NQO1基因C609T、C465T多態(tài)性與子宮內(nèi)膜癌易感性的關(guān)系

李 利，高會(huì)影，楊威威，李 方，程建新

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊 050011)

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖道常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年來(lái)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。一般認(rèn)為，長(zhǎng)期持續(xù)的無(wú)孕激素拮抗的雌激素暴露是子宮內(nèi)膜癌的病因之一。然而，隨著對(duì)雌激素研究的深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)雌激素的代謝產(chǎn)物與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。醌氧化還原酶1(NQO1)是真核細(xì)胞內(nèi)普遍存在的一類黃素蛋白酶，其定位于人類染色體16p22。該酶催化醌雙電子還原反應(yīng)，對(duì)醌及其衍生物有解毒作用［1］，且能夠解除醌類物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的毒害，從而起到保護(hù)細(xì)胞的作用，是人體內(nèi)一種重要的化學(xué)致癌物代謝酶。NQO1第六位外顯子(C609T)、第四位外顯子(C465T)為非同義編碼單核苷酸多態(tài)，可引起蛋白質(zhì)編碼氨基酸序列改變從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能的改變，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究觀察分析了NQO1基因C609T、C465T單核苷酸多態(tài)性與子宮內(nèi)膜癌易感性的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2006～2008年河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院經(jīng)病理學(xué)檢查確診的子宮內(nèi)膜癌患者209例(觀察組)，年齡(54.21 ±8.84)歲;其中子宮內(nèi)膜透明細(xì)胞癌2例，子宮內(nèi)膜腺棘細(xì)胞癌5例，子宮內(nèi)膜鱗狀細(xì)胞癌1例，未分化癌1例，其余均為子宮內(nèi)膜腺癌;采用2000年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的手術(shù)病理分期，Ⅰ期150例，Ⅱ期49例，Ⅲ期10例。另選同一地區(qū)的健康女性個(gè)體209例(對(duì)照組)，年齡(53.40±9.76)歲。兩組均為漢族人，且均無(wú)煙酒嗜好，無(wú)婦科腫瘤陽(yáng)性家族史，絕經(jīng)后婦女無(wú)激素替代治療史。兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2 NQO1基因C609T、C465T多態(tài)性檢測(cè) 抽取研究對(duì)象外周靜脈血5 mL，以枸櫞酸鈉抗凝，采用蛋白酶K-氯化鈉鹽析法提取白細(xì)胞DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCRRFLP)方法對(duì)NQO1 C609T和C465T進(jìn)行基因分型。擴(kuò)增 NQO1C609T特異性:5'-TCTTACTGAGAAGCCCAGACCAACT-3'，5'-CTCCAGGCGTTTCTTCCATCC-3'，212 bp。擴(kuò)增 NQO1 C465T 特異性:5'-TATCTAGCTTTACTCGGACCCACTC-3'， 5'-CATTCAGAACCATCCACCTACCC-3'，380 bp，20 μL。其中模板DNA 100 ng，10×PCR(含 MgCl215 mM)緩沖液2.4 μL，染料 2.0 μL，Taq DNA 聚合酶 1.0 U，dNTPs 200 μM和上、下游引物各250 nM。反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性5 min，然后94℃變性45 s、59℃(NQO1 C609T)或60℃(NQO1 C465T)退火45 s、72℃延伸45 s，35個(gè)循環(huán)后，72℃繼續(xù)延伸7 min。2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的擴(kuò)增產(chǎn)物分別經(jīng) HinfⅠ(NQO1 C609T)和 MspⅠ(NQO1 C465T)限制性內(nèi)切酶于37℃和55℃消化過(guò)夜后，分別進(jìn)行4%與5%瓊脂糖凝膠電泳分析基因型。NQO1 C609T的野生型C/C型為212 bp，突變型T/T型為129 bp和83 bp，雜交型C/T型為212 bp、129 bp和83 bp。NQO1 C465T的野生型C/C型為356 bp和24 bp，突變型T/T型為380 bp，雜交型T/C型為380 bp、356 bp 和24 bp。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件。對(duì)照組基因型頻率分布行χ2檢驗(yàn)做Hardy-Weinberg平衡分析。兩組年齡差異采用t檢驗(yàn)，兩組等位基因及基因型分布的差異用χ2檢驗(yàn)分析，以非條件Logistic回歸方法計(jì)算表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)。采用EH軟件分析NQO1基因單體型頻率，2LD軟件分析連鎖不平衡狀態(tài)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NQO1 C609T基因型及等位基因頻率分布結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 NQO1 C609T基因型及等位基因頻率分布(n=209)

2.2 NQO1 C465T基因型及等位基因頻率分布結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，各組基因型及等位基因比較，P 均 ＞0.05。

表2 NQO1 C465T基因型及等位基因頻率分布(n=209)

