白康Ⅰ號沖劑中黃芪甲苷的含量測定及臨床應(yīng)用

陳家魯

(本文編輯:張仲書)

白康Ⅰ號沖劑由黃芪、首烏等八味藥材組成，具有滋補肝腎，活血化瘀的功能，主要用于治療白癜風(fēng)。該品種長期作為醫(yī)院科研制劑使用，在臨床上取得了較好的效果。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文分析選擇其君藥黃芪作為研究指標(biāo)，擬對其有效成分黃芪甲苷進(jìn)行系統(tǒng)的研究。黃芪甲苷為紫外末端吸收的物質(zhì)，用紫外分光光度法檢測困難，運用高效液相色譜法配蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ESLD)進(jìn)行黃芪甲苷的檢測已多有報道［1-3］，因此本文采用HPLC-ESLD法進(jìn)行檢測。實驗結(jié)果表明該法具有準(zhǔn)確度高，簡便快捷，干擾少，重現(xiàn)性好等特點，可用于白康Ⅰ號沖劑的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC-20AB日本)，蒸發(fā)光散射檢測器(PL-ELS 2100型)，電子分析天平(梅特勒-托利多ML104型，精確度為萬分之一)。所用試劑中甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，實驗用水為去離子水。

1.2 藥品 白康Ⅰ號沖劑(南京軍區(qū)機(jī)關(guān)醫(yī)院提供，批號：20120301，20120302，20120303)，黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0781-9908)。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Dubhe C18(250 mm×4.6 mm)；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇-水溶液(83∶17)；流速：1.0 ml/min；蒸發(fā)溫度為 90 ℃，散射溫度為60℃，氣體流量：1.8 SLPM；理論塔板數(shù)：以黃芪甲苷峰計不低于10000。

1.3.2 供試品溶液 取白康Ⅰ號沖劑約4 g研細(xì)，精密稱定后置索氏提取器中，加甲醇40 ml冷浸過夜，再加甲醇適量回流4 h，合并回收甲醇并濃縮至干，再加水10 ml微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 ml，合并正丁醇提取液；用氨試液洗滌2次，每次20 ml，棄去氨液。將正丁醇液蒸干，加水3～5 ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5 cm，長12 cm)，以水50 ml洗脫，棄去水液；再用40%乙醇30 ml洗脫，棄去40%乙醇洗脫液；繼用70%乙醇50 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2 ml量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度搖勻，即得。再以0.45 μm微孔濾膜濾過，待進(jìn)樣。

1.3.3 不含黃芪的陰性樣品溶液 取陰性樣品(不含黃芪)約4 g精密稱定，按1.3.2項制備得陰性樣品液。進(jìn)樣10μl，按上述色譜條件測定。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取黃芪甲苷對照品8 mg精密稱定，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻制得0.8202 mg/ml的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)儲備液。精密量取上述溶液適量以甲醇倍比稀釋得濃度為0.0513、0.1026、0.2051、0.4101、0.8202 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，分別吸取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀測定(重復(fù)2次)。

1.3.5 方法學(xué)考驗 以0.1026 mg/ml的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液為測試樣品，連續(xù)進(jìn)樣6針考驗精密度；以(批號20120301)供試品溶液每2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)5次，考驗穩(wěn)定性；以 白康Ⅰ號沖劑(批號20120303)精密稱定6份各4 g，按1.3.2項平行制備樣品液，進(jìn)行重復(fù)性考驗；另稱取同批號白康Ⅰ號沖劑6份，每份2 g，兩份1組，共3組，每組分別加入黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)液(0.1026 mg/ml)0.85、0.90、0.95 ml，進(jìn)行回收實驗；分別取不同批號的白康Ⅰ號沖劑4 g，及取不同批號的藥材粗粉4.0 g，按1.3.2項制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行實際測定。

