酸脂清制劑對(duì)高尿酸并高脂血癥大鼠肝臟黃嘌呤氧化酶的影響

摘 要：目的：探討酸脂清對(duì)高尿酸并高脂血癥大鼠肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）的影響以進(jìn)一步研究其降尿酸的機(jī)理。方法：采用SD雄性大鼠，灌服脂肪乳劑及高嘌呤液建立起高尿酸并高脂血癥的大鼠模型，用酸脂清治療模型大鼠，并設(shè)立別嘌呤醇及非諾貝特對(duì)照組以及空白和模型組，觀察用藥前后肝臟黃嘌呤氧化酶的變化情況。結(jié)果：酸脂清治療組的黃嘌呤氧化酶水平較模型組及非諾貝特組無明顯變化（P>0.05），而別嘌醇組明顯下降（P<0.001）。結(jié)論：酸脂清降尿酸的療效較別嘌醇好，其降尿酸機(jī)理可能主要通過促進(jìn)尿酸排泄來實(shí)現(xiàn)，臨床適用性好。

關(guān)鍵詞：酸脂清制劑；高尿酸血癥；高脂血癥；黃嘌呤氧化酶

中圖分類號(hào)：R969

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2013）05-0058-02

隨著人們生活水平的提高，動(dòng)物性食物的攝入增多，痛風(fēng)發(fā)病率顯著提高，一般認(rèn)為該病發(fā)病原因與高尿酸血癥、遺傳因素、環(huán)境因素、嘌呤合成與尿酸排泄障礙等密切相關(guān)；體重指數(shù)和高血脂及高血壓是痛風(fēng)的危險(xiǎn)因素。

痛風(fēng)目前無法根治，現(xiàn)行治療藥物嚴(yán)重的毒副反應(yīng)限制了臨床應(yīng)用。從近年來發(fā)表的文章看，國內(nèi)學(xué)者在前人基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)，對(duì)中醫(yī)藥防治痛風(fēng)進(jìn)行了大量的探索，取得了可喜的成績，其中關(guān)于復(fù)方、專方治療研究、單味藥及外治方面的研究報(bào)道為最多，但研究的廣度和深度還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。眾多研究顯示中醫(yī)藥治療痛風(fēng)有療效好、毒副作用小、臨床適用性好等優(yōu)點(diǎn)，并有西藥不可替代的優(yōu)勢(shì)。

文紹敦教授臨床治療痛風(fēng)多年，對(duì)痛風(fēng)病有深入研究，認(rèn)為痛風(fēng)病的發(fā)生本為脾腎兩虧，濕濁痰熱凝滯為標(biāo)，其主要病因是嗜食膏粱厚味，而致痰濕內(nèi)蘊(yùn)、濕濁痰阻、氣血運(yùn)行受阻；脾腎二臟功能紊亂，脾失健運(yùn)，升清降濁失常造成。痰濁濕熱瘀阻是本病的關(guān)鍵。對(duì)于痰濁阻滯所致的高尿酸伴高脂血癥的痛風(fēng)病，導(dǎo)師組方酸脂清，以清熱利濕、化瘀祛濁為法，取得了良好的臨床效果。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)酸脂清的降血尿酸、降血脂、改善腎功能的療效。本實(shí)驗(yàn)采用酸脂清治療高尿酸并高脂血癥模型大鼠，進(jìn)一步觀察以探討其降尿酸的機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SD大鼠60只，雄性，體重約180g，一級(jí)動(dòng)物，由青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第02號(hào)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 黃嘌呤氧化酶（XOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)：20040107），腺嘌呤（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：F20040213），膽固醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：F20040310）

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 酸脂清膠囊：由青海醫(yī)學(xué)院中藥實(shí)驗(yàn)室制備，別嘌呤醇：由上海延安萬象藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：國藥準(zhǔn)字H50020455，鹽酸乙胺丁醇：由沈陽紅旗制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：國藥準(zhǔn)字H21022349

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 全自動(dòng)血生化儀（康寧公司生產(chǎn)）CSYF恒溫箱（太倉市科教器材廠），加樣器（GERSON），電子分析天平（DF-110型，常熟衡器工業(yè)公司），721分光光度計(jì)（浙江寧波新儀儀器廠）