2.3 兩組不同初潮年齡者 NQO1 C609T、NQO1 C465T基因型分布 結(jié)果見(jiàn)表3。

2.4 兩組不同絕經(jīng)情況者 NQO1 C609T、NQO1 C465T基因型分布 結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 不同初潮年齡NQO1 C609T、NQO1 C465T基因型分布

表4 不同絕經(jīng)情況NQO1 C609T、NQO1 C465T基因型分布

3 討論

本研究探討了NQO1 C609T和NQO1 C465T單核苷酸多態(tài)與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，結(jié)果顯示NQO1 C609T單核苷酸多態(tài)與子宮內(nèi)膜癌的遺傳易感性相關(guān)，C/T、T/T基因型可能是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的潛在危險(xiǎn)因素。而NQO1 C465T單核苷酸多態(tài)與子宮內(nèi)膜癌的遺傳易感性未見(jiàn)明顯關(guān)聯(lián)。

研究表明，NQO1具有抑制腫瘤發(fā)生的作用。其機(jī)制可能為:①NQO1是一種黃素酶，能夠催化醌還原為親電子的水溶性醌，避免了親核性醌損傷DNA。②研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染并表達(dá)NQO1活性的乳腺癌系MCF-7在TNF-α作用下凋亡敏感性明顯增加，此過(guò)程可能與NQO1增加呼吸鏈電子流量，增加TNF-α的凋亡效應(yīng)產(chǎn)物的生成有關(guān)。③NQO1對(duì)P53蛋白穩(wěn)定性有調(diào)節(jié)作用，特別當(dāng)細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，這種對(duì)P53蛋白的穩(wěn)定作用更加突出，從而能使受損的細(xì)胞及時(shí)停止生長(zhǎng)進(jìn)行修復(fù)或調(diào)節(jié)發(fā)生凋亡［2］。目前發(fā)現(xiàn)，人的NQO1基因序列中，引起蛋白質(zhì)編碼氨基酸序列改變的非同義編碼單核苷酸多態(tài)有3個(gè)，其中包括位于第四位外顯子的C465T和第六位外顯子的C609T，分別引起所編碼的139位氨基酸由色氨酸變?yōu)榫彼幔?87位氨基酸由脯氨酸變?yōu)榻z氨酸。這些蛋白質(zhì)編碼氨基酸序列的改變，可能導(dǎo)致了個(gè)體中此酶活性的降低或缺失，減弱了NQO1對(duì)醌類化合物的解毒作用及改變腫瘤對(duì)特定原癌基因及抑癌基因功能的影響，從而使機(jī)體患腫瘤的可能性增加［3］。

近年來(lái)，人們對(duì)于NQO1 C609T的研究越來(lái)越深入，不同人群NQO1 C609T基因多態(tài)性的研究結(jié)果存在一定差異［4］。已有研究表明，純和野生基因型C/C具有完全的NQO1酶活性，雜合基因型C/T的酶活性較純和野生型降低3倍，純和突變基因型T/T的酶活性則完全喪失［5］。因此，具有突變純合子的人群是腫瘤高危易感人群。據(jù)報(bào)道，NQO1 C609T基因多態(tài)性與多種腫瘤如白血病、肺癌、大腸癌等發(fā)生有關(guān)聯(lián)［6～8］。Smith 等［9］用 PCR-RFLP 方法在研究成人白血病與NQO1的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，低NQO1活性［具有C/T或T/T基因型］可增加患白血病的危險(xiǎn)性。本研究發(fā)現(xiàn)，NQO1 C609T單核苷酸多態(tài)與子宮內(nèi)膜癌的遺傳易感性相關(guān)，C/T、T/T基因型可能是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的潛在危險(xiǎn)因素。當(dāng)然也有不同的報(bào)道，認(rèn)為攜帶T/T、C/T基因型者并沒(méi)有顯著增加腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［10～13］。

以往，對(duì)于NQO1 C465T研究尚不多見(jiàn)，其與子宮內(nèi)膜癌的研究鮮有報(bào)道。文獻(xiàn)報(bào)道，不同人群NQO1 C465T等位基因頻率較低，高加索人群為5%，加拿大人群為 1%［14］。本研究發(fā)現(xiàn)，NQO1 C465T單核苷酸多態(tài)與子宮內(nèi)膜癌的遺傳易感性未見(jiàn)明顯關(guān)聯(lián)。應(yīng)考慮到該位點(diǎn)的突變率較低，導(dǎo)致多態(tài)性改變與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的關(guān)系不顯著。

總之，NQO1 C609T多態(tài)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)，攜帶T等位基因可能增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

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