赤雹莖葉不同提取物抗炎活性比較*

趙聰亞，藺 曼，段興華，張倩瑜，孫冬欣，佟繼銘

(1.承德醫(yī)學院中藥學系2010級，河北承德 067000；2.指導教師)

赤雹(Thladiantha dubia Bunge）為葫蘆科多年蔓生草本植物，滿族民間長期用于治療風濕痛、腰腿痛、軟組織損傷等[1]。文獻報道赤雹果乙醇提取物對急、慢性炎癥模型均有顯著抗炎作用[2];赤雹果水提取物、乙醇提取物及水溶性物質均有顯著的鎮(zhèn)痛作用[3]；另外，赤雹果治療風濕性關節(jié)炎，原發(fā)性和繼發(fā)性痛經(jīng)等均有較好的療效[4-6]；赤雹根乙醇提取物及總皂苷具有顯著的鎮(zhèn)痛抗炎活性[7-8]。本研究旨在比較赤雹莖葉水提取物和乙醇提取物的抗炎活性，為進一步探討赤雹莖葉的有效部位奠定基礎。

1 材料

1.1 實驗動物 健康雄性昆明種小鼠，體重20-22g 購自天津市山川紅實驗動物科技有限公司，許可證號：SCXK(津）：2009-0001.NO.0003995。

1.2 藥品與試劑 赤雹莖葉乙醇提取物(ethanol extract of stem and leaf of Thladiantha dubia Bunge，EETSL) 和水提取物(water extract of stem and leaf of Thladiantha dubia Bunge，WETSL）(承德醫(yī)學院中藥研究所制備)；二甲苯(天津市福晨化學試劑廠，批號20120215）；阿司匹林腸溶片(石家莊康力藥業(yè)有限公司，批號120316)；醋酸地塞米松片(張家口云峰制藥廠，批號1206202)；戊巴比妥鈉(廣州化學試劑廠，批號20110601）。

1.3 儀器 上皿電子天平(上海精科天平，批號JA2003)。

2 方法

2.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗 雄性昆明種小鼠90只，隨機分為空白對照組，地塞米松組(5mg/kg），阿司匹林組（200 mg/kg），EETSL 大、中、小(9g/kg、4.5g/kg、2.25g/kg，按生藥計算）劑量組，WETSL大、中、小(9g/kg、4.5g/kg、2.25g/kg，按生藥計算）劑量組，每組10只。小鼠給藥容積20ml/kg，空白對照組小鼠灌胃等容積的蒸餾水。各組小鼠連續(xù)灌胃給藥3d，末次給藥45min將二甲苯(0.02ml/只）均勻涂在小鼠左耳前后兩面；右耳不涂抹二甲苯，作為對照。1h后將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用6mm直徑打孔器分別在左、右耳的相同部位打下圓耳片，稱重，計算腫脹度：腫脹度=左耳片重量－右耳片重量(mg）/體重(g)。

2.2 小鼠棉球肉芽腫實驗

2.2.1 棉球制備：電子天平精確稱取脫脂棉180份，每份5mg，團成球形，以1.5kPa壓力高壓滅菌20min，每個棉球加氨芐青霉素(1mg/0.1ml）浸泡，50℃烘箱放置12h，烤干，備用。

2.2.2 植入棉球：昆明種小鼠100只，將滅菌棉球植入小鼠兩側腋窩皮下。24h后，將小鼠隨機分為空白對照組(植入棉球不給藥）、EETSL和WETSL大、中、小劑量組、地塞米松組和阿司匹林組，分組及給藥方法同2.1，每組10只。各組小鼠連續(xù)灌胃給藥7d，第8d頸椎脫臼處死小鼠，取出棉球，稱重，計算棉球肉芽腫濕重:肉芽腫濕重＝棉球肉芽腫濕重－棉球重量(mg)/體重(g）;然后將棉球肉芽腫放入恒溫干燥箱60℃干燥12h后稱重，計算肉芽腫干重：肉芽腫干重＝棉球肉芽腫干重－棉球重量(mg)/體重(g）。

2.2.3 對小鼠免疫器官指數(shù)的影響：小鼠取出棉球后，取脾、胸腺，稱重，計算各組小鼠臟器指數(shù)：臟器指數(shù)=臟器重量(mg）/體重(g)。

3 結果

3.1 赤雹莖葉提取物對二甲苯致小鼠耳腫脹度的影響EETSL和WETSL各劑量組小鼠耳腫脹度顯著低于空白對照組(P<0.01）；WETSL中劑量組小鼠耳腫脹度顯著低于EETSL中劑量組(P<0.05），EETSL和WETSL其它相同劑量組小鼠耳腫脹度比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05）。見表1。

表1 赤雹莖葉提取物對二甲苯致小鼠耳腫脹度的影響( ±s，n=10)

表1 赤雹莖葉提取物對二甲苯致小鼠耳腫脹度的影響( ±s，n=10)

