Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的表達及臨床意義

陶雪梅，張國梁，鮑文漪

（1.天津醫(yī)科大學第一中心臨床學院，天津300192；2.蘇州大學附屬兒童醫(yī)院 消化科，3.天津醫(yī)科大學第一中心醫(yī)院 消化內(nèi)科，天津300192）

胃食管交界處腺癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類健康。因為胃食管交界處腺癌所處的特殊部位，其早期癥狀輕微或不明顯，患者就診時腫瘤多已進入中晚期，所以治療效果較差。近年來由于診斷技術(shù)的提升，胃食管交界處腺癌的檢出率也明顯提高，人們對其發(fā)生機制的研究也越來越引起重視。Annexin－A1（膜聯(lián)蛋白－A1）屬于鈣磷脂結(jié)合蛋白家族（annexins）的重要成員之一，鈣磷脂結(jié)合蛋白家族廣泛參與炎癥反應(yīng)、信號傳導(dǎo)和凋亡等生物學過程［1］，且相關(guān)研究表明其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中也起作用，能夠調(diào)控腫瘤的增殖與凋亡，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，但是其在不同的組織中表達不一致，具有組織特異性。目前國內(nèi)外對于Annexin－A1在胃食管交界處腺癌組織中的檢測報道較少，本研究采用免疫組織化學S－P法檢測Annexin－A1蛋白在胃食管交界處腺癌組織中的表達情況，分析其在胃食管交界處腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為胃食管交界處腺癌早期診斷及臨床治療提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取天津市第一中心醫(yī)院2009年1月至2011年12月收治的手術(shù)切除及內(nèi)鏡活檢的經(jīng)臨床病理確診的胃食管交界處腺癌組織標本66例，上皮內(nèi)瘤變組織20例，正常黏膜組織20例，所有標本均為病理科存檔蠟塊。所有病例術(shù)前均無化療、放療及免疫治療史。賁門腺癌患者中，男52例，女14例；年齡38－87歲，中位年齡72歲；臨床病理分期參照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）新頒布的胃癌TNM分期標準：其中Ⅰ－Ⅱ期19例，Ⅲ－Ⅳ期47例；組織分化程度：其中高中分化36例，低分化30例；浸潤深度：侵及漿膜13例，未及漿膜53例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例；有遠處轉(zhuǎn)移18例，無遠處轉(zhuǎn)移48例。

1.2 方法 Annexin－A1鼠抗人單克隆抗體工作液購自北京中原公司，工作濃度為1∶100；SP試劑盒及DAB顯色劑購自福州邁新生物有限公司；實驗參照試劑盒說明書進行，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組織化學結(jié)果判定 Annexin－A1陽性細胞為棕黃色顆粒，位于細胞質(zhì)內(nèi)或細胞膜，基質(zhì)內(nèi)少量炎性細胞、淋巴細胞。染色陽性見圖1，染色陽性結(jié)果判定采用雙盲法，根據(jù)陽性細胞所占5個以上高倍鏡視野比例計數(shù)分為4類：5%－25%為1分；26%－50%為2分；51%－75%為3分；＞75%為4分。染色強度分類：淺黃色為1分；黃或深黃色為2分；褐或棕褐色為3分。兩者計分相乘大于3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理，率的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman法，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中Annexin－A1蛋白的表達 結(jié)果顯示：Annexin－A1蛋白在胃食管交界處正常黏膜組織、上皮內(nèi)瘤變組織及腺癌組織中的陽性表達率依次增高，差異具有顯著意義（P＜0.05）（見表1）。

表1 Annexin－A1蛋白在胃食管交界處不同組織中的表達

圖1 A 胃食管交界處腺癌Annexin－A1蛋白陽性表達（SP×200）圖1B 胃食管交界處上皮內(nèi)瘤變Annexin－A1蛋白陽性表達（SP×200）圖1C 胃食管交界處正常黏膜Annexin－A1蛋白陰性表達（SP×200）

2.2 Annexin－A1蛋白的表達與胃食管交界處腺癌臨床病理特征的關(guān)系 經(jīng)統(tǒng)計學處理，Annexin－A1在胃食管交界處腺癌的陽性表達率與腫瘤臨床病理分期、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及浸潤深度關(guān)系較大。在腫瘤臨床病理分期晚、組織分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，未及漿膜者表達較高，而在臨床病理分期早、組織分化程度高、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜者表達較低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；但與年齡、性別及遠處轉(zhuǎn)移無明顯關(guān)系（P＞0.05）（見表2）。

