靜態(tài)頂空－氣相色譜法測定太蒼止瀉顆粒中揮發(fā)性組分

李雪巖

（河南省宜陽縣中醫(yī)院，洛陽471600）

傳統(tǒng)中藥的質(zhì)量控制一直是一個難點(diǎn)，因?yàn)橹参锼幹薪M分復(fù)雜，當(dāng)組成成方后組分更為復(fù)雜，如何去評價(jià)復(fù)方中藥的質(zhì)量尤為困難，而目前對于中成藥的質(zhì)量評價(jià)主要是測定其中一種或者幾種指標(biāo)性成分，以液相色譜為主要方法，而中藥指紋圖譜的建立可以更加全面的控制藥材以及成藥的質(zhì)量[1－2]，目前關(guān)于中成藥指紋圖譜大多以液相色譜作為其分析手段[3－4]，但是對于成藥處方藥材質(zhì)量中代表性藥材及飲片的質(zhì)量控制，尤其是成藥處方中存在含揮發(fā)性組分的藥材及飲片，質(zhì)量控制成為突出的問題，揮發(fā)性成分與藥品包裝以及放置有直接的關(guān)系，隨著時(shí)間的推移，中成藥的揮發(fā)性組分會發(fā)生變化，成藥的有效性會降低，而在單一藥材中則可以對揮發(fā)油進(jìn)行總量檢查，而成方中揮發(fā)性組分如何評價(jià)，如何快速對中成藥中揮發(fā)性組分評價(jià)尚未報(bào)道。

頂空氣相色譜，尤其靜態(tài)頂空氣相色譜[5]，樣品不需處理，可以直接測定固體樣品[5]，而頂空氣相技術(shù)大部分在環(huán)保以及食品工業(yè)揮發(fā)性成分測定中廣泛應(yīng)用，制藥行業(yè)只在原料藥溶劑殘留中應(yīng)用，在中成藥質(zhì)量控制中尚未見報(bào)道，與傳統(tǒng)的揮發(fā)油提取模式比，頂空氣相色譜更能通過指紋峰的變化來判斷成分的遷移與降解，對于判定含有揮發(fā)性藥材的成藥質(zhì)量及有效期有很好的作用。

太蒼止瀉顆粒（豫藥制字Z04030114）是宜陽縣中醫(yī)院的經(jīng)驗(yàn)方，長期使用，療效顯著。其方由蒼術(shù)，茯苓，車前子，烏梅肉，藿香等藥味組成，主要用于治療脾胃虛弱所致的大便清泄，飲食減少，食后腹脹，倦怠懶言，以及慢性腸炎，方中蒼術(shù)，藿香揮發(fā)性組分含量是其主要起效成分，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道蒼術(shù)中主要組分為蒼術(shù)素，蒼術(shù)酮以及β－桉葉醇等[6]，而藿香中主要成分為百秋里醇與藿香醇等[7]，作者采用靜態(tài)頂空氣相對其進(jìn)行指紋判別。

1 儀器與試藥

安捷倫7890A氣相色譜儀，7694E靜態(tài)頂空進(jìn)樣器，F(xiàn)ID檢測器，DB－5石英毛細(xì)管色譜柱（30×0.25mm，025μm），Chemstation化學(xué)工作站藿香酮（批號：111822－201001）購自中國藥品生物制品檢定所，太蒼止瀉顆粒由洛陽市宜陽縣中醫(yī)院提供，批號（20110721，20111014，20111218）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品配置 取藿香酮加同樣體積水作為頂空溶劑，配置成10μg·mL－1對照品溶液置頂空瓶中密封。

2.2 樣品前處理 直接稱取6g樣品置頂空瓶中，用壓蓋器密封，放置于頂空裝置中。

2.3 氣相色譜條件 進(jìn)樣口溫度200℃，檢測器溫度為250℃，載氣為N2，柱流量為1.5ml·min－1，分流模式：不分流，總流量為25ml·min－1，尾吹為22ml·min－1，程序升溫，初始柱溫為40℃，保持3min，以5℃·min－1升溫至150℃，保持5min，以10℃·min－1升溫至220℃，保持10min。

2.4 頂空條件 爐溫120℃，定量管溫度150℃，氣體傳輸線溫度170℃，樣品在頂空倉內(nèi)平衡15分鐘，樣品內(nèi)加壓時(shí)間0.3min，定量環(huán)充氣時(shí)間0.2min，定量環(huán)平衡時(shí)間0.02min，進(jìn)樣時(shí)間0.3min。

