夜交藤片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

楊 寶 鄔偉魁

（廣東省梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071）

夜交藤片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

楊 寶 鄔偉魁

（廣東省梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071）

目的 建立夜交藤片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 用TLC法對(duì)夜交藤片中首烏藤進(jìn)行定性鑒別；用HPLC法對(duì)制劑中首烏藤的活性成分2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)行含量測(cè)定。色譜條件：色譜柱為SHIMADZUVP-ODS（4.6nm×250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈∶水（28∶72），流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長為320nm，柱溫為25℃。結(jié)果 薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在20～100μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r＝0.9999，平均回收率為96.45%，RSD為1.84% （n=6）。結(jié)論 該方法靈敏準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可用于夜交藤片的質(zhì)量控制。

夜交藤片；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

夜交藤片源于梅州醫(yī)院的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由首烏藤、合歡皮、遠(yuǎn)志等中藥組成，具有祛痰開竅，滋陰健腦，安神益智的功效；臨床多用于肝腎陰虛引起的心悸怔仲，失眠多夢(mèng)，虛煩不安，憂郁，健忘及工作后疲勞等所致的腦力損傷等癥。該制劑為醫(yī)院制劑，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較低，制定于上世紀(jì)90年代。由于本品臨床療效良好，需求量較大，成為該院醫(yī)院的主打品種。為更好地控制其質(zhì)量，對(duì)本品進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。建立了君藥首烏藤的TLC定性鑒別方法及其有效成分2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

梅特勒AB204-N型電子分析天平；BP211D電子天平；Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；WFH-201B紫外透射反射儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2 材料

對(duì)照藥品有：大黃素（批號(hào)：110756-200110）、大黃素甲醚（批號(hào)：110758-200610）、2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（批號(hào)：111537-201103），首烏藤（批號(hào)：120939-200404中國藥品生物制品檢定所提供）；夜交藤片（批號(hào)110305，110314，110321梅州市第三人民醫(yī)院提供）；乙腈為色譜純（天津四友化工），水為超純水，其余試劑均為分析純。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）。

2 薄層色譜鑒別

取樣品10片，除去糖衣，研細(xì)，加乙醇10mL，超聲處理30min，濾過，濾液作為供試品溶液。取首烏藤對(duì)照藥材1g，研細(xì)，加乙醇10mL，超聲處理30min，濾過，濾液為對(duì)照品溶液。取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品，分別加甲醇制成每1mL含1mg的對(duì)照品溶液。首烏藤以外各藥材按處方比例稱取，按工藝提取，即得除首烏藤以外各藥材混合干浸膏粉，取混合干粉約10g，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，各吸取5μL上述五種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視[1-3]。在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。見圖1。

圖1 首烏藤薄層色譜圖（1.供試品溶液；2.首烏藤對(duì)照藥材溶液；3.陰性對(duì)照溶液；4.大黃素對(duì)照品；5.大黃素甲醚對(duì)照品）

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[1]

Agilent 1100高效液相色譜儀；色譜柱：SHIMADZU VP-ODS 250 ×4.6，SN:8022538；流動(dòng)相：乙腈∶水（28∶72）；流速：1.0mL/ min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL；測(cè)波長為320nm[4-6]。

3.2 對(duì)照品溶液制備[1]

精密稱定2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，加稀乙醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液制備[7，8]

10片本品，去除糖衣，研沫，取適量（約相當(dāng)于首烏藤藥材0.5g）置25mL量瓶中，精密加入稀乙醇20mL，超聲30min，加稀乙醇至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

3.4 線性關(guān)系考察

把所得對(duì)照品溶液濃度為：20μg/mL、40μg/mL、60μg/ mL、80μg/mL、100μg/mL。分別精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在20～100μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果：供試品溶液的平均峰面積為2723.89，RSD為0.062%，表明其穩(wěn)定性較好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取6份同一批號(hào)的樣品，制備方法同供試品溶液。結(jié)果顯示其重復(fù)性良好。

3.7 專屬性試驗(yàn)

按色譜條件精密吸取上述制備的溶液10μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果：陰性對(duì)照在對(duì)照品相同保留時(shí)間處無干擾峰，故認(rèn)為其它藥味對(duì)2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定無干擾。

3.8 樣品含量測(cè)定

分別取3個(gè)批次的樣品（批號(hào)110305，110314，110321），按3.3項(xiàng)方法制備供試品溶液，測(cè)得樣品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量為64.158，60.156，61.921mg/片。

4 討 論

4.1 測(cè)定指標(biāo)的考察

首烏藤為夜交藤片處方中君藥，其主要成分為大黃素、大黃素甲醚、2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷。其中大黃素、大黃素甲醚為大黃、虎杖等藥材常見的成分，而2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷是首烏藤中特有的成分，為更好控制藥品質(zhì)量，體現(xiàn)首烏藤藥材中這一專屬性成分，因此本實(shí)驗(yàn)最終以2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為含量測(cè)定的指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該含量測(cè)定方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)。

4.2 陰性對(duì)照取樣量選擇

為體現(xiàn)陰性對(duì)照對(duì)2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷測(cè)定的影響，更具有代表性，故陰性對(duì)照溶液制備時(shí)取樣量約為供試品溶液制備時(shí)的4倍。

4.3 流動(dòng)相的選擇

以不同比例的乙腈-水（28∶72、26∶74、20∶80、15∶85）作為流動(dòng)相，考察流動(dòng)相比例改變時(shí)，對(duì)樣品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰形和分離效果的影響。結(jié)果顯示，乙腈比例變化對(duì)樣品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰形和分離效果有較大的影響。由于以乙腈∶水（28∶72）為流動(dòng)相時(shí)，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷出峰時(shí)間約6min，分離效果較好，故本實(shí)驗(yàn)采用乙腈：水為流動(dòng)相。

4.4 供試品提取方法的選擇

對(duì)供試品提取方法進(jìn)行了對(duì)比和篩選：①2010版《中國藥典》一部首烏藤含量測(cè)定項(xiàng)下方法，采用加熱回流的方法。②本文方法，采用超聲處理的方法。結(jié)果顯示，2種方法所得結(jié)果基本一致，因此采用超聲處理的方法，體現(xiàn)更方便、快捷的原則。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010: 164.

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1671-8194（2013）26-0067-02