與空白對照組比較:*P<0.01;與WETSL中劑量組(4.5g/kg）比較:#P<0.05

組別 劑量(g/kg) 腫脹度(mg/10g)空白對照 — 0.80±0.20阿司匹林 0.2 0.48±0.02*地塞米松 0.005 0.52±0.02*9.0 0.38±0.17*EETSL 4.5 0.49±0.12*#2.25 0.60±0.14*9.0 0.40±0.04*WETSL 4.5 0.38±0.20*2.25 0.59±0.16*

3.2 赤雹莖葉提取物對小鼠棉球肉芽腫重量的影響EETSL大劑量組、WETSL三個劑量組肉芽腫濕重顯著低于空白對照組(P<0.01，P<0.05）；EETSL和WETSL大劑量組肉芽腫干重顯著低于空白對照組(P<0.01，P<0.05）；WETSL中劑量組肉芽腫濕重顯著低于EETSL中劑量組(P<0.05），兩種提取物其它相同劑量間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05）。見表2。

表2 赤雹莖葉提取物對小鼠棉球肉芽腫重量的影響( ±s，n=10)

表2 赤雹莖葉提取物對小鼠棉球肉芽腫重量的影響( ±s，n=10)

與空白對照組比較:*P<0.01，**P<0.05;與WETSL中劑量組(4.5g/kg）比較:#P<0.05

組別 劑量(g/kg) 肉芽濕重(mg/10g） 肉芽干重(mg/10g）空白對照 — 60.39±9.83 10.79±1.85阿司匹林 0.2 48.14±8.42* 9.14±2.84地塞米松 0.005 39.28±4.93* 4.58±1.39*9 44.34±3.80* 7.84±1.56**EETSL 4.5 56.27±6.72# 9.63±4.09 2.25 56.32±12.63 10.38±2.74 9 41.41±6.47* 6.73±2.73*WETSL 4.5 47.10±6.88* 8.41±1.88 2.25 52.56±7.38** 9.86±3.62

3.3 赤雹莖葉提取物對小鼠免疫器官指數(shù)的影響 EETSL和WETSL大、中劑量組脾臟指數(shù)顯著低于空白對照組(P<0.01，P<0.05）；EETSL大劑量和WETSL大、中劑量組胸腺指數(shù)顯著低于空白對照組(P<0.01，P<0.05）；WETSL中劑量組脾、胸腺指數(shù)顯著低于EETSL中劑量組，兩種提取物其它相同劑量間差異比較均無統(tǒng)計學意義(P>0.05）。見表3。

表3 對炎癥小鼠免疫器官指數(shù)的影響( ±s，n=10)

表3 對炎癥小鼠免疫器官指數(shù)的影響( ±s，n=10)

與空白對照組比較:*P<0.01，**P<0.05;與WETSL中劑量組（4.5g/kg）比較:#P<0.05

組別 劑量(g/kg） 脾臟指數(shù)（mg/10g） 胸腺指數(shù)（mg/10g）空白對照 — 22.09±1.25 20.90±2.45阿司匹林 0.2 18.19±1.01** 15.78±2.31*地塞米松 0.005 13.89±8.47* 13.76±0.86*9 15.44±1.32* 16.67±2.07**EETSL 4.5 18.48±2.91**# 19.36±3.18#2.25 21.67±2.14 20.97±2.96 9 14.66±1.85* 14.02±2.06*WETSL 4.5 15.40±1.49* 15.84±1.31*2.25 22.89±3.31 20.72±7.34

4 討論

炎癥反應是機體對外界刺激的防御反應，分為急性炎癥反應和慢性炎癥反應。急性炎性反應是炎性介質引起微血管通透性升高，使血漿成分與白細胞滲出，粒細胞解體并釋放溶酶體酶，致使腫脹或組織損傷[9]。慢性炎性反應是由于免疫細胞對異物或死亡細胞的吞噬，并釋放多種炎性介質，同時血管和淋巴管以及附近的纖維細胞和巨噬細胞增殖，致結締組織纖維化和肉芽腫形成[10-11]評價中藥的抗炎活性，一般采用以血管通透性為主要改變的急性炎癥模型(如二甲苯誘導的小鼠耳腫脹）、以肉芽組織增生為特點的慢性炎癥模型(小鼠棉球肉芽腫）及對免疫功能的影響等進行綜合評價。

本研究比較了赤雹莖葉兩種提取物對小鼠急性炎癥模型(二甲苯致小鼠耳腫脹實驗）、慢性炎癥模型(棉球肉芽腫實驗）和免疫器官指數(shù)的影響，結果發(fā)現(xiàn)，EETSL和WETSL三個劑量對小鼠急性炎癥反應、慢性炎癥反應均有顯著抑制作用，并且二者均能降低小鼠免疫器官的指數(shù)。本研究表明，赤雹莖葉兩種提取物均能有效抑制急性炎癥引起的血管擴張、滲出和水腫，以及慢性炎癥引起的肉芽組織形成，雖然WETSL中劑量組的抗炎作用優(yōu)于EETSL中劑量組，但是否提示W(wǎng)ETSL的抗炎作用強于EETSL，尚待進一步的深入研究。

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