復(fù)方氟苯尼考注射液的處方研制

任 橋，徐 玉，劉煥奇，張啟迪，畢可東

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 青島266109）

氟苯尼考是由美國先靈－葆雅公司于20世紀(jì)80年代末研制成功的一種新型動物專用酰胺醇類廣譜抗菌藥，具有抗菌廣譜、吸收好、體內(nèi)分布廣、安全高效等特點(diǎn)，對敏感菌所致的畜禽細(xì)菌性疾病治療效果顯著［1］。該藥對敏感菌的抗菌活性與氯霉素和甲砜霉素相似，但對耐氯霉素及甲砜霉素的細(xì)菌仍然表現(xiàn)出較高的抗菌活性，如大腸桿菌、克雷伯氏桿菌、溶血性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、胸膜肺炎放線桿菌及傷寒沙門菌等［2－4］。

氟尼辛葡甲胺是美國先靈－葆雅公司于20世紀(jì)90年代研發(fā)的已經(jīng)批準(zhǔn)的少數(shù)獸用非甾體類藥物之一，其解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用強(qiáng)，不良反應(yīng)輕微，劑型和給藥方式多樣，靶動物和臨床適應(yīng)癥廣，為國外獸醫(yī)臨床消費(fèi)量最大的非甾體類抗炎藥［5－8］。

細(xì)菌感染性疾病不僅嚴(yán)重威脅動物的健康，而且還影響動物的生產(chǎn)性能。目前對畜禽的細(xì)菌性感染的治療主要是采用抗生素療法，依靠抗生素的抑菌殺菌作用，迅速清除體內(nèi)病原菌。在獸醫(yī)臨床工作中，常注重應(yīng)用抗生素的抑菌殺菌作用，而忽略對細(xì)菌感染性疾病的對癥治療。本試驗(yàn)以氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺為主藥，既利用氟苯尼考對動物體內(nèi)的病原微生物的抑制作用進(jìn)行對因治療，又利用氟尼辛葡甲胺的解熱、鎮(zhèn)痛，抑制炎性因子等作用進(jìn)行對癥治療，研制氟苯尼考復(fù)方制劑，為氟苯尼考新制劑的研發(fā)和方便臨床用藥、提高療效提供藥劑學(xué)理論根據(jù)。

1 材料與方法

1．1 藥品與試劑 氟苯尼考（含量99．3%，批號：100912），氟尼辛葡甲胺（含量99．4%，批號：1211－00409，齊魯晟華制藥有限公司），溶劑，購自天津市巴斯夫化工有限公司；N，N－2－甲基－乙酰胺，穩(wěn)定劑，苯甲醇，乙醇胺等均為分析純，購自天津市廣成化學(xué)試劑有限公司。無水亞硫酸鈉為市售商品。

1．2 儀器 AR2140電子分析天平（奧豪斯國際貿(mào)易上海有限公司）；HHSYⅡ電熱恒溫水浴鍋（北京長風(fēng)儀器設(shè)備廠）；DHG－9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精密試驗(yàn)設(shè)備有限公司）；YB－Ⅲ型澄明度檢測儀（廈門中村光學(xué)儀器廠）；ZDX－35BI型坐式自動電熱壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）；TH2－C型恒溫振蕩器（江蘇太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）；85－2控溫磁力攪拌器（金壇市恒豐儀器廠）。

1．3 復(fù)方氟苯尼考注射液的處方篩選及優(yōu)化 采用單因素分析方法，并結(jié)合氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺理化性質(zhì)選取符合要求的溶劑、助溶劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑和pH值調(diào)節(jié)劑。經(jīng)過多次預(yù)試驗(yàn)，確定影響復(fù)方制劑穩(wěn)定性的主要因素為輔料的種類及用量等。然后選擇多種輔料進(jìn)行正交試驗(yàn)，以藥物含量作為處方篩選標(biāo)準(zhǔn)，以溶劑一、穩(wěn)定劑、滅菌用水與溶劑一的比例、二甲基乙酰胺作為考察因素，采用L9（33）正交設(shè)計(jì)優(yōu)選處方，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1 正交因素水平考察

