38例慢性淋巴細胞白血病免疫表型分析

劉曉會，盧振霞，胡南均，白元松

（吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 血液腫瘤科，吉林 長春130033）

慢性淋巴細胞白血病（CLL）是一種單克隆性的小淋巴細胞低度惡性造血系統(tǒng)疾病，以外周血及骨髓中成熟的淋巴細胞增多為主要臨床特點，從2001年始，WHO分型定義CLL均為B細胞型，取消T細胞－CLL，將其歸為T幼稚淋巴細胞白血?。?］。CLL在我國相對少見，近年發(fā)病率有升高的趨勢［2］，本病發(fā)病年齡較晚，臨床進程個體差異較大，總生存期從數(shù)個月到十余年不等。而免疫表型的研究對CLL的診斷、與其它淋巴系統(tǒng)疾病的鑒別診斷及預后有重要意義，現(xiàn)將我院從2010年1月至2012年12月明確診斷的38例CLL患者的免疫表型特點進行回顧性分析，探討其與Moreau積分系統(tǒng)、臨床分期的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

38例患者均為2010年1月至2012年12月我院初診的CLL，其中男21例，女17例；年齡34－71歲，中位年齡56歲；Rai分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期10例，Ⅳ期6例?；颊呔醒Ｒ?guī)、外周血涂片、骨髓細胞形態(tài)學檢查等。所有患者診斷標準參照《血液病診斷及療效標準》［3］。CLL的評分依據(jù)Moreau等［4］提出的免疫表型積分系統(tǒng)（見表1）。

表1 CLL的免疫表型積分系統(tǒng)

1.2 試劑及儀器

單克隆抗體包括 CD5、CD23、CD22、CD20、FMC7、CD19、CD38、CD11C、κ輕鏈、λ輕鏈，均購自Becton Dickinson公司，流式細胞儀是Becton Dickinson的BD LSRFortessa型號，應用BD FACSDiva software進行分析。

1.3 抗原的檢測

治療前取肝素抗凝的新鮮骨髓（6h內），1 500 rpm離心5min，棄去上清，加入紅細胞裂解液，混勻，冰上裂解5min，加入1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液（PBS）終止裂解，1 500rpm離心5min，棄去上清，加入PBS重懸細胞，顯微鏡下計數(shù)有核細胞，取出適當體積的細胞懸液調整細胞數(shù)至（0.5－1）×106／ml，采用三色流式分析方案檢測細胞抗原，每管加入Fc受體阻斷劑，阻斷非特異性結合。后加不同組合的抗體，同時做同型對照，混勻，避光冰上孵育20min，上機檢測分析，每管獲取20000個細胞，抗原表達在淋巴細胞中≥20%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 相關抗原在CLL中的表達情況

38例患者均表達抗原CD19、HLA－DR，陽性率為100%；CD20、CD22、CD23陽性率均為97.3%，κ輕鏈陽性率52.6%，CD11C、FMC7、λ輕鏈的陽性率分別為26.3%、34.2%、26.3%，CD38陽性率為15.8%，無一例表達抗原CD10。見表2。按照Moreau積分系統(tǒng)計算（見表1），38例患者中31例積分≤3分，7例＞3分。

表2 38例CLL患者免疫表型特點

2.2 相關抗原表達與臨床分期的關系

在相關研究中已證實臨床分期的預后價值［5］。本研究結果表明CD5、FMC7、CD11C、κ輕鏈、λ輕鏈表達情況與臨床分期之間無明顯相關性（P＞0.05）。見表3。

表3 各免疫表型、輕鏈與臨床分期的關系

3 討論

慢性淋巴細胞白血病的診斷除了結合臨床癥狀、外周血涂片及骨髓象檢查外，還要結合免疫表型分析。細胞的免疫表型是在分化增殖的不同階段表達的不同抗原分子，而流式細胞術通過收集激光照射到細胞后散射光信號和熒光信號反應細胞的特征，是慢性淋巴細胞白血病診斷的重要依據(jù)之一。

CLL患者的免疫表型具有一定的特點，即為CD5＋的B細胞，同時伴有CD19、CD20、CD23的表達，不表達CD10，呈κ輕鏈或λ輕鏈型［6］。CD5是B細胞的一種重要表面抗原，其在CLL的意義在國內外進行大量的研究，國外報道CLL的CD5＋表達率超過90%［7］，但國內有報道CD5＋表達率為78.6%［8］，本研究中有33例患者（86.8%）為CD5陽性，有5例（13.2%）不表達CD5。

根據(jù)Moreau等提出的CLL積分系統(tǒng)，積分＞3分為典型的免疫表型，≤3分為非典型的免疫表型，本組患者中13.2%病例不表達CD5，34.2%病例表達FMC－7，84.2%病例為 CD22強陽性，31例患者積分≤3分。日本Tomomatsu等［9］也報道大部分CLL患者積分≤3分，韓國Jang等［10］報道56%（22／39）CLL患者積分≤3分，均為不典型的免疫表型。因CLL在亞洲國家發(fā)病率遠遠低于西方國家，缺乏大樣本臨床研究數(shù)據(jù)，Moreau評分系統(tǒng)是否存在人種差異有待擴大樣本量進一步證實。

本研究結果表明CD5、CD11C、FMC7、κ輕鏈、λ輕鏈與臨床分期無明顯相關性，但對CLL的預后預測價值仍需要進一步探討。吳玉潔［11］等對24例CLL患者的研究中發(fā)現(xiàn)CD38與臨床分期也無明顯相關性。Gentile等［12］發(fā)現(xiàn)CD38＋與CD38－的患者相比，男性多于女性，血紅蛋白及血小板顯著減少，淋巴細胞計數(shù)明顯增加，且PFS明顯縮短，對化療的反應差，病情進展快；而在年齡、乳酸脫氫酶水平、形態(tài)學及免疫學特征方面無明顯差異，CD38＋還是疾病侵襲性的一個重要標志，無論患者的臨床分期如何，CD38陽性表達均是CLL的獨立預后因素［13］，而其他抗原表達所提供的預后預測價值尚需進一步研究探討。

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