Sysmex XT-1800i全自動血液分析儀復(fù)檢規(guī)則制定及應(yīng)用評價

劉春明，馬興璇，龍 康（柳州市中醫(yī)院檢驗科，廣西柳州 545001）

一般而言，全自動血液分析儀可對外周血中的原始細胞、幼稚細胞、核左移、異型淋巴細胞及紅細胞、血小板形態(tài)異常進行報警，但僅可用于血細胞分析的初篩，當遇到可疑情況，特別是病理條件下，必須通過手工鏡檢進行復(fù)查，從而避免漏檢病理標本及發(fā)出錯誤的檢驗報告。如何制定血細胞分析復(fù)檢規(guī)則血液學專家共同關(guān)注的問題。2005年國際血液學復(fù)檢專家組制定了41條自動血液分析和分類復(fù)檢規(guī)則（簡稱“國際41條規(guī)則”）［1］。本研究以“國際41條規(guī)則”為基礎(chǔ)，結(jié)合本實驗室實際情況，制定了適合本實驗室的XT-1800i全自動血液分析儀（簡稱XT-1800i分析儀）復(fù)檢規(guī)則，并對其臨床應(yīng)用進行了評價。

1 資料與方法

1.1 一般資料 于本院連續(xù)2周住院患者乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標本1 841例，其中初診標本1 600例、復(fù)診標本241例。

1.2 儀器與試劑 XT-1800i分析儀及配套試劑、校準物、質(zhì)控物（日本Sysmex），光學顯微鏡（日本Olympus）。采用SCS-1000全血校準物對XT-1800i分析儀進行校準，以包括2個水平的e-check質(zhì)控物進行室內(nèi)質(zhì)量控制，保證檢測結(jié)果精密度和準確性。

1.3 方法

1.3.1 標本檢測 以XT-1800i分析儀檢測標本的同時，制備瑞士染色血涂片標本，由本實驗室從事血液形態(tài)學檢驗工作并有中級以上職稱者進行鏡檢，每例標本油鏡計數(shù)200個細胞進行白細胞（WBC）分類，同時觀察白細胞、紅細胞（RBC）及血小板（PLT）形態(tài)。

1.3.2 初步復(fù)檢規(guī)則的制定 本實驗室制定的初步復(fù)檢規(guī)則見表1。

表1 XT-1800i分析儀復(fù)檢規(guī)則

1.3.3 涂片鏡檢陽性判斷標準 根據(jù)“國際41條規(guī)則”和國內(nèi)相關(guān)陽性規(guī)則進行評估［1-2］：（1）RBC明顯大小不均（大小相差1倍以上），中空淡染（淡染區(qū)超過一半的RBC多于30%）或發(fā)現(xiàn)瘧原蟲；（2）巨大PLT多于15%；（3）PLT聚集；（4）含Dohle小體的粒細胞超過10%；（5）含中毒顆粒中性粒細胞超過10%；（6）空泡變性粒細胞超過10%；（7）原始和幼稚細胞不少于1%；（8）早幼粒細胞和中幼粒細胞不少于1%（9）晚幼粒細胞超過2%；（10）異形淋巴細胞超過5%；（11）有核紅細胞不少于1%；（12）漿細胞不少于1%。

1.3.4 初步復(fù)檢規(guī)則的評估 1 841例標本以涂片鏡檢為陽性判斷標準，對每條初步復(fù)檢規(guī)則進行評估，計算真陽性率（TPR）、真陰性率（TNR）、假陽性率（FPR）、假陰性率（FNR）和涂片復(fù)檢率。真陽性為至少觸發(fā)1條復(fù)檢規(guī)則且涂片鏡檢符合陽性判斷標準，鏡檢形態(tài)學異常與所觸發(fā)的規(guī)則無需一一對應(yīng)；真陰性為未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則且鏡檢陰性；假陽性為觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則而鏡檢未見異常；假陰性為未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則而涂片鏡檢符合陽性判斷標準；涂片復(fù)檢率＝（真陽性數(shù)＋假陽性數(shù)）／標本總數(shù)×100%。

