新疆漢族與維吾爾族酒依賴患者家庭暴力行為與COMT基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)分析☆

鄒韶紅趙宗峰馬瑞董紅斌佟鈣玉

家庭暴力不僅是一個(gè)社會(huì)問題，也是一個(gè)醫(yī)學(xué)、公共衛(wèi)生和精神衛(wèi)生問題。開展家庭暴力的預(yù)防研究是當(dāng)前精神應(yīng)激研究領(lǐng)域的重要任務(wù)，尋找家庭暴力的危險(xiǎn)因素，又是開展預(yù)防研究的重要手段。以往的研究可以將酒依賴患者家庭暴力的相關(guān)因素概括為：生物學(xué)因素、社會(huì)文化因素和社會(huì)心理學(xué)因素。迄今為止，有關(guān)酒依賴患者家庭暴力的生物學(xué)研究無(wú)論國(guó)內(nèi)國(guó)外都十分有限[1]。暴力行為除與社會(huì)、心理因素有關(guān)外，還與一些中樞神經(jīng)遞質(zhì)及其相關(guān)的基因和基因表達(dá)有關(guān)[2]。其中，人類兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶（Catechoi-O-methyltran-sferase，COMT）基因多態(tài)性成為暴力攻擊行為基因研究的熱點(diǎn)之一。國(guó)內(nèi)和國(guó)外的部分研究顯示rs4680位點(diǎn)低活性Met/Met基因型與攻擊行為有關(guān)[3-5]，但也有相反的研究結(jié)果認(rèn)為，高活性Val/Val基因型更富有攻擊性[6]。針對(duì)不同民族酒依賴患者家庭暴力行為的遺傳學(xué)研究目前還未見報(bào)道，故本研究以新疆地區(qū)漢族與維吾爾族酒依賴家庭施暴者和酒依賴無(wú)施暴者為研究對(duì)象，探討暴力行為與COMT基因rs4818、rs4680兩位點(diǎn)多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象 來(lái)自新疆精神衛(wèi)生中心戒酒科及我院臨床心理科，符合中國(guó)精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)第三版（Chinese Classification and Diagnostic Criteria of Mental Disorder，CCMD-3）和國(guó)際疾病分類（International Statistical Classification of Diseases，ICD-10）酒依賴診斷分類，年齡25歲～65歲，排除嚴(yán)重軀體疾病和其他精神疾病等情況。共有194例酒依賴患者納入研究，均為男性，年齡25～64歲，平均（42.25±7.04）歲。其中漢族126例，平均年齡（42.14±7.63）歲；維吾爾族68例，平均年齡（42.47±6.92）歲，兩組年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

全部入組對(duì)象及家屬對(duì)本研究知情，并簽署知情同意書。本研究通過院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 家庭暴力問卷調(diào)查 自行設(shè)計(jì)家庭暴力調(diào)查表，內(nèi)容包括社會(huì)人口學(xué)資料（年齡、性別、族別、婚姻狀況、職業(yè)和受教育年限等）和對(duì)家人施暴情況。對(duì)施暴的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)家庭暴力的定義（指對(duì)配偶進(jìn)行傷害、折磨、摧殘和壓迫等人身方面的強(qiáng)暴行為，其手段有毆打、捆綁、凌辱人格、殘害身體、限制人身自由、精神摧殘、遺棄以及性虐待等）[7－8]，具體調(diào)查內(nèi)容為：①在家中您對(duì)家人是否采取過以下行為（可多項(xiàng)填）：羞辱或吵架漫罵；摔東西；限制家人衣食住行、超負(fù)荷勞動(dòng)等；徒手毆打(拳打腳踢)；持械毆打(如捆綁、鞭打)；非意愿性性行為。②如果對(duì)家人曾發(fā)生過這種行為，請(qǐng)問發(fā)生次數(shù)：1周3次以上；1周1～2次；1月2～3次；半年2～3次；1年2～3次。如果1年至少有2～3次任1項(xiàng)施暴行為則認(rèn)為屬于施暴組。

由1名經(jīng)過系統(tǒng)學(xué)習(xí)和訓(xùn)練的精神科主治醫(yī)師在安靜獨(dú)立的房間分別對(duì)各研究對(duì)象進(jìn)行訪談。有關(guān)家庭暴力的問題由研究者與患者進(jìn)行深入訪談后記錄。對(duì)精神摧殘方面，被施暴者是否感到痛苦，詢問其家屬以落實(shí)。

