恐傷腎小鼠模型綜述

★ 馮儒庭 邱麗瑛 指導：楊軍平（.江西中醫(yī)學院00級碩士研究生 南昌 330006；.江西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院 南昌 330006）

1 情志造模法

自上海中醫(yī)藥大學采用“貓嚇老鼠”制作恐傷腎動物模型以來，國內(nèi)外相繼出現(xiàn)多種“恐傷腎”動物模型主要方法有以下幾種。

1.1 空瓶刺激方法

王氏等[1]采用在程序性固定時間點不確定性的給予小鼠空瓶刺激誘發(fā)其情緒反應的應激模式。測定（14、21、28天）應激，1天至少給予1次以上的刺激。主要的評價指標：小鼠毛色帶黃成小縷狀，不均勻，不柔順，明顯比對照組黯淡；隨著心理應激時間的延長，部分小鼠對外界環(huán)境干擾敏感度降低，反應遲鈍，缺乏好奇、探索行為，修飾行為極少，攻擊性增強。皮質(zhì)醇水平明顯增高，淋巴細胞減少，胸腺和脾臟的質(zhì)量減輕。EPM行為學測定，發(fā)現(xiàn)應激后的小鼠較少進入和停留于開放臂中，傾向于探究封閉臂，且在封閉臂的停留時間延長，運動活力降低。

1.2 貓嚇老鼠的方法

杜氏等[2]采用“恐傷腎”貓嚇老鼠的方法制作模型。此實驗使貓與老鼠一網(wǎng)之隔24小時，并且早晚各取一只小鼠活小鼠喂貓以加強應激效果，為期7天。主要的評價指標為：小鼠體重，前列腺，精囊腺，左側(cè)睪丸的重量比正常組減少，血中T，TSH，LH的濃度有所降低。這類方法采用小鼠與生俱來的本能對貓的恐懼來制作恐傷腎小鼠模型，最真實的還原出小鼠恐懼的情緒。但是缺點在于，隨著實驗時間的延長，貓會因為長期無法成功捕捉到小鼠而產(chǎn)生倦怠，對小鼠的刺激會逐漸減弱，小鼠也會習慣貓的恐嚇和攻擊，會直接影響實驗的效果。

因此，近幾年國內(nèi)外專家在制作相關(guān)的模型時，大多都會按照自身的需求加入其它性質(zhì)的應激源，已達到滿意的實驗效果。

2 理化造模法

黃氏等[3]運用電刺激應激箱，每次通電5秒，每天不定時應激一次，每次15分鐘，持續(xù)6天。小鼠被點擊后會發(fā)出尖叫，出現(xiàn)驚慌跳躍的狀態(tài)，以此建立慢性心理應激小鼠模型。本實驗通過電擊小鼠使其產(chǎn)生恐懼情緒。目前在進行這種實驗都會加入聲光刺激使聲光刺激與電擊小鼠交替進行，以加強小鼠的刺激強度，以達到更為滿意的應激效果。本實驗的評價標準：行為學改變：理毛，修飾，睡眠時間減少，進食量減少，拒捕，抓咬，狂躁等驚恐行為表現(xiàn)；小鼠體重下降，胸腺組織輕度改變：皮、髓質(zhì)胸腺細胞分布稀疏；胸腺指數(shù)下降，胸腺細胞凋亡率升高，糖皮質(zhì)激素水平升高。

馬氏等[4]使用的束縛筒以限制小鼠自由，每日束縛6小時連續(xù)2周，并且每次束縛的時間不同，使小鼠對下次應激無心理準備，束縛期間小鼠禁食禁水。主要評價指標：曠場實驗（小鼠自主活動減少，穿格數(shù)目減少，糞便增多等行為活動受到抑制的表現(xiàn)）；NPY的測試（出現(xiàn)高表達狀態(tài)）。在此試驗的基礎(chǔ)上，近年來常用的小鼠站臺水環(huán)境就是在此基礎(chǔ)上發(fā)展而來的。此實驗摻雜了對小鼠生理上的刺激（禁食，禁水）。這一干擾因素，這樣一來，小鼠的應激不單單是心理應激，生理因素會成為本實驗的干擾因素之一。

3 復合情志造模法

3.1 恐傷腎合其他理化刺激

杜氏等[5]在之前“恐傷腎”貓嚇老鼠模型的基礎(chǔ)上，增加了冷水游泳相結(jié)合的多相性造模方法，此外實驗要求冷水水溫10℃，游泳15分鐘/天，實驗共18天，本實驗加入了冷水游泳，以加強刺激強度，從而達到更為理想的實驗效果。

