氯化苯丙胺鹽比濁法檢測腦脊液蛋白質(zhì)方法學(xué)評價(jià)

唐曉霞（靖江市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇靖江 214500）

目前常用的腦脊液（CSF）蛋白質(zhì)測定方法有硫酸鈉-磺基水楊酸比濁法、干化學(xué)法、染料結(jié)合法和鄰苯三酚紅銅絡(luò)合法等，但存在易受濕度、時(shí)間等因素影響導(dǎo)致假陽性結(jié)果，染料黏附比色杯而不易洗脫，成本較高等缺點(diǎn)。為此，本研究對氯化苯丙胺鹽比濁法檢測CSF蛋白質(zhì)進(jìn)行了評價(jià)和探討，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 無黃疸、無溶血且包括低、中、高蛋白質(zhì)水平的CSF標(biāo)本48份。

1.2 儀器與試劑 DXC800全自動生化分析儀及配套質(zhì)控品、定值血清（美國貝克曼），VITROS350干式生化分析儀及配套雙縮脲法檢測試劑（美國強(qiáng)生），氯化苯丙胺鹽比濁法CSF蛋白檢測試劑盒（北京萬泰德瑞），干擾物質(zhì)為血紅蛋白、膽紅素、維生素C、葡萄糖等。

1.3 方法 將標(biāo)本3 000r／min離心5min后吸上清液上機(jī)檢測，參數(shù)設(shè)置如下：主波長520nm，次波長700nm，標(biāo)本體積12μL，R1 200μL，R2 75μL，測定值高于2 000mg／L時(shí)，以生理鹽水稀釋后測定。靈敏度實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)［1］。精密度實(shí)驗(yàn)方法參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）EP5-A文件［2-3］，計(jì)算批內(nèi)、批間、天間和總變異系數(shù)（CV）。線性范圍實(shí)驗(yàn)方法：以生理鹽水對定值血清進(jìn)行系列稀釋，每份稀釋標(biāo)本做雙份測定，計(jì)算平均值，以擬合曲線分析線性范圍。干擾實(shí)驗(yàn)方法：將不同濃度干擾物質(zhì)與同一份CSF標(biāo)本按體積比1∶9混合，以等體積生理鹽水作為無干擾標(biāo)本，各標(biāo)本測定雙份，計(jì)算平均值，以（無干擾標(biāo)本檢測結(jié)果±10%）作為明顯偏差的判斷限。方法學(xué)比對實(shí)驗(yàn)方法：因強(qiáng)生公司CSF蛋白質(zhì)檢測線性范圍寬，對球蛋白和清蛋白檢測靈敏度相似，并已得到臨床認(rèn)可［4］，故選擇強(qiáng)省公司分析系統(tǒng)作為參考方法（Y），與實(shí)驗(yàn)方法，即氯化苯丙胺鹽比濁法（X）進(jìn)行比對，比對實(shí)驗(yàn)方法參照CLSI EP9-A文件。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，包括計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及制備回歸曲線等。

2 結(jié) 果

2.1 靈敏度 經(jīng)檢測，該法檢測CSF蛋白質(zhì)的靈敏度為25.5 mg／L。

2.2 精密度 低、中、高濃度標(biāo)本檢測批內(nèi)、批間、日間及總變異系數(shù)均小于5%。

2.3 線性范圍 標(biāo)本蛋白質(zhì)濃度為60～2 600mg／L，實(shí)測濃度與理論濃度具有良好線性關(guān)系。

2.4 干擾實(shí)驗(yàn) 高濃度血紅蛋白（0.1g／L）可導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)負(fù)偏差；各濃度膽紅素、維生素C、葡萄糖對檢測結(jié)果無明顯干擾。

2.5 方法學(xué)比對 參考方法與實(shí)驗(yàn)方法檢測結(jié)果回歸方程為Y＝0.932X＋12.9，相關(guān)系數(shù)為0.989。

3 討 論

CSF中的蛋白質(zhì)主要因脈絡(luò)膜毛細(xì)血管壁的超濾作用而出現(xiàn)，神經(jīng)系統(tǒng)亦可自行合成。多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如各種原因所致炎性反應(yīng)、腫瘤、腦外傷、卒中、神經(jīng)系統(tǒng)退化性病變等均可導(dǎo)致CSF蛋白質(zhì)濃度升高，而水中毒、CSF外溢癥、甲狀腺功能亢進(jìn)等可導(dǎo)致其濃度降低。因此，CSF蛋白質(zhì)濃度的快速、準(zhǔn)確檢測對上述疾病的診斷及預(yù)后判斷有重要意義［5-8］。

在CSF蛋白質(zhì)常用檢測方法中，磺基水楊酸比濁法需自配試劑，且操作繁瑣、易產(chǎn)生誤差、標(biāo)準(zhǔn)液不統(tǒng)一、精密度較低、蛋白質(zhì)易形成凝塊。染料結(jié)合法和鄰苯三酚紅銅絡(luò)合法對清蛋白的檢測靈敏度高于球蛋白，且染料易污染比色杯。干化學(xué)法測定線性范圍寬，對球蛋白和清蛋白檢測靈敏度相似，測定速度快，適用于急診檢測，但成本較高。氯化苯丙胺鹽濁度法利用氯化苯丙胺鹽可與CSF中的蛋白質(zhì)結(jié)合，產(chǎn)生穩(wěn)定的濁度，通過檢測濁度的變化而確定蛋白質(zhì)濃度，具有檢測步驟簡便、干擾因素少、誤差較小等優(yōu)點(diǎn)。本研究參照CLSI文件進(jìn)行了系列評價(jià)，結(jié)果表明該檢測方法穩(wěn)定性好、靈敏度高、線性范圍寬、抗干擾能力較強(qiáng)，適合于臨床推廣應(yīng)用。

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