酸棗葉多糖抗氧化性研究

王迎進(jìn)，閆軍，周俊麗，孔麗霞，張海容

（忻州師范學(xué)院生化分析技術(shù)研究所，山西忻州 034000）

酸棗葉系鼠李科（Rhamnaceae）棗屬（Ziziphus）植物酸棗（Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.Chou）的葉，主要分布于我國北部太行山區(qū)一帶。酸棗葉中含有豐富的鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)，以及維生素，三萜烯酸、氯原酸、黃酮、碳水化合物等藥用成分，在寧心安神，提高睡眠質(zhì)量，增強(qiáng)心腦血管收縮性，降低血壓，降低血液中的脂肪密度及提高免疫力等領(lǐng)域具有其獨(dú)到功效，是一種極具價(jià)值的天然保健飲品和藥用資源[1]。研究證實(shí)，植物多糖在提高機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗應(yīng)激、降血脂等方面具有多種生物活性，引起了科研工作者廣泛關(guān)注。目前有關(guān)酸棗肉和酸棗仁多糖研究報(bào)道較多[2-3]，而對(duì)酸棗葉多糖的研究卻鮮見報(bào)道。本文采用超聲強(qiáng)化方法對(duì)酸棗葉多糖進(jìn)行了提取測定，并對(duì)其在清除·OH、O2-·、DPPH·和 ABTS·及還原能力做了一個(gè)較為全面、系統(tǒng)的研究，旨在為酸棗葉多糖在的藥物和功能性食品開發(fā)方面提供參考。

1 材料

1.1 試劑

酸棗葉：2011年5月采摘于山西代縣；葡萄糖、抗壞血酸、BHT、鄰二氮菲、DPPH和ABTS：均為美國Sinma公司生產(chǎn)；實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水；其他試劑均分析純。

1.2 儀器

752型紫外光柵分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；JYD-650L超聲細(xì)胞粉碎機(jī)：上海之信儀器有限公司；SHZ-D（III）型循環(huán)水式真空泵：河南豫華儀器有限公司；HH-S型恒溫水浴鍋：陜西太康生物科技有限公司。

2 方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取在105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10mg，加水溶解，定容至100mL容量瓶中，得0.1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取葡萄糖液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90 mL 于 10 mL 比 色 管中，加水至2 mL，再加5%的苯酚溶液1 mL和濃硫酸5 mL，沸水浴15 min。冷卻后在490 nm下，以試劑空白為參比，測定吸光度A。以樣品濃度c對(duì)吸光度A作圖，得回歸方程：Y=58.571x－0.028 4，R2=0.999 6。

2.2 酸棗葉多糖的提取及含量測定

將酸棗葉洗凈、烘干、粉碎、過篩（60目）后得酸棗葉粉。稱取酸棗葉粉50 g于圓底燒瓶中，用石油醚（沸程60℃～90℃）回流脫脂2 h，抽濾，揮干。用95%乙醇回流2 h（以除去酸棗葉中的小分子），干燥得酸棗葉藥渣。準(zhǔn)確稱取脫脂后酸棗葉粉20 g于燒杯中，加蒸餾水250 mL，在超聲功率為50%，提取溫度為80℃下，超聲提取30 min，過濾。濾渣重提兩次，合并濾液，濃縮至約100 mL，加入4倍體積的無水乙醇，4℃靜置24 h，離心，洗滌，蒸餾水復(fù)溶得酸棗葉粗多糖（CP）試液。

按上述方法重新制備粗多糖試液，用Sevag法[4]除蛋白7次，收集上清液，醇沉，離心，洗滌，蒸餾水溶解，得酸棗葉脫蛋白多糖（DP）試液。

按標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)方法測得酸棗葉中CP和DP含量分別為1.05%和0.84%。

