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    茵陳多糖對妊娠膽汁淤積大鼠肝臟氧化損傷的保護作用研究

    2013-09-14 08:48:18范麗梅徐立堃胡春玲林常青李莉群
    中國醫(yī)藥導報 2013年7期
    關鍵詞:茵陳勻漿淤積

    范麗梅 徐立堃 張 蘭 胡春玲 林常青 李莉群

    1.廣東省婦幼保健醫(yī)院,廣東廣州 511400;2.廣州中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院,廣東廣州 510405

    妊娠膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是女性妊娠期間常見的并發(fā)癥,ICP 不僅引起孕婦肝臟功能損傷,膽汁酸的毒性作用也是不良妊娠結局的原因之一[1-2]。茵陳作為利濕退黃的中藥在ICP的治療中具有獨特的功效,茵陳中具有多種有效成分,其中茵陳多糖是具有生物活性的組分之一[3]。本文就茵陳多糖對ICP大鼠肝臟氧化損傷的保護作用進行研究。

    1 材料與方法

    1.1 藥品與儀器

    茵陳多糖(課題組萃取提純),超氧化物歧化酶(erythrocuprein,SOD)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶 (glutathione peroxidase,GPx)、 過氧化氫酶(catalase,CAT)檢測試劑盒(南京建成生物功臣研究所),分光光度計(常州醫(yī)用儀器廠)。

    1.2 動物造模及干預

    32只雌性清潔級SD大鼠由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供,鼠齡 6~8 周,體重(180 ±25)g,采用隨機數(shù)字表法將其分為對照組、模型組、低劑量組及高劑量組,每組8只,分籠飼養(yǎng),間斷光照,定量給食,自由飲水。大鼠適應環(huán)境后模型組、低劑量組及高劑量組采用苯甲酸雌二醇注射法建立妊娠膽汁淤積大鼠模型,5 mg/kg 苯甲酸雌二醇(1 mg/mL)頸部皮下注射,對照組大鼠給予等劑量生理鹽頸部皮下注射,7d后模型組、低劑量組及高劑量組大鼠毛皮黃染表示造模成功。高劑量組[100mg/(kg·d),100 mg/mL]及低劑量[50mg/(kg·d),50 mg/mL]別給予茵陳多糖生理鹽水溶液腹腔注射,對照組及模型組每日腹腔注射等體積生理鹽水,連續(xù)7d。

    1.3 標本采集

    茵陳多糖及生理鹽水干預7d后在氯胺酮麻醉下開胸剪開心臟采集血液標本,低溫分離血清,深低溫凍存。開腹采集肝臟中葉組織標本,制備組織勻漿。

    1.4 肝組織勻漿制備

    大鼠肝臟組織標本冰鹽水漂洗、剪碎,制備組織勻漿,勻漿介質為蒸餾水1 000 mL pH 7.4,EDTA-2Na 0.01 mol/L,Tris-HCL 0.1 mmol/L,0.8%NaCl 溶液,蔗糖 0.01 mmol/L,組織勻漿后低溫高速離心,留取上清液待測。

    1.5 標本檢測

    大鼠冰凍血清解溶后采用自動生化分析儀檢測血清谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、 谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、直接膽紅素(direct bilirubin, DBIL)及間接膽紅素(indirect bilirubin,IBLI)水平。肝組織勻漿上清液采用比色法檢測 SOD、MDA、GPx,、CAT 濃度,標準品繪制標準曲線,依據(jù)濃度曲線計算樣品濃度,檢測過程嚴格按照試劑使用說明書進行。

    1.6 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 11.5 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(±s)表示,多組間比較采用方差分析,組間兩兩比較采用q檢驗,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 各組大鼠肝功能生化指標比較

    模型組大鼠血清 ALT、AST、ALP、DBIL 及 IBLI水平均高于對照組(均P<0.05);低劑量組及高劑量組大鼠血清ALT、AST、ALP、DBIL 及IBLI水平均低于模型組, 高于對照組(均P<0.05), 低劑量組大鼠血清 ALT、AST、ALP、DBIL 及IBLI水平均高于高劑量組(均P<0.05)。見表1。

