及己根醇提物抗炎作用的研究※

孫淑萍 李勝利

（1 皖南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，蕪湖241002；2 安徽省亳州市華佗中醫(yī)院骨傷科，亳州236800）

炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子的防御性反應(yīng)，是許多疾病發(fā)生、發(fā)展的基礎(chǔ)。對(duì)于非感染性炎癥，抗生素是無益的。非感染性炎癥性疾病的治療多以水楊酸為代表的非甾體類抗炎藥、糖皮質(zhì)激素為代表的甾體類抗炎藥、甲氨蝶呤為代表的免疫抑制藥為主，但由于這三類藥物均存在明顯的不良反應(yīng)而限制了它們的臨床應(yīng)用。因此，尋找抗炎療效好，不良反應(yīng)小的新型抗炎藥物成為目前抗炎藥研究的重要方向之一。雷公藤具有糖皮質(zhì)激素樣抗炎、免疫抑制作用，卻無糖皮質(zhì)激素的副作用，廣泛用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病，其見效快、療效確切，幾乎沒有可以完全替代的類似中藥。但在使用過程中，雷公藤引起的毒副反應(yīng)事件屢見報(bào)道，成為近半個(gè)世紀(jì)以來發(fā)生中毒事件最多的中草藥之一，其毒副作用在傳統(tǒng)中草藥中排第三，其毒副作用限制了其在許多領(lǐng)域的應(yīng)用。因此進(jìn)一步尋找抗炎療效好，毒副作用小的中藥很有必要、非常迫切。

及己（Chloranthus serratus Roem.et Schalt.）為金粟蘭科金粟蘭（Chloranthaeeae）屬植物及己的根。鑒于目前國內(nèi)外尚無及己抗炎作用及其機(jī)制的研究報(bào)道，本文擬進(jìn)行及己抗炎作用的研究。

1 材料與儀器

1.1 材料 及己（采于安徽黃山）；角叉菜膠（上海金穗生物科技有限公司）；伊文思藍(lán)（上海速科實(shí)業(yè)有限公司）；醋酸、生理鹽水、二甲苯（天津市百世化工有限公司）；雷公藤多苷片（黃石飛云制藥有限公司）等。

1.2 動(dòng)物 昆明種雄性小鼠，體重18～22g，SD雄性大鼠，體重（220±30）g，均由南京江寧青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供。

1.3 儀器 紫外分光光度計(jì)（上海分析儀器廠）；紫外分光光度計(jì)（UV－2550，島津SHIMADZU）；電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）；BS系列電子天平（塞多利斯）；TGL－16G型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；高速離心機(jī)（TDL－5型，上海利揚(yáng)儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛明儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 及己醇提液的制備 將及己根洗凈，晾干后粉碎成粗粉，置于圓底燒瓶中，加10倍量75%乙醇浸泡1h，回流提取1h，用三層紗布過濾。藥渣再加10倍量75%乙醇，回流提取1h，用三層紗布過濾，兩次濾液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，濃縮至1g／ml。

2.2 及己根醇提液對(duì)角叉菜膠足跖腫脹的影響 取昆明種雄性小鼠50只（18～22g），隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為高、中、低劑量組，雷公藤多苷片組（陽性組），生理鹽水（NS）組即空白組。于灌胃給藥后1h，在大鼠右后足跖皮下注射角叉菜膠0.1ml。致炎后1～5h，每小時(shí)用窄帶尺分別測(cè)量左右踝關(guān)節(jié)周徑，以其差值作為腫脹度。結(jié)果（見表1）。說明及己根醇提液對(duì)小鼠角叉菜膠性足跖腫脹具有顯著的抑制作用。

表1 及己根醇提液對(duì)角叉菜膠足跖腫脹的影響（±S）

表1 及己根醇提液對(duì)角叉菜膠足跖腫脹的影響（±S）

注：與生理鹽水組相比，＊＊P＜0.01

組別 n 劑量／g·kg－11h 2h 3h 4h 5h生理鹽水組 10 － 7.19±0.549.79±0.3811.85±0.2510.58±1.149.14±1.37低劑量組 101.25.98±1.15＊＊ 7.37±0.97＊＊ 9.89±1.27＊＊ 9.43±1.13＊＊ 7.48±1.53＊＊中劑量組 102.43.47±1.75＊＊ 5.20±1.19＊＊ 7.43±0.586.35±1.87＊＊ 5.36±0.64＊＊高劑量組 103.62.15±0.59＊＊ 2.39±1.15＊＊ 2.43±1.51＊＊ 1.50±0.93＊＊ 1.39±1.67＊＊雷公藤多苷片組 100.003632.24±0.1.03＊＊ 2.49±0.84＊＊ 2.51±1.09＊＊ 1.57±0.78＊＊ 1.52±1.33＊＊

2.3 及己根醇提液對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響[1]昆明種雄性小鼠，分組同上。根據(jù)小鼠體重按每10g灌胃0.2ml，計(jì)算給藥量。連續(xù)灌胃給藥4d。末次給藥后1h，用移液槍在小鼠左耳涂抹二甲苯正反兩面各10μl。30min后，將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳。用6mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，電子天平稱重。計(jì)算腫脹抑制率。腫脹抑制率（%）＝A（B）／A×100%式中，A代表空白組腫脹度，B代表受試藥物組或陽性對(duì)照藥物組腫脹度。腫脹度（g）＝左耳重量－右耳重量，結(jié)果見表2。表2說明及己根醇提液有減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹的效果。