2 方法

2.1 試劑配制

2.1.1 酸脂清膠囊 由青海醫(yī)學(xué)院中藥制劑室提供

2.1.2 高脂乳劑配制 蛋黃粉10 g，膽固醇10 g，豬油20 g，吐溫-80 20 mL倒入巖缽中研成糊狀，然后加熱融化混合，加蒸餾水至100 mL，冰箱4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.3 高嘌呤液配制 按腺嘌呤120 mg/（kg·d）及乙胺丁醇250 mg/（kg·d）的比例溶入蒸餾水，冰箱4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.4 酸脂清、別嘌醇、非諾貝特 按所需濃度配制成混懸液（用量均為臨床人用藥量的20倍），冰箱4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 分組與處理

2.2.1 造模 60只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（簡(jiǎn)稱空白組，10只）及造模組（50只），適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，自然照明，室溫（22±2）℃，7 天后造模組每天上午灌胃配制的高脂乳劑3mL，下午灌胃高嘌呤液體2 mL，普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水，第21天2組隨機(jī)各取10只斷頭取血測(cè)血尿酸，血脂水平，如有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，確定造模成功。

2.2.2 給藥方法 造模組剩余大鼠再隨機(jī)分為中藥組10只、別嘌呤醇組10只、非諾貝特組10只、模型對(duì)照組10只（簡(jiǎn)稱模型組），給普通飼料喂養(yǎng)，分別灌服酸脂清溶液1.44 g/（kg·d）、別嘌醇溶液9 mg/（kg·d）、非諾貝特溶液22.5 mg/（kg·d）、生理鹽水各3 mL（中西藥藥量均為臨床患者用藥量20倍），第10天實(shí)驗(yàn)結(jié)束：首先斷頭取血準(zhǔn)備測(cè)血尿酸，甘油三酯及膽固醇水平；解剖大鼠，取肝組織剪碎，勻漿器勻漿，比色法測(cè)定XOD水平[1～2]。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 一般情況 主要觀察大鼠體毛、活動(dòng)、飲食、排便、死亡等情況。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 斷頭取血，離心機(jī)3000轉(zhuǎn)/分離心，取上清液，測(cè)血尿酸值（SUA）、血總膽固醇值（TC）、血甘油三酯值（TG）、均由康寧公司生產(chǎn)的560型號(hào)的全自動(dòng)血生化儀測(cè)得。

2.3.3 解剖大鼠，取肝組織剪碎，制作組織勻漿。

2.4 檢測(cè)方法

2.4.1 組織勻漿的制備 取組織塊1 g在冰冷的鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入10 mL燒杯中，取9倍體積的0.86%冷生理鹽水置于燒杯中，剪碎組織塊，用組織搗碎機(jī)10000～15000 r/min上下研磨，制成10%的勻漿（勻漿時(shí)間10 s/次，間隙30 s，連續(xù)3～5次，在冰水中進(jìn)行），最后將制備的勻漿1/2用低溫低速離心機(jī)3000 r/min左右離心10～15 min，取上清液，勻漿及勻漿上清液0℃以下保存待測(cè)。

2.4.2 黃嘌呤氧化酶（XOD）的測(cè)定 取空白及測(cè)定管，依次滴入顯色劑，37℃水浴20 min，530 nm處，1.0 cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測(cè)各管吸光度OD值。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 所有計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ±s ）表示，組間采用t檢驗(yàn)和方差分析，顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異檢驗(yàn)采用q檢驗(yàn)。資料統(tǒng)計(jì)采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件。

3 結(jié)果與分析

3.1 大鼠一般情況 造模期間各組大鼠皮毛光澤色白，精神佳，活潑好動(dòng)，尤以造模組體重增加迅速；用藥后中藥組、非諾貝特組及模型組大鼠活動(dòng)、飲水與平素?zé)o明顯差異；中藥組大鼠體重逐漸下降，別嘌醇組大鼠皮毛干枯發(fā)黃，倦怠懶動(dòng)，進(jìn)食量減少，4只體重下降，6只體重增長緩慢。

3.2 治療前后各指標(biāo)變化

3.2.1 治療前后各組大鼠血尿酸，血脂的變化情況 治療前后對(duì)比中藥組的UA水平較其他3組均顯著下降（P<0.001），TG及TC水平較模型組及別嘌醇組下降（P<0.001）而與非諾貝特組相當(dāng)（P>0.05）。見表1。