3 討論

Annexin－A1是Annexins超家族的一個成員，具有Annexins超家族所共有的中心結(jié)構(gòu)域和N端序列，是磷脂酶A2（c－PLA2）的抑制蛋白，也是表皮生長因子受體（EGFR）激酶和蛋白酶C的底物［2］，參與抗增殖、調(diào)節(jié)分化、促進凋亡等多種細胞生理過程［3］，其異常表達可造成細胞生長調(diào)控紊亂，從而影響腫瘤的形成［4］。

表2 胃食管交界處腺癌組織中Annexin－A1蛋白的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

近年來的研究表明Annexin－A1在正常組織和腫瘤組織均有表達，且其在腫瘤中的表達具有組織特異性［5］，例如外周血白細胞、結(jié)腸癌和胰腺癌中Annexin－A1表達增高，而在食管鱗癌、前列腺癌、頭頸部鱗癌中表達下調(diào)［4］。一般情況下表達程度高的組織，發(fā)生惡變后表現(xiàn)為不同程度的缺失；相反，通常不表達或表達低的組織惡變后卻出現(xiàn)表達上調(diào)。在本研究中我們采用免疫組織化學方法針對Annexin－A1在胃食管交界處不同病變組織中的表達變化進行了初步研究，探討其在胃食管交界處組織中的表達情況。實驗結(jié)果顯示Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的陽性表達率較正常黏膜及上皮內(nèi)瘤變組織的高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），這與Yu G 等［6］在胃癌和譚等［7］在食管鱗癌中的研究結(jié)果不一致，提示胃食管交界處腺癌有其自己特殊的致癌機制，其發(fā)生機制有別于胃癌和食管癌，同時Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的過表達也體現(xiàn)了Annexin－A1在胃食管交界處組織表達與人體其他組織相比的特異性，這對于認識胃食管交界處腺癌提供了一定的線索。

此外，本實驗中Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的異常表達與Su N等［8］在結(jié)腸癌中的研究結(jié)果較一致，提示Annexin－A1的高表達可能參與了胃食管交界處腺癌的惡變過程，Annexin－A1的在蛋白水平的表達改變可能是癌變過程中的先于形態(tài)學異常的早期變化，對胃食管交界處腺癌的早期診斷可能具有一定的參考價值。我們研究發(fā)現(xiàn)Annexin－A1蛋白在正常黏膜組織，上皮內(nèi)瘤變及腺癌組織中的表達呈現(xiàn)逐漸遞增的趨勢，提示Annexin－A1在胃食管交界處正常黏膜—上皮內(nèi)瘤變—腺癌組織軸中的表達發(fā)生了不同程度的變化，更直觀的比較了同一個體腫瘤的進展，從分子水平上體現(xiàn)了生物學行為逐漸進展的過程，這對于認識胃食管交界處腺癌的形成及有效預(yù)防起到一定的啟示作用。

Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的陽性表達與腫瘤臨床病理分期、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及浸潤深度關(guān)系較大。Annexin－A1在腫瘤臨床病理分期晚、組織分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未及漿膜者表達較高，而在臨床病理分期早、組織分化程度高、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜者表達較低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；這與Liu等［9］在肺腺癌中報道的較一致，提示Annexin－A1的表達改變可能參與了胃食管交界處腺癌的浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為。關(guān)于Annexin－A1參與腫瘤轉(zhuǎn)移及侵襲能力的機制，有研究報道［10］Annexin－A1可能通過甲酰肽受體起作用，組織中過表達的Annexin－A1激活甲酰肽受體，進而引起細胞內(nèi)一系列信號途徑的傳遞，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生及細胞侵襲。因此在胃食管交界處腺癌中檢測Annexin－A1的表達有助于胃食管交界處癌惡性程度的評估及預(yù)測腫瘤發(fā)展趨勢，但是Annexin－A1的表達與年齡、性別及有無遠處轉(zhuǎn)移無關(guān)（P＞0.05），提示腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移可能有其他原因參與，尚有待探討。

綜上所述，Annexin－A1的高表達可能在胃食管交界處腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著一定的作用，檢測其表達對胃食管交界處腺癌的早期診斷和評估預(yù)后有一定的參考價值。

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