2.3 酸棗葉多糖對(duì)自由基清除作用的測定2.3.1 羥自由基清除作

用按文獻(xiàn)[5]方法測定。

2.3.2 超氧陰離子自由基清除作用

按文獻(xiàn)[5]方法測定。

2.3.3 DPPH·自由基清除作用

按文獻(xiàn)[7]方法測定。

2.3.4 ABTS總抗氧化能力

按文獻(xiàn)[8]方法測定。

2.3.5 還原能力

按文獻(xiàn)[8]方法測定。

3 結(jié)果與分析

3.1 酸棗葉多糖對(duì)羥自由基的清除作用

羥自由基清除率是反映藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)。酸棗葉CP、DP和VC對(duì)·OH的清除效果見圖1。

由圖1可知，隨著CP和DP濃度的增加，對(duì)·OH的清除作用逐漸增強(qiáng)。當(dāng)濃度為0.4 mg/mL時(shí)，CP和DP對(duì)·OH的清除率分別為84.75%和41.47%，兩者對(duì)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH均具有良好的清除作用。CP的清除能力高于DP，說明在酸棗葉粗多糖中蛋白成分發(fā)揮了一定的清除·OH作用[9]。

圖1 酸棗葉多糖對(duì)·OH的清除作用Fig.1 The·OH scavenging capacity of polysaccharide from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

3.2 酸棗葉多糖對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

酸棗葉CP、DP和BHT對(duì)O2－·清除效果見圖2。

圖2 酸棗葉多糖對(duì)O2-·的清除作用Fig.2 The O2-·scavenging capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

由圖2可知，隨著多糖濃度不斷增加，CP和DP對(duì)O2－·清除率逐步上升，呈明顯的量效關(guān)系。在反應(yīng)開始4 min，濃度為0.5 mg/mL時(shí)，CP和DP對(duì)O2－·的清除率分別為37.44%和23.81%，說明兩者具有一定的清除O2－·能力，但均低于同濃度的BHT。

3.3 酸棗葉多糖對(duì)DPPH·自由基的清除作用

酸棗葉多糖對(duì)DPPH·的清除作用如圖3。

由圖3可知，CP具有較強(qiáng)的DPPH·清除能力，當(dāng)CP濃度低于0.2 mg/mL時(shí)，其清除能力與BHT相當(dāng)。當(dāng)濃度高于0.2 mg/mL時(shí)，CP和DP的清除能力均小于陽性對(duì)照物BHT。當(dāng)濃度為0.4 mg/mL時(shí)，CP和DP對(duì)DPPH·自由基的清除率分別為61.64%和23.50%，同濃度下，CP對(duì)DPPH·的清除能力高于DP。

3.4 酸棗葉多糖對(duì)ABTS·總抗氧化能力

酸棗葉多糖對(duì)ABTS·的清除能力如圖4所示。

圖3 酸棗葉多糖對(duì)DPPH·自由基的清除作用Fig.3 DPPH·scavenging capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

圖4 酸棗葉多糖對(duì)ABTS·的清除作用Fig.4 ABTS·scavenging capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

由圖4可知，CP和DP對(duì)ABTS·均具有很強(qiáng)的清除作用，且隨著多糖濃度的增加，清除率逐漸增大。當(dāng)多糖濃度為0.02 mg/mL時(shí)，CP的清除率達(dá)80.3%，DP的清除率達(dá)44.5%，同條件下酸棗葉多糖CP的清除能力遠(yuǎn)高于DP。

3.5 酸棗葉多糖還原能力的測定

酸棗葉多糖的還原能力如圖5所示。

由圖5可知，CP和DP均具有一定的還原能力，可作為電子供應(yīng)者，與自由基反應(yīng)，使之轉(zhuǎn)化為較穩(wěn)定的物質(zhì)，中斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。隨著濃度的增加，CP和DP的還原能力均在不斷的增強(qiáng)，且CP高于DP。

4 結(jié)論

圖5 酸棗葉多糖的還原能力Fig.5 Reducing capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

本文采用·OH、O2-·、DPPH·、ABTS·和還原能力 5種方法研究了酸棗葉多糖的體外抗氧化性，結(jié)果表明：CP 和 DP 均具有明顯清除·OH、O2-·、DPPH·和ABTS·作用及還原能力，且量效關(guān)系明顯。因而，酸棗葉多糖是一種非常有效的天然抗氧化劑，具有廣泛的開發(fā)前景。

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