HPLC法測定新疆阿魏不同部位阿魏酸的含量

高婷婷，丁 旭，譚 勇，2*，王 恒，王翔飛

1新疆石河子大學(xué)藥學(xué)院;2新疆特種植物藥資源省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，石河子 832002

新疆阿魏(Ferula sinkiangensis K.M.Shen.)為于傘形科阿魏屬多年生草本植物。其樹脂入藥，具有消積、散痞、殺蟲的作用，傳統(tǒng)用于治療肉食積滯，瘀血癥瘕，腹中痞塊和蟲積腹痛等疾?。?］。阿魏為我國常用中藥材，主要分布在新疆，是新疆特有珍稀藥用植物資源［2］。阿魏傳統(tǒng)藥用部位主要是樹脂，而其它部位較少入藥。阿魏酸為阿魏的主要成分之一，具有抗氧化、抗菌消炎、降血脂和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用［3］。目前關(guān)于新疆阿魏主要集中于其化學(xué)成分的研究［4，5］，姜林［6］對(duì)新疆阿魏不同物候期阿魏酸含量進(jìn)行了研究，新疆阿魏不同部位阿魏酸含量相關(guān)研究未見報(bào)道。為進(jìn)一步了解新疆阿魏主要有效成分在植物中分布情況以及更好地綜合利用該植物資源，本文采用HPLC法對(duì)新疆阿魏不同部位阿魏酸進(jìn)行了含量測定，為拓展新疆阿魏藥用部位及資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

島津LC150型高效液相色譜儀;KQ 3200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);Sartorius BP211D十萬分之一分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品鑒定所，批次110773-200611);甲醇(色譜純，SK Chemicals公司);乙腈(色譜純，SK Chemlcals公司)。

實(shí)驗(yàn)用新疆阿魏于采自新疆省伊寧市喀什鄉(xiāng)拜石墩，經(jīng)中國科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所沈觀冕研究員鑒定為新疆阿魏(Ferula sinkiangensis K.M.Shen)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:PLATISIL ODS(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 ～0.1%冰醋酸水溶液水(35∶65)［1］;流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:320 nm;進(jìn)樣量:10 μL。對(duì)照品和供試品色譜圖見圖1。

圖1 阿魏酸對(duì)照品(A)和新疆阿魏供試品(B)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of ferulic acid standard(A)and sample of F.sinkiangensis(B)

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取阿魏酸對(duì)照品11.01 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。再移去1 mL到50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成8.8 μg/mL的阿魏酸對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液制備

取阿魏藥材粉末適量，精密稱取0.5000 g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞稱重，室溫下超聲處理0.5 h，取出冷卻至室溫，稱重，用甲醇補(bǔ)足減少的重量，5000 rpm 離心 10 min，過 0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液，即得阿魏酸供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液 2、4、6、8、10、12、14、16 μL，進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積對(duì)阿魏酸進(jìn)樣量做線性回歸，得回歸方程為Y=176386X-83634，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997。結(jié)果表明阿魏酸進(jìn)樣量在0.440～5.396 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液 10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果日內(nèi)RSD為0.72%(n=5);連續(xù)分析3 d考察日間誤差，RSD為0.8%，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取新建阿魏根樣品一份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品，分別在 0、1、2、3、4、5、6、7、16、24 h 進(jìn)樣10 μL，測定阿魏酸峰面積值。結(jié)果，RSD為0.63%(n=6)，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取新疆阿魏根樣品5份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。測得阿魏酸平均峰面積為447252.6，RSD=1.12%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。取同一樣品提取液9份，分別加入相當(dāng)于已知樣品含量80%、100%及120%的對(duì)照品溶液。按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣 10 μL，測定。結(jié)果，平均回收率達(dá)97.8%，RSD=1.79%，結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果Table 1 Results of recovery tests

6 0.5 0.0522 0.052 0.1029 97.4 7 0.504 0.0517 0.062 0.1113 96.1 8 0.502 0.0515 0.0618 0.1122 98.2 9 0.501 0.0518 0.0622 0.1142 100.3

2.9 樣品測定

取新疆阿魏供試品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表2 新疆阿魏不同部位阿魏酸的含量測定結(jié)果Table 2 Content of ferulic acid in different parts of F.sinkiangensis

3 討論

我國中藥品種多，但資源蘊(yùn)藏量有限。開發(fā)利用藥用植物的不同部位，不僅可以擴(kuò)大中藥資源亦可為控制中藥質(zhì)量或其它應(yīng)用提供依據(jù)。川芎莖葉所含的揮發(fā)油為根、根莖的1/3左右，但莖葉重量比根高約3倍［7］。柴胡莖葉均有退熱作用，一些地區(qū)已有使用莖葉的習(xí)慣［8］。中藥資源的綜合利用是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。

從測定結(jié)果看，新疆阿魏不同部位的阿魏酸含量:膠 ＞根 ＞葉 ＞莖，其中阿魏膠含量最高，達(dá)到0.2600 mg/g，莖中含量最低為 0.0225 mg/g。由于新疆阿魏自身生長條件的限制［9］加之長期以來的亂采濫挖，導(dǎo)致新疆阿魏植物資源的巨大破壞。實(shí)驗(yàn)表明新疆阿魏的不同部位均含有阿魏酸，因此這些部位均可以作為提取物的制備原料，有利于拓展新疆阿魏資源的藥用價(jià)值及更好地利用該植物資源。

1 Chinese Pharmacopoeia Commission(國家藥典委員會(huì)).Pharmacopoeia of the People’s Republic of China(中華人民共和國藥典).Beijing:China Medical Science Press，2010.Vol I，176.

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4 Xu XQ(徐曉琴)，Teng L(滕亮)，Dai XY(戴秀勇)，et al.Extraction and purification of water-soluble active ingredient of Ferula sinkiangensis.Chin Tradit Pat Med(中成藥)，2010，32:931-936.

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