高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中的3種色素

譚建兵，周 亮（重慶市開(kāi)縣疾病預(yù)防控制中心 405499）

色素是指能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變?cè)蓄伾氖称诽砑觿?。其分為天然和人工合成兩種。天然色素一般無(wú)毒害作用，而人工合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過(guò)磺化、硝化、偶氮化等一系列有機(jī)反應(yīng)化合而成，可影響人體細(xì)胞代謝、酶的活力，甚至能引起癌變，但由于其成本低廉，色澤鮮艷，著色力強(qiáng)，性質(zhì)穩(wěn)定，使用方便等特點(diǎn)使其在食品生產(chǎn)加工行業(yè)中被廣泛應(yīng)用［1-2］。目前我國(guó)允許使用的人工合成色素有莧菜紅、胭脂紅、檸檬黃、日落黃和靛藍(lán)，在食品添加劑國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2011［3］中規(guī)定了各種色素的允許使用量。本文結(jié)合日常工作實(shí)際，研究建立了一種簡(jiǎn)單、有效的樣品純水提取法，采用高效液相色譜，以0.02mol／L乙酸銨、甲醇梯度洗脫的方式同時(shí)測(cè)定醬腌菜中檸檬黃、胭脂紅、日落黃，獲得滿(mǎn)意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 高效液相色譜儀：島津10AVP型附二極管陣列檢測(cè)器，色譜柱：4.6mm×250mm，5μm（依利特）；IKA A11basic樣品粉碎機(jī)（德國(guó)IKA公司）。

1.2 試劑與材料

1.2.1 材料 0.45μm水系微孔濾膜（津騰），5mL注射器。

1.2.2 試劑 甲醇（色譜純，Merck公司），乙酸銨、檸檬酸為優(yōu)級(jí)純，實(shí)驗(yàn)室用水均為超純水，電阻率18.25MΩ·cm（優(yōu)譜公司超純水制備）。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 檸檬黃：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，批號(hào)：11001，濃度：0.50mg／mL，不確定度為1%，有效期至2014年4月，等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為GBW（E）100001a。胭脂紅：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，批號(hào)：11001，濃度：0.50mg／mL，不確定度為1%，有效期至2014年4月，等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為GBW（E）100004a。日落黃：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，批號(hào)：10001，濃度：0.50mg／mL，不確定度為1%，有效期至2013年7月，等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為GBW（E）100003a。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確吸取3種標(biāo)準(zhǔn)溶液各5.00 mL，用純水稀釋至刻度，混勻，分別配制成濃度為5μg／mL、10 μg／mL、20μg／mL、40μg／mL、50μg／mL的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.3 色譜條件 色譜柱：4.6mm×250mm，5μm HYPersil ODS2分析柱；流動(dòng)相：A，甲醇，B，0.02mol／L乙酸銨，梯度洗脫（見(jiàn)表1）；流速：1.0mL／min；檢測(cè)器：二極管陣列；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，標(biāo)準(zhǔn)樣品圖譜如圖1所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（50μg／mL）

1.4 樣品處理 稱(chēng)取1.00g已粉碎樣品于10mL容量瓶中，加水至刻度，用檸檬酸溶液調(diào)pH＝6左右，振搖3min，靜置3 h后置離心管中，2 000r／min離心5min，取上清液經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣分析。

2 結(jié) 果

2.1 線性范圍與檢出限 3種色素的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均可達(dá)到0.999 2以上，以3倍的噪音計(jì)算出最低檢出量，再根據(jù)進(jìn)樣量換算為檢出限，見(jiàn)表1。

2.2 精密度 取陰性樣品，分別加入3種色素10μg／mL、20 μg／mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)行6次測(cè)定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值。RSD值在為1.10%～2.43%之間，精密度較好。

2.3 回收率試驗(yàn) 在已知含量的樣品中加入一定量的色素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)樣品加標(biāo)回收率在88.3%～91.9%之間，回收率較理想。

表1 線性范圍、線性方程及相關(guān)系數(shù)

表2 方法回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 兩種方法回收率比較

3 討 論

本研究的前處理方法為純水直接提取法，而國(guó)標(biāo)GB／T5009.35-2003［4］采用聚酰胺吸附法。國(guó)標(biāo)方法所需器材及試劑多，成本高，操作過(guò)程繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，損失大［5-6］。本法提取過(guò)程簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確快速，且少了很多中間抽濾、洗滌、解析、蒸發(fā)以及吸附等環(huán)節(jié)，減少了操作誤差及不必要的損失，成本低，適應(yīng)于大批量樣品的測(cè)定。兩種方法通過(guò)回收率實(shí)驗(yàn)，純水直接提取法的檸檬黃、胭脂紅、日落黃平均回收率分別為89.8%、89.0%、90.4%，聚酰胺吸附法的檸檬黃、胭脂紅、日落黃平均回收率分別為85.4%、85.6%、85.3%（見(jiàn)表3）。

流動(dòng)相梯度變化的選擇和儀器及色譜柱有很大關(guān)系，甲醇的比例如果從一開(kāi)始就過(guò)大，檸檬黃出峰太快，與雜質(zhì)峰有干擾［7-8］，而是應(yīng)逐漸增大甲醇的比例，以便獲得更好的分離效果。

回收率實(shí)驗(yàn)證明純水直接提取法提取效果更好，回收率更高，平行性、精密度更好，滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，能夠同時(shí)檢測(cè)醬腌菜中3種色素，適宜推廣應(yīng)用，為醬腌菜中色素的檢測(cè)分析提供了依據(jù)。

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