1.3.5 復(fù)檢規(guī)則的建立及驗證 本次收集的標本均來自住院患者，預(yù)期的涂片復(fù)檢率可能比實際復(fù)檢率稍高，而對于假陰性，國際血液學復(fù)檢協(xié)作組認為5.0%是保證患者檢測結(jié)果可信的最大可接受限。因此，擬定的涂片復(fù)檢率為30%，F(xiàn)NR不超過5.0%，而且不能漏檢具有診斷意義的重要參數(shù)（如白血病細胞）。FNR過高會大大增加實際工作量，導致報告發(fā)放時間延遲。因此，根據(jù)初步復(fù)檢規(guī)則評估結(jié)果和實際工作需要，對初步復(fù)檢規(guī)則部分條款進行修正，并按修正后的規(guī)則重新計算TPR、TNR、FPR、FNR和涂片復(fù)檢率，在保證FNR較低的前提下盡可能降低FPR。新復(fù)檢規(guī)則建立后，選擇220例標本（主要為血液病和腫瘤化療患者標本）進行驗證，計算TPR、TNR、FPR、FNR和涂片復(fù)檢率。

2 結(jié) 果

2.1 初步復(fù)檢規(guī)則評估結(jié)果 應(yīng)用涂片鏡檢陽性判斷標準對1 841例標本按初步復(fù)檢規(guī)則進行評估，TPR為28.9%（533／1 841）、FPR為11.9%（220／1 841）、TNR為57.1%（1 051／1 841）、FNR為2.0%（37／1 841），涂片復(fù)檢率為40.9%（753／1 841）。鑒于40.9%的復(fù)檢率不適用于本實驗室，且大大超出了擬訂的復(fù)檢率。因此，對初步復(fù)檢規(guī)則進行調(diào)整，棄用規(guī)則9、規(guī)則10、規(guī)則12及規(guī)則14。

2.2 調(diào)整后復(fù)檢規(guī)則評估結(jié)果 對調(diào)整后的復(fù)檢規(guī)則重新評估，TPR為14.8%（272／1 841）、FPR為9.4%（173／1 841）、TNR為72.6%（1 337／1 841）、FNR為3.2%（59／1 841），涂片復(fù)檢率為24.2%（445／1 841）。

2.3 復(fù)檢規(guī)則的驗證 220例標本驗證復(fù)檢規(guī)則，TPR為16.3%（36／220）、FPR為10.9%（24／220）、TNR 為69.1%（152／220）、FNR為3.6%（8／220），主要出現(xiàn)巨大PLT、變異淋巴和晚幼粒細胞漏檢，白血病細胞無漏檢。

3 討 論

“國際41條規(guī)則”中，WBC分類復(fù)檢規(guī)則是以絕對值計算的，且下限很高，鏡檢陽性規(guī)則中也沒有WBC分類計數(shù)陽性判斷標準，其主要原則是不漏檢白血病細胞，而包括本實驗室在內(nèi)的國內(nèi)絕大多數(shù)實驗室對WBC分類復(fù)檢都是以分類比率計算的。本研究顯示，如采用“國際41條規(guī)則”進行WBC分類復(fù)檢，則1 841例標本均未觸發(fā)單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞復(fù)檢規(guī)則。因此，本實驗室WBC分類復(fù)檢規(guī)則中選擇了部分分類比率，即嗜堿性粒細胞比率大于5.0%，淋巴細胞比率大于60.0%（成人）或70.0%（兒童），單核細胞比率大于15.0%。對于是否將桿狀核粒細胞比率超過5.0%、單核細胞比率超過12.0%、嗜酸性粒細胞比率超過10.0%和嗜堿性粒細胞比率超過2.0%納入鏡檢陽性判斷規(guī)則，國內(nèi)學者持不同意見。王厚芳等［3］的研究顯示，納入上述4條規(guī)則可導致FNR略微增加，但仍在國際血液學專家組確定的5.0%的可接受范圍內(nèi)，叢玉隆等［4］的研究則顯示納入上述4條規(guī)則將使FNR明顯升高至20.0%（桿狀核粒細胞和單核細胞所致假陰性占90.0%），大大超出國際血液學專家組確定的5.0%的可接受范圍，而棄用該4條規(guī)則，F(xiàn)NR降至4.0%以下，F(xiàn)PR增加不到3.0%，且無白血病細胞漏檢。上述研究在納入該4條規(guī)則后，其FNR存在明顯差異。究其原因，筆者認為是由于未對WBC分類復(fù)檢陽性判斷標準形成共識，而“國際41條規(guī)則”沒有WBC分類計數(shù)陽性判斷標準，主要原則是不漏檢白血病細胞，若嚴格按照國際規(guī)則的陽性判斷標準評估，增加上述4條判斷標準將使FNR大大增加。本實驗室規(guī)則的評估中納入了上述4條判斷標準中的2條，并提高了判斷標準，取得了很好的效果。

