立的TLC和HPLC方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于痔瘡止血丸的質(zhì)量控制。

[1] 曾聰彥，梅全喜，高玉橋，等.槐榆片的薄層鑒別[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，8(5)：46-47.

[2] 譚朝陽(yáng)，譚智艷，羅懷浩，等.痔炎消膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15(4)：20-22.

[3] 陳哲妮，黃婉峰.地榆炭配方顆粒的質(zhì)量控制研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2012，26(2)：66-68.

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[5] 金陽(yáng).健脾顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥，2007，29(9)：1403-1405.

[6] 何建峰，劉紅，余衛(wèi)兵，等.小兒至寶丸中陳皮、人工牛黃及廣藿香的薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19(17)：34.

[7] 姜澤，李東飛，姚為民，等.補(bǔ)金片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13(4)：37-40.

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[9] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：117.

[10] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：333.

QualityStandardofZhichuangZhixueWan

RU Qiu-ming1*，HAN Run-shu2

(1.JinlinProvicialInstituteforFoodandDrungControl，Changchun130033，China) (2.YongjiFoodandDrungofAdministration，Yongji132000，China)

Objective：To establish the quality standard of Zhichuang Zhixue Wan.Methods：Sanguisorbae Radix，Citri Reticulate Pericarpium and Schizonepetae Herba were identified by TLC.The content of rutin in Sophorae Flos was determined by HPLC.The Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used，the mobile phase was acetonitrile-0.1% glacial acetic acid(20∶80)，the flow rate was 1 mL·min-1and detection wavelength was 257 nm，column temperature 30 ℃.Results：The developed TLC spots were quite clear.The linear range of rutin was 0.130 9～1.974 1 μg，the average recovery was 99.8%，RSD=0.9%(n=6).Conclusion：The established TLC and HPLC methods are exclusive，reproducible and suitable for the quality control of Zhichuang Zhixue Wan.

Zhichuang Zhixue Wan；TLC；HPLC；Sanguisorbae Radix；Citri Reticulate Pericarpium；Schizonepetae Herba

2012-10-24)

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汝秋明，E-mail：rqiuming@sina.cn