表2 及己根醇提液對(duì)小鼠耳腫脹度的影響（±S，%）

表2 及己根醇提液對(duì)小鼠耳腫脹度的影響（±S，%）

注：與生理鹽水組相比，＊＊P＜0.01

組別 n 劑量／g·kg－1 耳腫脹度／g 抑制率生理鹽水組10 － 0.008430±0.0001077 －低劑量組 101.20.006965±0.0001100＊＊ 17.4中劑量組 102.40.006115±0.0002015＊＊ 27.5高劑量組 103.60.004755±0.0001663＊＊ 43.6雷公藤多苷片組 100.003630.004231±0.0001037＊＊50.2

2.4 及己根醇提液對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[2]

昆明種雄性小鼠，分組同上。根據(jù)小鼠體重按每10g灌胃0.2ml，計(jì)算給藥量。空白組按體重灌服等量生理鹽水。連續(xù)灌胃給藥4d。末次給藥后1h，各鼠尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水0.1ml／10g，隨即腹腔注射0.6%醋酸0.1ml／10g。20min后將小鼠頸椎脫臼處死，腹腔注射NS6ml。輕揉小鼠腹部后，沿腹中線剪1小口，傾出腹腔溶液約5～6ml，1000r／min離心5min。在紫外分光光度計(jì)590nm波長處測(cè)定吸收度。并進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果見表3。表3說明及己根醇提液高、中、低劑量組、雷公藤多苷片組與生理鹽水組相比均有顯著性差異，低、中、高三組之間及三組與雷公藤多苷片組之間都沒有顯著性差異。說明及己根醇提液具有與雷公藤多苷片相當(dāng)?shù)囊种拼姿崴碌母骨幻?xì)血管通透性增加的效果。

表3 及己根醇提液對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（±S）

表3 及己根醇提液對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（±S）

注：與生理鹽水組相比，＊＊P＜0.01

組別 n 腹腔洗出液吸收度值生理鹽水組100.452±0.006低劑量組 100.343±0.009＊＊中劑量組 100.316±0.002＊＊高劑量組 100.310±0.012＊＊雷公藤多苷片組 100.304±0.007＊＊

2.5 及己根醇提液對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生的影響[3]昆明種雄性大鼠，分組同上。在乙醚麻醉下，無菌操作，在大鼠雙側(cè)腋窩各植入一消毒棉球（20mg／只）。灌胃給藥qd×7d，第8天處死，剝離肉芽組織，在80℃下烘干1h，精密稱重，減去棉球重量，即為肉芽腫干重，結(jié)果見表4。表4說明及己根醇提液對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生有抑制作用。

表4 及己根醇提液對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生的影響（±S，%）

表4 及己根醇提液對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生的影響（±S，%）

注：與生理鹽水組相比，＊＊P＜0.01

組別 n 劑量／g·kg－1 肉芽腫干重（mg） 抑制率生理鹽水組10 － 98.508±0.4440 －低劑量組 101.278.487±0.3619＊＊ 20.3中劑量組 102.452.479±0.2334＊＊ 46.7高劑量組 103.630.659±0.2023＊＊ 68.9雷公藤多苷片組 100.0036328.540±0.2573＊＊71.0

總之，通過及己根醇提液對(duì)角叉菜膠足跖腫脹的影響、對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響、對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響、對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生的影響這幾個(gè)實(shí)驗(yàn)可以說明及己確有抗炎作用。

3 討論

既往研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤含有萜類（二萜類、三萜類、倍半萜）等成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕的作用，被廣泛應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及各種自身免疫性疾病的治療[4]。昆明山海棠含有萜類等成分，具有良好的抗炎作用，能抑制炎癥時(shí)毛細(xì)血管通透性增高，減少滲出，抑制增生，對(duì)免疫功能有影響[5]。千年健含有萜類成分，有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕作用。因此，可以從含有萜類成分的中藥中尋找有效抗炎藥物[6]。

及己中含有的化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，其骨架可分為桉葉烷型、環(huán)桉烷型、吉馬烷型、菖蒲烷型等數(shù)種類型，同時(shí)它們具有內(nèi)酯、酮、醇、多聚體等多種形式。在 《中藥大辭典》中記載及己含有以下成分：二氫焦莪術(shù)呋喃烯酮、焦莪術(shù)呋喃烯酮、銀線草內(nèi)酯E、F、新菖蒲酮、金粟蘭內(nèi)酯C、銀線草內(nèi)酯C、環(huán)銀線草醇A、B、C、D等。這些化合物中，以單萜和倍半萜為主，其中金粟蘭內(nèi)酯等倍半萜類化合物在及己中含量較多，是及己中的主要指標(biāo)性成分[7]。

《中藥大辭典》記載及己功用主治：活血散瘀，祛風(fēng)止痛，解毒殺蟲。主治跌打損傷，骨折，經(jīng)閉，風(fēng)濕痹痛等（中醫(yī)風(fēng)濕痹證范疇包括西醫(yī)的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾?。?。 《全國中草藥匯編》指出及己“舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)止痛、消腫解毒，主治跌打損傷、風(fēng)濕腰腿痛、疔瘡腫毒、毒蛇咬傷”[8]。故從及己含萜類成分及臨床應(yīng)用兩方面分析均支持其有抗炎作用。

本文通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)及己根醇提液對(duì)小鼠角叉菜膠性足跖腫脹具有顯著的抑制作用、有減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹的效果、能抑制醋酸所致的腹腔毛細(xì)血管通透性增加、對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生有抑制作用，也充分說明及己確有抗炎作用。

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