酒石酸乙酰異戊酰泰樂菌素在豬體內的藥代動力學研究

朱曉娟，王華麗，齊 鵬，何繼紅，張國棟，李丙首，張 君，張 欣，巴利民，趙洪濤，吳家鑫，葛辛玫

［1．中國牧工商（集團）總公司，北京 豐臺100070；2．中牧實業(yè)股份有限公司，北京 豐臺100070；3．中國牧工商（集團）總公司研究院，北京 海淀100095］

乙酰異戊酰泰樂菌素是對泰樂菌素A組分進行3位乙酰化，4′位異戊酰化的泰樂菌素衍生物。通過細胞培養(yǎng)和生物轉化方式，向一種耐熱鏈霉菌ST．E1的發(fā)酵液中補入泰樂菌素溶液，從而生成一種低成本、安全性能高的制備高效泰樂菌素衍生物的方法［1］。這些衍生物有逐漸取代泰樂菌素的趨勢［2］。其應用在治療畜禽呼吸道及消化道疾病方面起到了不可替代的作用［3］。但是若水溶液中含有鐵、鉛等金屬離子時，會使本品失效［4］（中華人民共和國獸藥典第一部，2000）。

乙酰異戊酰泰樂菌素藥動學研究國內報道較少，本研究探討了健康豬口服AIV鹽的藥動學過程并闡明其藥動學特征，旨在為臨床制定合理的給藥方案提供科學依據(jù)。

1 材料

AIV標準品，編號：zm1083，中牧實業(yè)股份有限公司獸藥研究所；酒石酸乙酰異戊酰泰樂菌素（25%可溶性粉），內蒙中牧生物藥業(yè)有限公司。乙腈，冰醋酸，醋酸銨均為分析純；儀器：LC－2010Aht液相儀；試驗動物：健康豬6頭，體重20～25kg，購自北京海淀區(qū)蘇家坨鎮(zhèn)。

2 方法

2．1 色譜條件 色譜柱 Agilent TC－C18柱（150 mm×4．6mm，5μm ）；流動相：乙腈：0．15mol／L乙酸銨緩沖液＝49∶51（v／v），流速：1．0mL／min，檢測波長：289nm，柱溫：40℃，進樣量：75μL。

2．2 樣品處理 取潔凈離心管，吸取血漿0．5mL，加入乙腈1．0mL，漩渦混合震蕩2min，12 000r／min離心10min。取上層液，40℃水浴N2流吹干。殘存物加200μL流動相溶解，漩渦混合2min，12 000r／min離心10min，上清液過濾進樣測定。

2．3 標準曲線的制備 精密稱AIV標準品置容量瓶中，加流動相配制成12．8μg／mL標準溶液。取7支2mL離心管各加入空白血漿，再依次加入AIV標準液制備成6．4、3．2、1．6、0．8、0．2、0．1、0．05 μg／mL的血藥濃度，漩渦混勻，按2．2處理樣品后，取75μL進樣分析。記錄色譜峰面積，回歸計算出標準曲線方程。

2．4 精密度的測定 取空白血漿3份（各1mL），加入 AIV標準液配成0．1、0．8、3．2μg／mL 3種濃度，按2．2方法處理后，各濃度標準液在同1d內重復5次，連續(xù)測3d，計算色譜峰面積的日內、日間標準偏差。

2．5 回收率的測定 取空白血漿3份（各1mL），加入 AIV標準液配成0．1、0．8、3．2μg／mL 3種濃度，按2．2處理，重復測定含量4次，以添量法計算相對回收率。

2．6 給藥方法及采血 AIV鹽以20mg／kg的劑量給豬灌服，給藥前前腔靜脈采血5mL作空白對照，給藥后0．25、0．50、0．75、1、1．5、2、3、4、6、8h前腔靜脈采血5mL。按2．2處理樣品，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2．7 藥動學參數(shù)計算 血藥濃度－時間數(shù)據(jù)用Pk－Solution 2．0軟件進行房室模型擬合，求得藥動學參數(shù)。