通過分析初步復(fù)檢規(guī)則陽性標本，筆者發(fā)現(xiàn)FNR較高的規(guī)則依次是：嗜酸性粒細胞比率、WBC IP信息、RBC IP信息、PLT IP信息，僅此4項規(guī)則的FNR即高達26.3%。PLT報警主要為PLT分布異常。有學者認為影響PLT分布的因素包括大體積PLT、有核紅細胞（NRBC）、裂片RBC以及彌散性血管內(nèi)凝血患者的標本［5］。該研究同時發(fā)現(xiàn)XT-1800i分析儀阻抗法和光學法計數(shù)PLT與參考方法有很好的相關(guān)性，儀器所提供的WBC IP信息、RBC IP信息、PLT IP信息及嗜酸性粒細胞比率較為準確。因此，本實驗室制定的XT-1800i分析儀復(fù)檢規(guī)則中棄用WBC IP信息、RBC IP信息、PLT IP信息和嗜酸性粒細胞比率這4條規(guī)則。對假陰性標本的分析發(fā)現(xiàn)，假陰性主要由巨大PLT、PLT聚集、RBC形態(tài)異常、異型淋巴細胞、NRBC及少量的中晚幼粒細胞所致，而白血病細胞無漏檢；6例出現(xiàn)幼稚粒細胞漏檢的標本中，3例為血液病患者標本，由于觸發(fā)了相應(yīng)規(guī)則而未漏檢，且幼稚粒細胞比率均處在鏡檢陽性判斷標準臨界值附近；另3例標本中，2例為晚幼粒細胞2%，處于鏡檢陽性判斷標準臨界值附近，1例為含中毒顆粒中性粒細胞比率超過10%。

驗證實驗和臨床應(yīng)用評價表明，本實驗室制定的XT-1800i分析儀復(fù)檢規(guī)則FNR低于國際血液學專家組確定的5.0%的最大可接受限，有診斷意義的血液病細胞無漏檢，復(fù)檢率為24.2%，臨床應(yīng)用中未出現(xiàn)漏檢、誤檢標本，保證了血液分析的檢驗質(zhì)量，大大減少了檢驗技術(shù)人員手工鏡檢的勞動強度，明顯提高了工作效率，值得推廣應(yīng)用。

［1］Barnes PW，Mcfadden SL，Machin SJ，et al.The international consensus group for hematology review：suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis［J］.Lab Hematol，2005，11（2）：83-90.

［2］中華檢驗醫(yī)學雜志編輯委員會.全國血液學復(fù)檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數(shù)復(fù)檢標準釋義［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2007，30（4）：380-382.

［3］王厚芳，孫帝，于貴杰，等.國際血細胞復(fù)檢規(guī)則在貝克曼-庫爾特系列血細胞分析儀上的應(yīng)用及改進方案［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2008，31（7）：758-762.

［4］叢玉隆，樂家新.Sysmex XE-2100自動血細胞分析和白細胞分類的復(fù)檢規(guī)則探討［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2008，31（7）：752-757.

［5］Fujimoto K，Tanaka C.Reference method for platelet enumeration［J］.Sysmex J International，2001，11（1）：33-39.