    2.2 各組大鼠肝組織氧化還原酶系活力比較

    低劑量組及高劑量組大鼠肝組織勻漿MDA 活力均高于對照組(P<0.05),低于模型組(P<0.05);低劑量組肝組織勻漿MDA 活力高于高劑量組(P<0.05);低劑量組及高劑量組大鼠肝組織勻漿SOD、GPx,、CAT 活力高于模型組(P<0.05),低于對照組(P<0.05);低劑量組肝組織勻漿 SOD、GPx,、CAT 活力低于高劑量組(P<0.05)。見表2。

    3 討論

    ICP是一種在妊娠中晚期出現(xiàn),以皮膚瘙癢及黃疸為特點的妊娠期并發(fā)癥。ICP的發(fā)病與多種因素有關,近年來的研究結果顯示,遺傳易感性、內(nèi)分泌激素代謝異常及免疫功能異常等均參與ICP的發(fā)病[4-5]。ICP的發(fā)生有地域、種族及家族聚集傾向,肝毛細膽管轉運器突變基因以及酶類表達異常等均參與發(fā)病。在妊娠期雌激素水平上升引起肝細胞的能量代謝障礙,能夠導致細胞膜的流動性下降及膽鹽代謝障礙,雌激素受體也能夠同膽汁酸競爭性結合轉運載體,同時膽管系統(tǒng)的通透性升高,引起膽汁的淤積及返流,導致膽汁淤積[6-7]。

    表1 各組大鼠血清ALT、AST、ALP、DBIL及IBLI水平比較(±s)

    表1 各組大鼠血清ALT、AST、ALP、DBIL及IBLI水平比較(±s)

    注:與對照組比較,#P<0.05,與模型組比較,※P<0.05,與高劑量組比較,*P<0.05;ALT:谷丙轉氨酶;AST:谷草轉氨酶;ALP:堿性磷酸酶;DBIL:直接膽紅素;IBLI:間接膽紅素

    組別 只數(shù) ALT(U/L)AST(U/L)ALP(U/L)DBIL(μmol/L)IBIL(μmol/L)對照組模型組高劑量組低劑量組F值P值8888 29.6±7.6 204.2±37.5#58.2±7.6#※104.5±7.2?!?02.6<0.05 72.4 ±19.4 257.4±40.2#57.4 ±8.9#※117.8±18.6?!?5.4<0.05 96.4±22.0 406.2±37.8#129.5±15.0?!?16.7 ±30.4?!?7.5<0.05 4.2±1.2 28.6±5.9#11.4±2.7?!?9.5±3.2#※*28.6<0.05 3.7 ±1.6 39.2±8.4#12.6±3.1?!?4.3±4.7?!?1.8<0.05

    表2 各組大鼠肝組織 SOD、MDA、GPx,、CAT 活力比較(±s)

    表2 各組大鼠肝組織 SOD、MDA、GPx,、CAT 活力比較(±s)

    注:與對照組比較,#P<0.05,與模型組比較,※P<0.05,與高劑量組比較,*P<0.05;SOD:超氧化物歧化酶;MDA:丙二醛;GPx:谷胱甘肽過氧化物酶;CAT:過氧化氫酶

    組別 只數(shù) SOD(nmol/mL)MDA(nmol/mL)GPx(nmol/mL)CAT(nmol/mL)對照組模型組高劑量組低劑量組F值P值8888 162.3±22.4 22.9±5.2#82.9 ±13.4#※37.6 ±10.9?!?8.2<0.05 4.6±1.0 18.2±4.1#7.6 ±2.5?!?1.0 ±2.2?!?2.6<0.05 40.2 ±12.5 11.8±3.6#34.6 ±7.0?!?9.2 ±4.4#※*127.9<0.05 16.8±4.3 4.2±1.3#14.6±1.7?!?.8 ±2.1?!?1.6<0.05