1.2.2 基因組DNA的提取及特定片段的PCR擴(kuò)增 問卷調(diào)查后，于次日晨采集空腹外周靜脈血3～4mL，放置于5mL的EDTA－Na2抗凝管中，－80℃冰箱儲(chǔ)存。用TIANGEN血液基因組DNA提取試劑盒提取樣本DNA。PCR引物序列由北京鼎國(guó)生物技術(shù)工程有限責(zé)任公司合成，上游引物為5’－TCGTGGACGCCGTGATTCAGG－3’，下 游 引 物 為5’－ACAACGGGTCAGGCATGCA－3’。PCR反應(yīng)總體系為40μL，反應(yīng)液為 10×buffer（含 Mg2+，20μM/μL）4μL，dNTP（10μM/μL）1μL，TaqDNA 聚合酶（2U/μL）1μL，模板 DNA 1μL，上下游引物各1μL（10μM/μL），加ddH2O至40μL，在PTC－100 PCR擴(kuò)增儀上擴(kuò)增。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性3min，進(jìn)入循環(huán)，95℃變性30s，68℃退火1min，72℃延伸90s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min，4℃保存。反應(yīng)結(jié)束后取5μL擴(kuò)增產(chǎn)物于1×TAE緩沖液中用1%瓊脂糖凝膠電泳20min（恒壓150V），電泳結(jié)果在凝膠成像系統(tǒng)拍照保存。

1.2.3 測(cè)序分型 擴(kuò)增產(chǎn)物由北京鼎國(guó)生物技術(shù)工程有限責(zé)任公司進(jìn)行目的片段測(cè)序，結(jié)果返回后對(duì)相應(yīng)位點(diǎn)分型并記錄。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法根據(jù)施暴情況，將漢族與維吾爾族酒依賴患者分別分為施暴和無(wú)施暴兩亞組。使用SPSS 10.0，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)計(jì)算基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡法則，χ2檢驗(yàn)比較同一民族兩亞組之間基因型以及等位基因頻率的分布差異，并應(yīng)用QUANTO version1.2計(jì)算統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)功效（1-β）值。應(yīng)用SHEsis軟件，經(jīng)χ2檢驗(yàn)進(jìn)行兩位點(diǎn)聯(lián)合分析，D’值>0.7定義為強(qiáng)連鎖[9]。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

漢族酒依賴患者組中，有70例（55.6%）施暴者，平均年齡（40.79±7.24）歲，無(wú)施暴者平均年齡（41.84±7.92）歲，二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；維吾爾族酒依賴患者組中，有34例（50.0%）施暴者，平均年齡（41.69±6.70）歲，無(wú)施暴者平均年齡（41.25±6.11）歲，二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。兩民族酒依賴患者中，施暴者的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) 漢族酒依賴患者中兩亞組 的 rs4680（χ2=0.155，P=0.694；χ2=0.140，P=0.708）和rs4818（χ2=2.649，P=0.104；χ2=0.024，P=0.876）位點(diǎn)基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡法則；維吾爾族酒依賴患者中兩亞組的 rs4680（χ2=3.316，P=0.069；χ2=0.105，P=0.746）和 rs4818（χ2=3.316，P=0.069；χ2=1.492，P=0.222）位點(diǎn)基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡法則。

表1 兩民族施暴組與無(wú)施暴組rs4680位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布

表2 兩民族施暴組與無(wú)施暴組rs4818位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布

2.2 rs4680位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布的比較 兩民族酒依賴施暴組與酒依賴無(wú)施暴組rs4680位點(diǎn)基因型和等位基因頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。漢族兩亞組統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)功效（1-β）值為0.760，維吾爾族兩亞組統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)功效（1-β）值為0.570。

2.3 rs4818位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布的比較 兩民族酒依賴施暴組與酒依賴無(wú)施暴組rs4818位點(diǎn)基因型和等位基因頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。漢族兩亞組統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)功效（1-β）值為0.769，維吾爾族兩亞組統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)功效（1-β）值為0.615。

2.4 兩位點(diǎn)聯(lián)合作用分析 兩個(gè)SNPs的連鎖不平衡檢驗(yàn)以及雙位點(diǎn)聯(lián)合分析結(jié)果表明，漢族兩組rs4818-rs4680之間 D’=1.000，r2=0.235；維吾爾族兩組 rs4818-rs4680之間D’=1.000，r2=0.519。兩民族兩個(gè)SNPs位點(diǎn)之間存在強(qiáng)連鎖不平衡，兩個(gè)SNPs處于同一個(gè)單倍型，可以進(jìn)行單倍型分析。漢族、維吾爾族酒依賴施暴組與酒依賴無(wú)施暴組進(jìn)行單倍型頻率的比較，兩民族兩組間rs4818-rs4680組成的單倍型頻率差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

