木犀草素對(duì)高脂血癥大鼠血脂和一氧化氮水平的影響

馬寶慧，高永勝，潘桂蘭，陳曉東，呂 軍

(1包頭醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，內(nèi)蒙古包頭014060;2包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院)

木犀草素化學(xué)名 3'，4'，5，7-四羥基黃酮，是一種弱酸性四羥基黃酮類(lèi)化合物，在植物界分布廣泛，存在于紫蘇、金銀花、菊花、四方蒿、忍冬花、芹菜、洋白菜、菜花、胡蘿卜等許多天然藥物和蔬菜、水果中，具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等功效［1］。木犀草素多用于抗炎、抗腫瘤等方面，關(guān)于木犀草素對(duì)高脂血癥大鼠血脂與血漿一氧化氮(NO)水平的影響及其關(guān)系鮮有報(bào)道。我們于2010年4月～2011年10月進(jìn)行本研究，以高脂飲食建立高脂血癥大鼠模型，探討木犀草素對(duì)大鼠血漿NO水平及血脂的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 Wistar大鼠24只，雄性，體質(zhì)量120～202 g、平均153 g，購(gòu)自?xún)?nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。高脂飼料由81.3%基礎(chǔ)飼料、0.5%膽鹽、10%豬油、3%膽固醇、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖組成。木犀草素(分析純，純度99%，陜西慧科植物開(kāi)發(fā)有限公司)溶于 DMSO(含量 ＜0.1%)，去離子水稀釋;血漿NO、一氧化氮合酶(NOS)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 造模及治療 動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，隨機(jī)分為3組，分別為空白對(duì)照組(C組)、高脂血癥模型組(H組)、木犀草素治療組(L組)，每組8只，自由飲水。C組飼喂基礎(chǔ)飼料，H組和L組飼喂高脂飼料。高脂血癥模型成功建立(30 d)后，L組每天用木犀草素溶液灌胃(5 mg/100 g)，C組和H組每天以同體積去離子水灌胃。治療時(shí)間為30 d。

1.2.2 血漿指標(biāo)檢測(cè) 木犀草素治療30 d后，大鼠禁食12 h后眶靜脈采血，分離血漿，酶法檢測(cè)血漿NOS和甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平。NO采用硝酸還原酶法測(cè)定。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)采用±s表示。P≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高脂飼料飼喂對(duì)大鼠血漿TC、TG水平的影響見(jiàn)表1。結(jié)果表明高脂血癥大鼠模型建立成功。

表1 高脂飼料飼喂1個(gè)月后各組大鼠血漿TC、TG 測(cè)定結(jié)果(mmol/L，±s)

表1 高脂飼料飼喂1個(gè)月后各組大鼠血漿TC、TG 測(cè)定結(jié)果(mmol/L，±s)

注:與 C 組比較，*P ＜0.05

組別 n TG TC C組8 0.56 ±0.11 1.68 ±0.12 H 組 8 0.96 ±0.10* 3.95 ±0.54*L 組 8 0.94 ±0.10* 3.93 ±0.23*

2.2 木犀草素對(duì)大鼠血脂代謝指標(biāo)的影響 見(jiàn)表2。

2.3 木犀草素對(duì)大鼠血漿NO水平及NOS活力的影響 見(jiàn)表3。

表2 木犀草素治療后各組大鼠血脂代謝指標(biāo)測(cè)定結(jié)果(±s)

表2 木犀草素治療后各組大鼠血脂代謝指標(biāo)測(cè)定結(jié)果(±s)

注:與 C 組比較，*P ＜0.05;與 H 組比較，△P ＜0.05

組別 n TG(mmol/L) TC(mmol/L) HDL(mmol/L) LDL(mmol/L)TG/HDL LDL/HDL C 組 8 0.69 ±0.05 1.76 ±0.14 1.29 ±0.09 0.26 ±0.06 0.53 ±0.04 0.20 ±0.04 H 組 8 1.12 ±0.13* 4.06 ±0.60* 0.85 ±0.11* 2.87 ±0.46* 1.33 ±0.10* 3.43 ±0.78*L 組 8 0.73 ±0.08△ 2.32 ±0.39△ 1.22 ±0.07△ 1.05 ±0.50△ 0.60 ±0.08△ 0.85 ±0.41△