2 結(jié)果

2.1 液相色譜結(jié)果 結(jié)果見圖1。由圖譜可知在大約7 min處無吸收峰出現(xiàn)，即陰性樣品在黃芪甲苷峰相應(yīng)位置無干擾。

2.2 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線 以峰面積的對數(shù)值為縱坐標(biāo)(Y=lnA)，以進(jìn)樣量的對數(shù)值為橫坐標(biāo)(X=lnQ)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為 Y=1.4847X+11.806，相關(guān)系數(shù)(r)=0.9996，線性范圍為0.0513～0.8202 mg/ml，線性較好。

2.3 方法學(xué)考驗 相對標(biāo)準(zhǔn)誤差(RSD)為1.46%，表明精密度良好。供試品溶液中的黃芪甲苷在8 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.61%，穩(wěn)定性良好。重復(fù)測試，黃芪甲苷的RSD為2.67%，重復(fù)性良好。黃芪甲苷平均回收率為97.53%，RSD為1.24%(表1)，表明本法回收良好。白康I號沖劑中黃芪甲苷的含量為每袋不少于0.4 mg，實測平均為0.44 mg(表2)；黃芪甲苷的藥材的實測平均含量為0.0835%(g/g)(表3)。

圖1 黃芪甲苷色譜圖

3 白康1號沖劑的臨床應(yīng)用

選擇我院2011年1月-2012年12月門診白癜風(fēng)53例，平均年齡36.7(17～66)歲，采用白康1號沖劑配合白康搽劑(自制)進(jìn)行針對治療，3次/d，每次1包，搽劑每日涂抹患處2次，3個月為1個療程，3個療程后觀察治療效果。按照療效評定標(biāo)準(zhǔn)［5］(痊愈：白斑全部消失，恢復(fù)正常膚色；顯效：白斑部分消退或縮小，恢復(fù)正常膚色的面積占皮損面積大于50%；好轉(zhuǎn)：白斑部分消退或縮??；無效：白斑無色素再生或范圍擴(kuò)大)判定治療結(jié)果。結(jié)果顯示，痊愈2例(3.77%)，顯效20例(37.74%)，好轉(zhuǎn)15例(28.30%)，無效16例(30.19%)，總有效率達(dá)69.81%。

表1 HPLC-ESLD回收實驗結(jié)果(n=6)

表2 實際測定結(jié)果(mg，n=6)

表3 藥材中黃芪甲苷的實際測定(n=3)

4 討論

白康一號沖劑中黃芪甲苷的含量隨提取時間的延長而降低。提取2 h所制得供試品含量最高但是不穩(wěn)定，這可能與方中其他藥材的干擾有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步考察。為了更準(zhǔn)確測定其含量，本實驗采用提取4 h制備供試品。2010版藥典［4］規(guī)定黃芪甲苷的測定用乙腈-水溶液作為流動相，筆者實驗發(fā)現(xiàn)用甲醇-水溶液(83∶17)作為流動相得到的黃芪甲苷色譜峰分離度及峰形較好，加之經(jīng)濟(jì)方便的考慮，本實驗采用甲醇-水溶液作為高效液相色譜含量測定的流動相。

白康1號沖劑在臨床使用時，配合白康搽劑(自制)，治療白癜風(fēng)的總有效率達(dá)到69.81%，證明白康1號沖劑是一個具有明確療效的臨床經(jīng)驗方。

［1］趙靈芝，朱丹妮，嚴(yán)永清.HPLC-ELSD法測定黃芪中黃芪甲苷的含量［J］.藥物分析雜志，1999，19(6)：403-405.

［2］胡端龍，姜麗珍，奚靜芳.丹溪玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷的含量測定［J］.中國現(xiàn)代中藥，2011，13(6)：41-42.

［3］張 麗，張愛華，張曉騫，等.HPLC-ELSD法測定仁術(shù)健胃顆粒中黃芪甲苷的含量［J］.中成藥，2004，26(12)：1018-1021.

［4］中華人民共和國藥典2010版(一部)［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1283-1285.

［5］中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會色素病學(xué)組.白癜風(fēng)臨床分型及療效標(biāo)準(zhǔn)(2003年修訂稿)［J］.中華皮膚病雜志 2004，37(7)：440.