1．4 處方工藝 將氟尼辛葡甲胺加到一定量的滅菌用水中加熱攪拌至澄清，然后加入無水亞硫酸鈉，并加熱到45℃攪拌至澄清，得溶液a；將氟苯尼考溶解在一定量的溶劑一中，用攪拌器勻速攪拌，使之完全溶解，然后加入二甲基乙酰胺、穩(wěn)定劑，繼續(xù)用攪拌器攪拌至澄清，得溶液b；合并上述的溶液a和溶液b，加熱攪拌至澄清，再加入局部止痛劑苯甲醇，攪拌混合均勻后，用乙醇胺調(diào)節(jié)pH值6．5～7．5后，用微孔濾膜過濾，裝瓶。

1．5 質(zhì)量控制

1．5．1 澄明度檢查 參照《中國獸藥典》2010版第一部可見異物檢測法進(jìn)行澄明度檢查［9］。取復(fù)方氟苯尼考注射液轉(zhuǎn)移至潔凈透明的專用玻璃容器內(nèi)，用YB－Ⅲ型澄明度檢測儀分別在黑色和白色背景下，用手持玻璃容器頸部使藥液輕輕翻轉(zhuǎn)，距20cm處觀察。藥液中凡有塊狀、點(diǎn)狀物、玻璃屑、脫片等塊狀物、混濁和沉淀的，均作廢品處理，不合格。

1．5．2 pH值檢查 用精密pH計(jì)測定。

1．5．3 無菌檢查 取復(fù)方氟苯尼考注射液6瓶，每批2瓶，采用直接接種法將藥液接種在普通營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)48h后再接種至普通營養(yǎng)平板，37℃培養(yǎng)48～72h。取0．9%無菌氯化鈉溶液同法操作，作為陰性對照；取0．9%有菌氯化鈉溶液同法操作，作為陽性對照。若營養(yǎng)肉湯清亮透明，營養(yǎng)瓊脂平板無菌生長，則表明制劑無菌，符合規(guī)定；若普通肉湯混濁或營養(yǎng)瓊脂平板有菌落繁殖（涂片鏡檢），則不符合規(guī)定。

1．5．4 熱原檢查 根據(jù)2010版中國獸藥典，采用家兔熱原檢測法［10］。取3批復(fù)方氟苯尼考注射液，取健康家兔3只，測定其正常體溫后15min以內(nèi)，按20mg／kg體重劑量，肌肉注射復(fù)方氟苯尼考注射液，然后每隔1h按前法測量體溫1次，共6次。以6次體溫中最高的1次減去正常體溫，即為該家兔體溫的升高度數(shù)。如3只家兔中有1只體溫升高0．6℃或0．6℃以上，或3只家兔體溫升高均低于0．6℃，但升高的總數(shù)達(dá)1．4℃或1．4℃以上，應(yīng)另取5只家兔復(fù)試，方法同上。在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)觀察家兔體溫升高的情況，以判定該供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。

2 結(jié)果

2．1 復(fù)方氟苯尼考注射液的處方篩選 按L9（33）正交表安排試驗(yàn)，由表2試驗(yàn)數(shù)據(jù)及極差R的大小可以判斷出影響復(fù)方注射液穩(wěn)定性的因素主次順序?yàn)椋喝軇┮?＞穩(wěn)定劑＞滅菌用水與溶劑一的比值＞二甲基乙酰胺，并可得出最佳處方為A2B2C3D1的組合，即溶劑一（25%），穩(wěn)定劑（10%），滅菌用水與溶劑一的比值（3∶2），二甲基乙酰胺（15%）。最優(yōu)處方為氟苯尼考10%～30%，氟尼辛葡甲胺0．5%～2．5%，注射溶劑45%～65%，穩(wěn)定劑10%，抗氧化劑0．1%～0．2%，滅菌用水加至100mL。

2．2 復(fù)方氟苯尼考注射液的質(zhì)量控制

2．2．1 澄明度檢查結(jié)果 結(jié)果表明，注射液為淡黃色澄清液體，均未檢出可見異物，可以判定復(fù)方氟苯尼考注射液制劑澄明度符合藥典規(guī)定。