表3 木犀草素對(duì)各組大鼠血漿NO水平及NOS活力的影響(±s)

表3 木犀草素對(duì)各組大鼠血漿NO水平及NOS活力的影響(±s)

注:與 C 組比較，*P ＜0.05;與 H 組比較，△P ＜0.05

組別 n NO(μmol/L) NOS(U/mL)C組8 10.89 ±2.18 5.73 ±0.43 H 組 8 17.34 ±2.72* 6.89 ±0.31*L 組 8 12.77 ±1.86△ 5.97 ±0.42△

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用加喂膽固醇+豬油并輔以豬膽鹽的高脂飼料建立高脂血癥大鼠模型，檢測(cè)血漿TC、TG含量顯示30 d即造模成功。木犀草素是一種黃酮類(lèi)物質(zhì)，已被國(guó)外確認(rèn)為一種法定的食品色素，其作為食品添加劑是安全的。本研究旨在分析木犀草素對(duì)高脂血癥的治療作用。

血漿LDL是轉(zhuǎn)運(yùn)肝合成的內(nèi)源性膽固醇的主要形式，其濃度升高被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化形成的危險(xiǎn)因子。HDL通過(guò)三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)子A1(ABCA1)和三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)子G1(ABCG1)及SB-RI受體將外周細(xì)胞特別是巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞胞膜上的膽固醇轉(zhuǎn)移至肝臟［2］，有利于維持外周細(xì)胞特別是動(dòng)脈壁細(xì)胞的膽固醇平衡，從而防止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。冠心病、代謝綜合征和糖尿病患者體內(nèi)HDL的促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的生物學(xué)活性遭到破壞，表現(xiàn)為不同程度的促進(jìn)膽固醇外流能力下降。LDL/HDL是頸動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［2］。目前多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)，TG/HDL水平與冠心病的發(fā)病獨(dú)立相關(guān)［3］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)模型動(dòng)物采用木犀草素治療后，可使血漿LDL含量降低，HDL含量升高，LDL/HDL降低;木犀草素治療組血漿TG、TC含量及TG/HDL均顯著低于模型組。這些結(jié)果提示木犀草素通過(guò)降低LDL含量和升高HDL含量從而改善血脂代謝、降低動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)。

血脂升高使機(jī)體自由基產(chǎn)生和清除平衡被破壞，大量的氧自由基可減弱脂蛋白脂酶的活性、升高TG和降低HDL，進(jìn)一步加重脂質(zhì)代謝紊亂［4］。本研究發(fā)現(xiàn)高脂血癥模型大鼠血漿NO含量顯著增加。NO可與超氧陰離子反應(yīng)，生成一種強(qiáng)氧化劑——過(guò)氧化亞硝酸(ONOOH)，誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。正常動(dòng)物血漿中含有生理量的NO，在體內(nèi)廣泛參與多種生理過(guò)程。但在受到外界刺激時(shí)，體內(nèi)多種細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等可異常表達(dá) NOS，產(chǎn)生比生理量多得多的NO［5］，且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞造成損害。本研究也發(fā)現(xiàn)高脂血癥動(dòng)物血漿NOS活性顯著升高，因此推測(cè)高脂可能刺激細(xì)胞異常表達(dá)NOS，產(chǎn)生大量NO，從而引起血漿NO含量明顯增高。這與多數(shù)研究者的研究結(jié)果一致［6，7］。在木犀草素灌胃30 d后實(shí)驗(yàn)大鼠血漿NOS活性下降，提示木犀草素可以抑制NOS活性從而降低血漿NO含量。

綜上所述，體脂過(guò)高刺激細(xì)胞NOS異常表達(dá)，產(chǎn)生大量NO，造成細(xì)胞損傷。木犀草素可降低血脂以抑制NOS活性，降低NO等自由基含量，進(jìn)而抑制脂質(zhì)過(guò)氧化。

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