正交設(shè)計(jì)優(yōu)選芪歸通絡(luò)口服液純化工藝

★ 范宋玲 熊帶水 張建軍 麥炳明（廣東省第二中醫(yī)院 廣州 510095）

芪歸通絡(luò)口服液為我院神經(jīng)內(nèi)科臨床經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、當(dāng)歸、三七等八味藥物組成，具有益氣養(yǎng)血，活血化瘀通絡(luò)之功，主治中風(fēng)病氣虛血瘀證，臨床療效確切。為進(jìn)一步提高本品的澄清度和穩(wěn)定性，使其質(zhì)量更穩(wěn)定，療效更可靠，本文采用正交試驗(yàn)對(duì)其水提液醇沉工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)選，為批量生產(chǎn)提供科學(xué)合理的純化工藝。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Agillent1100）二級(jí)管陣列檢測(cè)器；電子分析天平（Sartorius德國(guó)）恒溫水浴鍋（HWS26）；甲醇為色譜純；重蒸水；其他試劑均為分析純；芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110736-200630）；黃芪等8味中藥飲片：由廣東省第二中醫(yī)院提供，由張誠(chéng)光主任中藥師鑒定為藥典及地方標(biāo)準(zhǔn)里收載的正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素水平

中藥復(fù)方提取液中常含有大量的糖類、無(wú)機(jī)鹽、黏液質(zhì)等成分，這些成分對(duì)制劑的穩(wěn)定性影響較大，因此，對(duì)提取液進(jìn)行除雜處理是必須的。影響醇沉除雜工藝的主要因素包括藥液濃縮比、乙醇濃度、攪拌速度、pH值、醇沉溫度等因素。本實(shí)驗(yàn)選取乙醇濃度、藥液濃縮比、醇沉pH值為考察因素，采用L8（4×24）正交表安排實(shí)驗(yàn)，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.2 固形物的收率測(cè)定

取各正交試驗(yàn)號(hào)濃縮液20mL，加乙醇至含醇量為80%，靜置過(guò)夜，取上清液于干燥蒸發(fā)皿中水浴蒸干，105℃烘箱干燥至恒重，取出，干燥器中放冷，精密稱重，即得。

2.3 含量測(cè)定

參照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥD）測(cè)定。

2.3.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex C18柱（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（34.5：65.5）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流速：1mL/分；柱溫：30℃。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品21.36mg置50mL容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，精密吸取5.0mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每1mL含芍藥苷85.44μg）。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密吸取樣品溶液5mL，加于聚酰胺柱（30-60目，3g）上，用水洗脫，準(zhǔn)確收集洗脫液50mL，搖勻，精密吸取10mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.3.4 陰性樣品溶液的制備 為了考察芍藥苷含量測(cè)定有無(wú)干擾，需制備陰性樣品。稱取除赤芍外的藥材加9倍量水，煎煮2次，80分鐘/次，藥液濾過(guò)，合并濾液，濃縮并定容至250mL，取5mL濃縮液，自供試品溶液的制備項(xiàng)下“取樣品溶液5mL”起同法操作，制得陰性樣品溶液。

2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取芍藥苷對(duì)照品溶液1，2，4，8，12，16μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，回歸方程：Y=1134.23X+13.94，r=0.9999。結(jié)果表明：在0.085-1.367μg范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 陰性干擾的判斷 吸取上述對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，陰性對(duì)照?qǐng)D譜與對(duì)照品、供試品圖譜中芍藥苷相應(yīng)的保留時(shí)間無(wú)其他峰干擾，表明選擇性良好，陰性無(wú)干擾。

2.3.7 樣品含量測(cè)定 精密吸取各正交實(shí)驗(yàn)供試品溶液各10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，根據(jù)供試品吸收度積分值與對(duì)照品積分值，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算即得。

2.4 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果

按處方比例稱取處方量的黃芪、赤芍等藥材按提取工藝提取，提取完成后，濾過(guò)，合并濾液，分成8份，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法進(jìn)行純化，濾過(guò)，濾液減壓濃縮，定容至250mL，備用，分別測(cè)定固形物的收率和芍藥苷轉(zhuǎn)移率。以芍藥苷的轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)之一（轉(zhuǎn)移率越高越好），權(quán)重系數(shù)定為0.6；作為除雜效果的直接表征，以總固形物收率為指標(biāo)（收率越低越好），權(quán)重系數(shù)定為0.4，進(jìn)行綜合評(píng)分。

對(duì)評(píng)分結(jié)果作直觀分析和方差分析，以判斷各因素對(duì)純化效果的影響程度，篩選出在該試驗(yàn)條件下最優(yōu)的純化條件，試驗(yàn)安排及結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 試驗(yàn)安排及結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

結(jié)果分析：由直觀分析可知，影響醇沉效果的因素順序?yàn)椋阂掖紳舛龋ˋ）＞藥液濃縮比（B）＞藥液pH值（C），由此得出的最佳工藝組合為A4B1C2。經(jīng)過(guò)方差分析，三個(gè)因素對(duì)醇沉結(jié)果均具有顯著性影響。綜合考慮到縮短生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本等綜合因素，選擇醇濃度70%，藥液濃縮比為1：1，醇沉pH值為4.5作為本工藝的醇沉濃度。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

為確定該工藝的優(yōu)劣和穩(wěn)定性，據(jù)所篩選的條件，既醇濃度70%，藥液濃縮比為1：1，醇沉pH值為4.5，驗(yàn)證3批，結(jié)果芍藥苷平均轉(zhuǎn)移率為78.76%，80%醇浸出物平均為26.86%，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)優(yōu)選結(jié)果吻合，說(shuō)明正交試驗(yàn)選出的工藝條件合理，工藝條件穩(wěn)定可行。

3 討論

3.1 在運(yùn)用各種除雜技術(shù)使藥液達(dá)到澄清的同時(shí)應(yīng)保證成品質(zhì)量的有效性。本文以固形物收率、芍藥苷保留率作為工藝篩選的考察指標(biāo)，采用水提醇沉法對(duì)本品進(jìn)行純化。純化后大大增加制劑的穩(wěn)定性，同時(shí)減小制劑的服用量，克服傳統(tǒng)中成藥“粗、大、黑”的缺點(diǎn)。經(jīng)中試放大表明，本試驗(yàn)純化條件易于控制，穩(wěn)定性好，適于工業(yè)化生產(chǎn)。

3.2 中藥口服液的澄明度受pH值影響顯著，藥液堿性較強(qiáng)，生物堿易析出；酸性較強(qiáng)時(shí)，則部分皂苷易沉淀析出，它們各自有最適pH值。另外由于口服液制劑需高溫滅菌，高溫滅菌前后PH值易發(fā)生變化，造成滅菌前澄清的口服液，在滅菌后澄明度發(fā)生改變，沉淀重新析出?？刂坪每诜旱腜H值，對(duì)提高制劑的澄明度和穩(wěn)定性，確保制劑療效具有重要意義。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]鄭琴，徐德生，馮怡.改善中藥口服液澄明度的思路[J].中成藥，2006，28（10）：1 502.