主要評價指標：大鼠的撲捉潛伏期延長，撲捉次數(shù)減少，交合潛伏期延長，交合次數(shù)減少。

3.2 慢性多相性應激模型

多相性模型最早是cart建立的，目前國內(nèi)外普遍使用的模型大多是在之前進行改進的，如敖海清，徐氏等[6]運用束縛（6小時/次），電擊，4攝氏度冰水游泳（5分鐘次），禁水，禁食五種方法隨機安排，除禁食、禁水外，其他方法為1次/24小時。應激21天。

主要評價指標：曠場實驗（水平，垂直運動次數(shù)減少），血清胃泌素明顯減少，血清皮質(zhì)酮明顯升高，血漿胃動素明顯下降。近年來還會加入晝夜顛倒，離心旋轉(zhuǎn)，高溫（45℃）等方法，增加刺激的種類，從而提高應激的效果，提高模型質(zhì)量。

3.3 慢性復合式應激模型

慢性復合性應激模型是近幾年國內(nèi)外普遍使用的造模方法。如劉氏等[7]運用心理應激20分鐘，束縛2小時，尾懸掛2小時，小鼠站臺水環(huán)境6小時，夾尾搏斗30分鐘，五種應激模型組成慢性復合式應激模型。上述方法依次安排7周內(nèi)。

評價指標：小鼠體重減輕，精子數(shù)量，質(zhì)量明顯下降，小鼠FSH，LH，T的血清激素水平明顯下降，睪丸發(fā)生病理變化，生精組織及細胞和管腔精子變化的評分。這類模型與單一應激模式相比更好的模擬外界的環(huán)境，也得到研究者們的普遍認可。

4 討論

綜上所述，近年來“恐傷腎”動物模型的研究取得了較快的發(fā)展，目前仍存在著幾個問題需要解決：（1）目前尚無“恐傷腎”動物模型的統(tǒng)一制作及判定標準，不利于科學研究。（2）幾種造模方法所造成的動物模型在神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、循環(huán)等系統(tǒng)方面是否存在差異。（3）隨著競爭的激烈，臨床上多為情志不暢造成氣機郁滯，“恐傷腎”和“情志不暢”之間有什么不同。（4）對“恐傷腎”小鼠模型的制作，從單純的貓嚇老鼠發(fā)展到現(xiàn)在多相性應激模型，方法多樣，如何取得應激效果最好的模型。（5）從單純的貓嚇老鼠發(fā)展到現(xiàn)在多相性應激模型之間存在哪些差異，特異性的指標是什么。這些問題均有待進一步深入研究。

應激效果好，模型穩(wěn)定，干擾因素少的動物模型，仍然是目前急需解決的問題，有待進一步優(yōu)化。我們通過國家自然基金課題，采用設計對比實驗，進行行為學評價，得出數(shù)據(jù)分析，用粗糙集rough集方法，從三組慢性復合心理應激組中，評價出效果最好的動物模型，進行進一步的優(yōu)選實驗。

筆者認為，中醫(yī)證候動物模型的研制方法應以中醫(yī)的理論為指導，既要符合現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)病因素的特點，又要符合臨床自然發(fā)病的過程。應采取多種方法造模，研究各種造模方法之間的不同。制定出統(tǒng)一的“恐傷腎”模型的造模方法和判定標準，促進科研水平的提高。為建立病證結(jié)合模型打下基礎(chǔ)。

[1]王瑋文，邵楓林，文娟，等.不同時程對大鼠行為免疫和交感神經(jīng)系統(tǒng)反應的影響[J].心理學報，2007，39（2）：292-298.

[2]杜維祥，沈世林，馬玉清，等.金鎖二仙飲對雄性腎虛質(zhì)小鼠雄激素的調(diào)節(jié)作用[J].中國中醫(yī)藥科技，2012，17（5）：393.

[3]黃忠遠，楊軍平，邱麗瑛.逍遙丸對慢性心理應激小鼠免疫系統(tǒng)的影響[J].江西中醫(yī)學院學報，2007，19（6）：68.

[4]馬穎，盧麗.慢性應激對小鼠腦組織神經(jīng)肽表達及心理行為的影響[J].中國藥物與臨床2007，8（3）：190-192.

[5]杜維祥，沈世林.金鎖二仙對雄性腎虛大鼠性欲的調(diào)節(jié)[J].中醫(yī)研究，2012，23（8）：11-13.

[6]敖海清，徐志偉.柴胡疏肝散及逍遙散對對慢性心理應激大鼠血清皮質(zhì)酮及胃腸激素的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18（4）：288-291.

[7]劉曉梅，張云.慢性復合式應激對雄性小鼠生育能力的影響[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志，2008，14（5）：354-356.