2.2 治療前后各組XOD的變化情況 治療前后別嘌醇組的XOD的水平較模型組及中藥組明顯下降，其余組較模型組變化不大。見表2。

4 討論

中醫(yī)“痛風(fēng)”一詞由金元時(shí)期朱丹溪首先提出，中醫(yī)認(rèn)為痛風(fēng)屬中醫(yī)痹癥范圍?？勺匪葜痢端貑枴け哉摗罚骸帮L(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹也?！薄夺t(yī)學(xué)入門·痛風(fēng)》指出：“久則手足蜷攣，甚則身體塊瘰”。丹溪《格致余論》一書內(nèi)有《痛風(fēng)論》一篇云：“彼痛風(fēng)者，大率因血受熱，已自沸騰，其后或涉冷水，或立濕地，或扇取涼，或臥當(dāng)風(fēng)，寒涼外搏，熱血得寒，污濁凝滯，所以作痛，夜則痛甚，行于陰也”，明確指出本病由于血熱，又受寒涼，熱血得寒而污濁凝滯；其二，之所以夜則痛，是由于行于夜之故也，闡述了本病的病因病機(jī)?，F(xiàn)代醫(yī)家對(duì)痛風(fēng)的認(rèn)識(shí)有了進(jìn)一步發(fā)展，但大多數(shù)主張濁毒內(nèi)伏血脈，不得泄利，損耗氣血。

XOD是尿酸合成的最終酶，經(jīng)過這個(gè)反應(yīng)產(chǎn)生的過量的尿酸會(huì)引起高尿酸血癥，隨之產(chǎn)生的H2O2對(duì)人體的細(xì)胞也有嚴(yán)重的損害作用，因此學(xué)者試圖在醫(yī)學(xué)上尋找XOD的抑制劑和能降低XOD的水平的藥物來降尿酸并保護(hù)人體細(xì)胞。目前只有別嘌醇是XOD的抑制劑，它雖能取得臨床療效，但因其副作用有胃腸道刺激、發(fā)熱、肝腎損害、還可抑制骨髓，因此，很難作為痛風(fēng)發(fā)作的一種長期、安全的用藥。本實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，別嘌醇組用藥后，XOD活性顯著下降，證實(shí)了其作用機(jī)理，而酸脂清治療組XOD水平并無明顯下降，與模型組無對(duì)照差異，但酸脂清降尿酸的效果好于別嘌醇，這可能與尿酸排瀉減少引起80%的高尿酸血癥的原因吻合。可見其降尿酸的機(jī)制可能不是通過降低XOD水平，減少尿酸生成來實(shí)現(xiàn)，而是通過促進(jìn)尿酸排瀉達(dá)到效果。

酸脂清由大黃、土茯苓、姜黃組成，該方具有清熱利濕、化濕祛濁之功效，方中大黃又名將軍，性寒味苦，具有瀉熱通暢、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)之效。姜黃又名溫郁金，性溫味辛苦，歸肝脾經(jīng)，具有破血行氣，通絡(luò)止痛之功效。土茯苓，甘、淡、平，有利濕、解毒、利關(guān)節(jié)之功效。綜觀全方，治以苦寒、監(jiān)以辛溫；開郁行氣，清熱利濕，化瘀祛濁?，F(xiàn)代藥理研究表明大黃的主要成分是蒽醌衍生物及二蒽酮類衍生物，其有效成分為番瀉苷及單核蒽醌甙類，瀉下可清除攝入過多的嘌呤飲食，預(yù)防痛風(fēng)發(fā)作；大黃素對(duì)黃嘌呤氧化酶有較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用，可抑制黃嘌呤氧化酶的活力而影響尿酸的形成。有報(bào)道其降血甘油三酯的有效率達(dá)78%，降血膽固醇的有效率達(dá)84%[4]。土茯苓主要含皂苷、鞣質(zhì)、樹脂等，能增加尿酸鹽排泄[5]。姜黃中的酚性色素，一脫甲氧基姜黃素和二脫甲氧基姜黃素的60%是主要降脂部位[6]，其藥理作用有[7]降低血Tg、TC、LDL-C，升高HDL-C的作用，姜黃素及揮發(fā)油能雙重抑制花生四烯酸途徑-環(huán)氧化酶、脂氧化酶而具有非甾體類抗炎活性，其對(duì)溶酶體膜有較強(qiáng)的穩(wěn)定作用，使機(jī)體組織對(duì)內(nèi)源性皮質(zhì)激素類物質(zhì)敏感、增加腎上腺甾體物質(zhì)產(chǎn)生，抑制中性粒細(xì)胞效應(yīng)，有較強(qiáng)的抗炎性能，對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有顯著的治療作用。

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（收稿日期：2013-02-19）