hMSH6和P53在散發(fā)性結腸癌中的表達及意義

田秀麗，齊 峰(.承德醫(yī)學院，河北承德 067000;2.保定市第一中醫(yī)院)

結腸癌被發(fā)現(xiàn)時大多處于中晚期，死亡率僅次于肺癌和肝癌，居惡性腫瘤死亡榜的第三位，其中80%以上為散發(fā)性結腸癌(SCC)[1]。研究發(fā)現(xiàn)，結腸癌發(fā)生發(fā)展的途徑主要有染色體不穩(wěn)定(CIN)途徑(以癌基因和抑癌基因為主)和微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)途徑(以錯配修復基因(MMR)為主)[2]。MMR是DNA修復系統(tǒng)的重要成員，已證實MMR的改變與多種惡性腫瘤尤其是結直腸癌的發(fā)病密切相關，并且與約15%的散發(fā)性結直腸癌有關[3-4]。本研究分別選取代表MSI途徑的hMSH6基因和代表CIN途徑的p53基因，采用免疫組化法檢測二者在SCC中的表達情況，探討hMSH6和P53蛋白在SCC發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 保定市第一中心醫(yī)院病理科2010年-2012年經(jīng)手術切除的結腸癌患者的存檔蠟塊60例，以距腫瘤邊緣＞5.0cm的正常癌旁組織60例作為對照，所有病例均經(jīng)病理明確診斷。所有結腸癌患者臨床資料完整，術前未接受放療和化療，TNM分期為Ⅰ-Ⅳ期。除外家族性多發(fā)性腺癌(FAP)患者和HNPCC患者。

1.2 方法與試劑 石蠟包埋的組織4μm連續(xù)切片，采用免疫組化Envision二步法檢測hMSH6和P53蛋白的表達，一抗(購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，工作濃度1:100)4℃孵育過夜，DAB顯色，蘇木素復染。以PBS代替一抗作為陰性對照。以細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應。

1.3 結果判定 每張切片計數(shù)5個高倍視野(10×40)，每個視野計數(shù)100個細胞。根據(jù)Fromowitz等[5]的方法判定結果:①不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;②著色細胞占計數(shù)細胞百分率≤5%為0分，6%-20%為1分，21%-50%為2分，≥51%為3分。以染色程度與染色細胞百分率得分乘積為最后得分:0-1分為陰性，2分以上為陽性。

1.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料行卡方檢驗，相關分析采用Spearman相關分析。

2 結果

2.1 SCC和癌旁正常組織hMSH6和P53蛋白的表達情況 hMSH6和P53蛋白陽性產(chǎn)物位于細胞核。SCC中hMSH6的陽性表達率明顯低于癌旁組織，P53的陽性表達率明顯高于癌旁組織，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01，P＜0.05)。見表1。

表1 SCC和癌旁組織hMSH6和 P53蛋白的表達情況[n(%)]

2.2 hMSH6和 P53表達與SCC臨床病理特征的關系SCC中hMSH6蛋白的表達與腫瘤浸潤深度和發(fā)生部位有關(P＜0.05);與患者性別、年齡、腫瘤大小、組織學分級、有無淋巴結轉移無關(P＞0.05)。SCC中P53蛋白的表達與以上臨床病理特征均無關(P＞0.05)。見表2。

表2 hMSH6和P53表達與SCC臨床病理特征的關系(n=60)

2.3 SCC中hMSH6與P53表達的相關性 SCC中hMSH與P53的表達呈負相關(P＜0.05)。見表3。

表3 SCC 中hMSH6與P53表達的相關性

3 討論

MMR是近年來在研究HNPCC時分離出來的一組遺傳易感基因，是一種能修復細胞中DNA堿基錯配的安全保障體系。MMR系統(tǒng)失活導致腫瘤發(fā)生的途徑主要是引起微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)以及MMR系統(tǒng)失活直接導致癌基因激活或抑癌基因失活，從而誘發(fā)癌變[6]。

hMSH6作為MMR家族的重要成員，在結腸癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。hMSH6亦稱為G/T錯配結合蛋白(GTBP)，1995年發(fā)現(xiàn)hMSH6參與構成錯配結合因子，1997年首次報道了人類hMSH6基因突變，其突變時癌基因和抑癌基因的突變率增加，進而引起遺傳不穩(wěn)定復制錯誤增加和MSI，使細胞的腫瘤易感性增加[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，60例SCC中hMSH6蛋白陽性表達率為76.7%與林武華等[8]的研究結果一致，表明SCC中確實存在hMSH6的低表達。本研究還發(fā)現(xiàn)，SCC中hMSH6陽性表達與腫瘤浸潤深度和發(fā)生部位有關，因此，對高危人群進行hMSH6篩查，可為結腸癌的發(fā)生和轉歸提供依據(jù)。

p53基因分為野生型和突變型兩種，野生型p53為抑癌基因，它在細胞中含量很少且半衰期短，免疫組化法很難檢出;突變型p53是一種癌基因，能促進細胞的惡性轉化，在細胞中其蛋白的表達量較高且半衰期延長，通過免疫組化法檢測到的P53蛋白基本上是突變型P53蛋白[9]本研究發(fā)現(xiàn)，60例SCC中，突變型P53蛋白的陽性表達率為55%，明顯高于癌旁正常組織，說明突變型p53基因與結腸癌的發(fā)生關系密切;但本研究未發(fā)現(xiàn)突變型p53基因與SCC的臨床病理特征有關。

但一個癌基因的激活不足以引起細胞的惡性轉化，本研究中SCC組織hMSH6蛋白與突變型P53蛋白的表達呈負相關，表明SCC中hMSH6蛋白的低表達可能是p53蛋白高表達的原因之一，二者共同作用導致了SCC的發(fā)生發(fā)展。hMSH6蛋白低表達和突變型P53蛋白高表達可能是結腸癌發(fā)生的危險因素，二者與SCC發(fā)生的確切關系還有待進一步的研究。

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