骨肉瘤中CD147、MMP-2的表達和意義

崔 陽，崔麗嶸，張 濤，徐志濤，田 躍

(1.承德醫(yī)學院，河北承德 067000;2.安國市醫(yī)院;3.保定市第二醫(yī)院)

骨肉瘤是最常見的惡性成骨性腫瘤之一，好發(fā)于青少年，特點是容易早期肺轉移，5年生存率低，預后極差，嚴重影響青少年的身心健康。骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉移是一個長期、多步驟、多因素參與的復雜過程，目前相關的分子機制尚不完全清楚。細胞外基質金屬蛋白酶誘導劑(EMMPRIN/CD147)及基質金屬蛋白酶(MMPs)作為降解細胞外基質的重要酶類，已成為近年來腫瘤領域的研究熱點。目前的研究表明，CD147、MMPs可高度表達于多種腫瘤，并可通過多種途徑誘導MMPs的釋放，從而促進腫瘤細胞的侵襲和轉移[1-2]。本研究采用免疫組織化學染色SP法檢測了CD147、MMP-2在骨肉瘤中的表達情況，并分析了二者與骨肉瘤臨床病理特征的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2003年l月-2013年5月，承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院、保定市第二醫(yī)院、河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院手術切除的骨肉瘤標本37例，骨軟骨瘤標本10例，均經病理檢查證實。37例骨肉瘤患者中，男20例、女17例，平均年齡22.5歲(3-58歲);臨床分期按Enneking外科分期法，組織分型參照Dahlin標準;有肺轉移23例。

1.2 方法 所有標本經10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，5μm連續(xù)切片。CD147、MMP-2兔抗人多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術公司，工作濃度分別為1:100和1:50。采用SP免疫組織化學染色法檢測CD147和MMP-2的表達情況。以細胞膜或細胞漿中出現棕黃色顆粒為陽性反應;用已知CD147或MMP-2陽性的肺癌標本做陽性對照，PBS替代一抗作陰性對照。

1.3 結果判定 免疫組化結果根據染色程度及陽性細胞百分數進行評分。染色程度:基本不著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者為2分，著色深者為3分;陽性細胞百分數:每張切片于高倍鏡下(×400)隨機選取10個視野，計算每個視野陽性細胞的百分比，取10個視野的平均值作為陽性細胞百分數，≤5%為0分、6%-25%為1分、26%-50%為2分、≥51%為3分。以染色程度得分和陽性細胞百分數得分的乘積計算總分:0-1分為陰性(－)，2-3分為弱陽性(+)，4-5分為中度陽性(++)，≥6分為強陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計分析 應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理，樣本率的比較采用卡方檢驗，相關性采用Spearman檢驗。

2 結果

2.1 CD147、MMP-2在骨肉瘤和骨軟骨瘤中的表達 CD147、MMP-2陽性產物位于骨肉瘤細胞的胞膜和胞漿，為棕黃色顆粒樣，間質及正常組織中無著色或少量著色。骨肉瘤中CD147、MMP-2的陽性表達率均明顯高于骨軟骨瘤，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。見表1。

表1 CD147、MMP-2在骨肉瘤和骨軟骨瘤組織中的表達

2.2 CD147、MMP-2表達與骨肉瘤臨床病理特征的關系CD147、MMP-2在骨肉瘤組織中的陽性表達與年齡、性別和Dahlin組織分型無關(P＞0.05)。CD147、MMP-2在骨肉瘤組織中的陽性表達與Enneking分期和肺轉移有關(P＜0.01):隨骨肉瘤臨床分期的增加，CD147和MMP-2的陽性表達率逐漸升高;有肺轉移者CD147和MMP-2的陽性表達明顯高于無肺轉移者。見表2。

表2 CD147、MMP-2表達與骨肉瘤臨床病理特征的關系

2.3 骨肉瘤中CD147與MMP-2表達的相關性 骨肉瘤中，CD147與MMP-2的表達呈正相關(P＜0.01)。見表3。

表3 骨肉瘤中CD147與MMP-2表達的相關性

3 討論

腫瘤的侵襲和轉移是一個多因素參與、多步驟的復雜過程，包括原發(fā)腫瘤浸潤、基底膜降解、腫瘤細胞進出血管和腫瘤細胞對靶組織的侵襲等環(huán)節(jié)[3]。此過程中，細胞外基質是腫瘤遷移的自然屏障，起著關鍵性作用。MMP-2是MMPs超家族成員之一，它能特異性降解基質膜中的主要成分Ⅳ型膠原，使基底膜喪失完整性，還能通過毛細血管內生、新生血管生成等促進腫瘤的生長和擴散。CD147屬于免疫球蛋白超家族，不但能刺激腫瘤細胞及腫瘤間質成纖維細胞產生MMPs，也可以通過影響血管內皮生長因子刺激腫瘤的血管生成，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。近年來，關于CD147與腫瘤關系的研究報道表明，在惡性黑色素瘤、結直腸癌、肝癌等腫瘤細胞中均發(fā)現有CD147表達的增高，且與腫瘤的惡性程度和浸潤轉移密切相關[4-6]。

本研究發(fā)現，骨軟骨瘤基本不表達CD147，骨肉瘤中CD147、MMP-2的陽性表達率明顯高于骨軟骨瘤，并且隨著腫瘤臨床分期的增高，CD147和MMP-2的表達也升高且有肺轉移的骨肉瘤患者CD147、MMP-2的陽性表達率明顯高于無肺轉移的，說明二者的表達與骨肉瘤的轉移和惡性程度有關。Wu等[7]報道，膽囊癌中CD147和MMP-的表達明顯高于慢性膽囊炎性病變，且CD147與MMP-同時陽性表達預后最差，可見二者在膽囊癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，聯(lián)合檢測可以提示腫瘤預后。本研究還發(fā)現骨肉瘤中CD147和MMP-2的表達呈正相關，與Zhong等[8在前列腺癌中的研究相符，提示二者在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。因此推測，CD147和MMP-2同時陽性表達是多種惡性腫瘤預后差的重要標志。

綜上所述，CD147和MMP-2與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展以及侵襲、轉移密切相關，二者聯(lián)合檢測有助于骨肉瘤的早期診斷及預后評估。

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