圖1 頂空氣相色譜典型指紋圖譜

圖2 藿香酮對照品色譜圖

圖3 樣品放置時(shí)間與峰總面積關(guān)系

2.5 指紋圖譜的建立 按照2.3與2.4項(xiàng)下的色譜與頂空條件進(jìn)樣，通過優(yōu)化色譜及頂空條件，得到11個特征峰，見圖1.藿香酮對照品峰見圖2.以不同批次重復(fù)出現(xiàn)并且面積大于總面積1%的峰作為色譜指標(biāo)峰。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一批次（20110721）太蒼止瀉顆粒樣品進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣5次，11個特征峰的保留時(shí)間RSD小于0.3%，相對峰面積RSD小于1.2%，表明方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取壓蓋器密封好的樣品室溫放置1h，5h，12h，18h，24h，48h置頂空進(jìn)樣器中按照頂空條件進(jìn)樣，其中11個峰相對保留時(shí)間RSD小于0.3%，相對峰面積RSD小于1.0%，表明樣品在頂空瓶中室溫條件下穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號的（20110721）太蒼止瀉顆粒樣品，按照2.2項(xiàng)下的制備方法，制備樣品5份，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果11個特征峰峰面積RSD小于2.5%，相對保留時(shí)間RSD小于1.8%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

3 討論

3.1 色譜條件的優(yōu)化 因?yàn)槌Ｒ?guī)頂空氣相色譜分析固體中痕量組分，作者采用分流以及不分流模式分別測定，不分流模式要比分流模式靈敏度顯著增加，故選用不分流模式作為色譜條件。

3.2 頂空條件優(yōu)化 由于未采用固相微萃取技術(shù)[8]，常規(guī)頂空氣相普通實(shí)驗(yàn)室十分普及，但是中成藥中揮發(fā)性組分屬于微量甚至為痕量組分，如何能保證靈敏度，作者一方面采用不分流進(jìn)樣模式，另外增加頂空進(jìn)樣時(shí)間來增加進(jìn)樣量，這樣才能保證揮發(fā)性組分在氣相色譜上都有響應(yīng)，而FID檢測器在pg級別碳?xì)浠衔锒加许憫?yīng)，故不需固相微萃取則對樣品進(jìn)行分析。

3.3 樣品處理 作者比較了樣品加水作為溶劑，與加水與NaCl作為頂空溶劑以及固體樣品直接進(jìn)樣，結(jié)果以固體顆粒直接放置于頂空瓶進(jìn)樣響應(yīng)最好，故以此為進(jìn)樣方式。

3.4 樣品放置時(shí)間與含量關(guān)系 藿香以及蒼術(shù)的貯藏時(shí)間都對其揮發(fā)油的含量有影響[9]，作者考察了樣品打開包裝在培養(yǎng)皿中放置時(shí)間對其峰總面積的影響，結(jié)果表明隨著時(shí)間的增加，其峰面積總量逐漸的降低，也與文獻(xiàn)報(bào)道藥材的特征相似，而封裝在塑料袋之內(nèi)，但是其揮發(fā)性組分已經(jīng)揮發(fā)于空氣，加上原藥材以及制劑制粒過程成損失，則成藥的質(zhì)量有效期為2年，作者認(rèn)為極為不合理，應(yīng)該縮短其有效期。

傳統(tǒng)中成藥制劑復(fù)方成分復(fù)雜，而作為藥檢部門若只依據(jù)單一組分來對藥品整體質(zhì)量進(jìn)行控制并不能保證藥品質(zhì)量，而按照目前中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，大部分依靠測定其中一種或多種組分來判定成藥的質(zhì)量，而實(shí)際中中藥組分復(fù)雜，往往一個處方有十種或以上藥材組成，每種藥材中指標(biāo)成分分別控制或者同時(shí)控制并不現(xiàn)實(shí)，也增加藥品檢驗(yàn)成本，而最近關(guān)于中藥指紋圖譜方面的研究日益增加[1，2]，而液相色譜作為現(xiàn)在樣品含量測定方面主流方法，被廣泛應(yīng)用，但是如何在不同流動相，不同色譜柱上保證保留時(shí)間以及方法的可復(fù)制性，加上樣品處理繁瑣，成為困擾指紋圖譜發(fā)展的首要因素，而氣相色譜 “流動相”為單一的氣體，在保留時(shí)間重現(xiàn)性上比液相色譜有更佳的表現(xiàn)，利用保留時(shí)間鎖定與頂空進(jìn)樣的簡便性，通過測定揮發(fā)性組分的指紋峰來判定成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，成為傳統(tǒng)中藥質(zhì)量控制中有益的嘗試。

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