3 結果與分析

3．1 色譜圖 AIV出峰時間13．852min，雜峰不干擾，藥峰分離良好。見圖1。

3．2 標準曲線 血漿中AIV在0．05～6．4μg／mL濃度范圍內與峰面積有良好的線性關系，峰面積（Y）為縱坐標，血藥濃度（X）為橫坐標繪制標準曲線方程：Y＝174276X＋15170，r＝0．9989。

3．3 精密度結果 血漿中AIV高、中、低3種濃度的日內精密度和日間精密度均小于5%，符合要求。見表1。

3．4 回收率結果 血漿中AIV高、中、低3種濃度的回收率均大于80%，符合要求。見表2。

3．5 藥時曲線結果 最佳藥時－曲線方程和曲線圖分別為：C＝0．654·e－2．0593·t＋0．9813·e－3．0973·t－1．6353·e－63．3197·t。見圖2。

圖1 高效液相色譜圖

表1 精密度測定結果

表2 回收率測定

圖2 藥－時曲線圖

3．6 藥物動力學參數(shù) 藥物學參數(shù)見表3。

表3 藥物動力學參數(shù)

4 討論

高效液相色譜法（HPLC）在目前國內外藥物檢測很常用。Prats［5］等對泰樂菌素在豬體內的藥物動力學報道。Atefd［6］等對泰樂菌素在山羊體內的藥物動力學進行研究。Kowalski［7］等對泰樂菌素在雞體內的藥物動力學進行研究。曾子建［8］將酒石酸泰樂菌素以25mg／kg、7．5mg／kg、10mg／kg給各只頭本地雞、豬、山羊1次肌肉注射，結果顯示，肌肉注射泰樂菌素在雞、豬、山羊體內的吸收半衰期、達峰時間均較短，但在不同種屬間差異較大。

本試驗采用高效液相色譜法，豬口服（20mg／kg體重）AIV藥物濃度－時間變化規(guī)律呈有吸收因素二室藥代動力學模型。吸收半衰期（t1／2Ka）為0．0149±0．0127d，消除半衰期（t1／2Ke）為0．1138±0．0555d，藥時曲線下面積（AUC）為0．6045±0．0683（μg／mL）·d；達峰時間 Tmax為0．045±0．019d。注意合理科學用藥，就能達到理想效果。

［1］ Arisawa A，Kawamura N，Tsunekawa H，etal．Cloning and Nucleotide Sequences of Two Genes Involved in the 4″＇－O－Acylation of Macrolide Antibiotics from Streptomyces thermotolerans［J］．Biosci Biotech Biochem，1993，57（12）：2020－2025．

［2］ 趙東峰，任翔，朱麗，等．泰樂菌素及其衍生物研究進展［J］．醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)咨詢，2006，3（15）：46－48．

［3］ 鄭敏，牛志強．獸用大環(huán)內酯類抗生素的應用概述［J］．中國動物保健，2009（12）：47－49．

［4］ 中國獸藥典委員會．中華人民共和國獸藥典第一部［M］．北京：化學工業(yè)出版社，2000：11．

［5］ Prats C，Korehi E L G，F(xiàn)rancesch R，etal．Disposition kinetics of tylson administered intravenously and intramucularly to pigs［J］．Res Vet Sci，2002，73：141－144．

［6］ Atef M，Youssef S A，Atta A H，etal．Disposition of tyinsin in goats［J］．Bri Vet，1991，147（3）：207－215．

［7］ Kowalski C，Rolinski Z，Zan R，etal．Pharmacokinetics of tylosin in broiler chickens［J］．PoL J Vet Sci，2002，44（5）：127－130．

［8］ 曾子建，李逐波，古淑英，等．酒石酸泰樂菌素在雞豬山羊體內的藥動學規(guī)律及肌肉藥殘量研究［J］．四川畜牧獸醫(yī)學院學報，2000，14（2）：17－19．