    ICP 不僅對母體的多器官功能損害,高膽紅素血癥也是引起流產(chǎn)、死胎等不良妊娠結局的原因之一[8]。ICP的發(fā)病機制目前尚不完全清楚,保肝、退黃等對癥治療是目前的主要治療措施。中醫(yī)藥在ICP的治療中具有獨特的療效,茵陳是退黃的主要藥物之一,大部分治療ICP的中藥方劑中都以茵陳為主要組分。伴隨現(xiàn)代藥理學的發(fā)展,中藥的組分及其藥理、藥效的研究不斷深入,發(fā)現(xiàn)茵陳中含有80 余種有效成分[9],包括酮類、萜類、多糖類等組分,其中,多糖是茵陳中含量較高的組分,也是有效的藥用成分之一。

    本研究采用茵陳多糖對妊娠膽汁淤積大鼠模型干預結果顯示,妊娠膽汁淤積大鼠模型給予茵陳多糖干預后,AST、ALT 及ALP水平較模型組降低,大鼠的黃疸減輕,IBIL 及DBIL水平較模型組亦降低,提示妊娠膽汁淤積大鼠的肝臟損傷及膽汁淤積均獲得明顯改善,并且呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性,高劑量組的改善效果優(yōu)于低劑量組。對茵陳多糖改善膽汁淤積大鼠肝臟功能及瘀膽的原因進一步分析發(fā)現(xiàn),在高、低劑量組,大鼠肝組織勻漿還原酶系SOD、GPx 及CAT的活力明顯高于模型組,而氧化酶系MDA的活力低于模型組,提示茵陳多糖能夠減輕妊娠膽汁淤積大鼠的肝臟氧化損傷,并且伴隨劑量提高改善效果。既往研究結果顯示,植物多糖具有強大的抗氧化功能[10]。茵陳的多糖組分具有抗氧化作用,能夠清除氧自由基,減少組織及細胞的氧化損傷[11]。對梗阻性黃疸大鼠的研究發(fā)現(xiàn),茵陳多糖能夠減輕膽汁淤積所致的肝臟氧化損傷[12],改善肝臟功能,其對氧化損傷的拮抗作用可能是茵陳多糖改善妊娠膽汁淤積大鼠肝臟功能損傷的機制之一。

    [1]馮麗霞,胡珊,李力.妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥病因及對母嬰危害的研究[J].國外醫(yī)學:婦幼保健分冊,2004,15(4):223-225.

    [2]劉民甫,孫先,鄢碧玉,等.202例妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的妊娠結局分析[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展,2007, 16(3):226-227.

    [3]劉曉河,梁惠花,譚曉紅,等.茵陳中多糖的含量測定[J].中草藥,2003,6(6):519-520.

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    [6]Vallejo M,Briz O,Serrano MA,et al.Potential role of trans-inhibition of the bile salt export pump by progesterone metabolites in the etiopathogenesis of intrahepatic cholestasis of pregnancy [J].J Hepatol,2006,44:1150-1157.

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    [8]王曉東,彭冰,姚強,等.妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥1210例圍生結局分析[J].中華醫(yī)學雜志,2006,86(7):446-449.

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    [10]Zhu MY,Wang CJ,Gu Y,et al.Extraction,characterization of polysaccharides from Morinda officinalisand its antioxidant activities[J].Carbohydrate Polymers,2009,78(3):497-501.

    [11]戴喜末,熊子文,羅麗萍.響應面法優(yōu)化野艾蒿多糖的超聲波提取及其抗氧化性研究[J].食品科學,2011,32(8):93-97.

    [12]李源淵,赫長勝,侯建敏,等.茵陳多糖對梗阻性黃疸幼鼠肝損傷的保護作用[J].河北醫(yī)藥,2012,34(8):1128-1130.

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