2．2．2 pH值檢查結(jié)果 注射液的pH值（要求與血液相等或接近），一般控制在4．0～9．0的范圍內(nèi)，經(jīng)測定所配制的注射液的pH值都在6．5～7．5之間，符合注射液pH值要求。

2．2．3 無菌檢查結(jié)果 將接種的營養(yǎng)肉湯48h后自培養(yǎng)箱中取出觀察結(jié)果：注射液和陰性對照肉湯透明；陽性對照渾濁。再將肉湯和注射液分別接種至營養(yǎng)瓊脂平板，恒溫培養(yǎng)2d后取出觀察：僅陽性對照有白色菌落。表明該制劑符合藥典規(guī)定的無菌要求。

2．2．4 熱原檢查結(jié)果 熱原檢查家兔體溫變化情況見表3。

表2 正交試驗(yàn)

表3 熱原檢查家兔體溫變化情況

由表3可以看出，3只家兔體溫升高分別為0．13℃、0．07℃、0．20℃，均低于0．6℃，升高總數(shù)為0．40℃，低于1．4℃，由此可以判定復(fù)方氟苯尼考注射液制劑中所含熱原的限度符合藥典規(guī)定。

3 討論

本試驗(yàn)采用單因素結(jié)合正交試驗(yàn)的方法，成功制備了氟苯尼考的復(fù)方注射劑，且該制劑制備工藝簡單，易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

正交試驗(yàn)表明，溶劑是影響注射液的主要因素，注射劑溶劑起溶解、混懸或乳化藥物的作用，因此，必須符合注射用的要求。氟尼辛葡甲胺易溶于水，而氟苯尼考在水中幾乎不溶，故選擇溶劑時(shí)，應(yīng)考慮二者的物理性質(zhì)，選出合適的溶劑。通過多次預(yù)試驗(yàn)，表明溶劑一對注射劑穩(wěn)定性的影響較大，可能由于氟苯尼考比較難溶，若溶解不徹底，短時(shí)間常溫放置即可析出。通過加入助溶劑以增加其在某一特定溶劑中的溶解度，以達(dá)到臨床治療所需濃度要求，并能保持注射液的穩(wěn)定性。通過試驗(yàn)表明，N－N－二甲基甲酰胺按一定比例加入，可以達(dá)到較好的溶解效果，但是經(jīng)二甲基乙酰胺助溶后的氟苯尼考溶液，與水混合后很不穩(wěn)定，需選擇合適的穩(wěn)定劑，增加注射液的穩(wěn)定性，這與相關(guān)報(bào)道［11］相一致。

參照注射液的質(zhì)量要求對復(fù)方氟苯尼考注射液分別進(jìn)行澄明度檢查、酸堿度檢查、無菌檢查和熱原檢查。結(jié)果顯示，復(fù)方氟苯尼考注射液澄明度檢查未檢出可見異物，注射液pH值在6．5～7．5之間，無熱原，無菌檢查符合要求。

［1］ Nordmo R，Varma K J，Sutherland I H．Florfenicol in Atlantic Salmon，SalmosalarField Evaluation of Efficacy against Frurnculo－sis in Norway［J］．JournalofFishDiseases，1994（17）：239－244．

［2］ 周洪波．氟苯尼考和中藥黃芪淫羊藿合劑對雞體免疫反應(yīng)的影響［D］．武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003．

［3］ 董永軍．新型獸用廣譜抗菌素氟苯尼考研究進(jìn)展［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34（15）：3693－3694．

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［7］ 陳杖榴．獸醫(yī)藥理學(xué)［M］．3版．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：186．

［8］ Adams H R．Veterinary Pharmacology and Therapeutics［M］．8th ed．Ames：Iowa State University Press，2000：442－443．

［9］ 中國獸藥委員會．中華人民共和國獸藥典第一部［M］．2010年版．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011：95．

［10］中國獸藥委員會．中華人民共和國獸藥典第一部［M］．2010年版．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011：129－130．

［11］劉照云．氟苯尼考溶液研制及其穩(wěn)定性試驗(yàn)和臨床療效研究［D］．北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005．