COMT基因是暴力攻擊行為研究的重要候選基因之一，到目前為止已發(fā)現(xiàn)COMT基因編碼區(qū)至少有8個(gè)單核苷酸多態(tài)性變異[10],COMT基因的rs4818、rs4680多態(tài)性均位于第四外顯子。本研究采用病例對(duì)照研究方法，選擇rs4818、rs4680兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行分析，試圖了解新疆漢族與維吾爾族酒依賴患者家庭暴力行為與COMT基因多態(tài)性的關(guān)系。結(jié)果提示，rs4680與rs4818位點(diǎn)兩民族酒依賴施暴組與無(wú)施暴組基因型與等位基因頻率差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），這說明COMT基因rs4818、rs4680位點(diǎn)可能不是新疆漢族與維吾爾族暴力行為的單一易感基因，此與Jones等[11]的推測(cè)不一致，他認(rèn)為COMT基因不僅與精神分裂癥患者的攻擊行為有關(guān)，也可能與普通人群的攻擊行為有關(guān)。另外，劉文英等[12]和黃雄等[13]研究國(guó)內(nèi)精神分裂癥患者暴力行為與rs4680位點(diǎn)基因多態(tài)性的關(guān)系，未發(fā)現(xiàn)二者之間相關(guān)，從側(cè)面支持了本研究的研究結(jié)果。

單倍型分析能夠檢測(cè)出變異的連鎖不平衡，比單個(gè)位點(diǎn)的分析更具效能[14]。對(duì)rs4818、rs4680兩位點(diǎn)聯(lián)合作用分析提示，兩民族兩組間rs4818-rs4680組成的單倍型頻率差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

針對(duì)酒依賴患者家庭暴力行為的遺傳學(xué)研究非常有限，本研究雖然得出新疆漢族與維吾爾族酒依賴患者家庭暴力行為與COMT基因rs4818和rs4680位點(diǎn)可能無(wú)關(guān)聯(lián)性的結(jié)論，但考慮到樣本數(shù)量偏少，且統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)功效（1-β）值并不高，結(jié)論有出現(xiàn)假陰性的可能，后續(xù)的工作需要擴(kuò)大樣本數(shù)量，尤其是維吾爾族樣本數(shù)量，結(jié)合環(huán)境因素的交互作用，進(jìn)一步探討家庭暴力行為與COMT基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)及連鎖。

[1]趙幸福,張亞林.暴力攻擊行為相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)精神病學(xué)分冊(cè)，2004,31(3):147－149.

[2]Gerra G,Garofano L,Bosari S,et al.Analysis of monoamine oxi?dase A(MAO－A)promoter polymorphism in male heroin－depen?dent subject:behavioural and personality correlates[J].Neural Transm,2004,111(5):611－621.

[3]Kim YR,Kim JH,Kim SJ,et al.Catechol－O－methyltransfer?aseVal158Met polymorphism in relation to aggressive schizophre?nia in a Korean population[J].Eur Neuropsychopharmacol,2008,18(11):820－825.

[4]Gu Y,Yun L,Tian Y,et al.Association between COMT gene and Chinese male schizophrenic patients with violent behavior[J].Med Sci Monit,2009,15(9):484－489.

[5]Matthew D,Albaugh BA,Valerie S,et al.COMT Val158Met gen?otype as a risk factor for problem behaviors in youth[J].J Am Acad Child Adolesc Psychiatry,2010,49(8):841－849.

[6]Caspi A,Langley K,MilneB,et al.A replicated molecular genet?ic basis for subtyping antisocial behavior in children with atten?tion－deficit/hyperactivity disorder[J].Arch Gen Psychiatry,2008,65(2):203－210.

[7]張亞林.高級(jí)精神病學(xué)[M].長(zhǎng)沙:中南大學(xué)出版社.2007:801－811.

[8]鄒韶紅,張亞林,張勇,等.夫妻暴力社會(huì)人口學(xué)及社會(huì)文化因素的研究[J].中國(guó)臨床心理學(xué)雜志,2010,18(3):326－328.

[9]Gabriel SB,Schaffner SF,Nguyen H,et al.The structure of hap?lotype blocks in the human genome[J].Science,2002,296(5576):2225－2229.

[10]王美萍,張文新.COMT基因多態(tài)性與攻擊行為的關(guān)系[J].心理科學(xué)進(jìn)展,2010,18(8):1256－1262.

[11]Jones G,Zammit S,Norton N,et al.Aggressive behaviour in pa?tients with schizophrenia is associated with catechol－O－methyl?transferase genotype[J].Br J Psychiatry,2001,179(4):351－355.

[12]劉文英,周云飛,高歡,等.精神分裂癥COMT基因多態(tài)性與暴力行為的關(guān)聯(lián)研究[J].中國(guó)民康醫(yī)學(xué),2008,20(11):1105－1107.

[13]黃雄,姜南林,振強(qiáng),等.COMT基因多態(tài)性與精神分裂癥暴力攻擊行為的關(guān)聯(lián)性[J].廣東醫(yī)學(xué),2010,31(1):82－83.

[14]Frazer KA,Ballinger DG,Cox DR,et al.A second generation hu?man haplotype map of over3.1 million SNPs[J].Nature,2007,449(7164):851－861.