女貞葉醇提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究

童東錫?唐坤?曾頌?劉新云?黃革麗?潘玨

[摘要] 目的 研究女貞葉醇提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用。 方法 選用昆明小鼠和大鼠，每個實驗隨機分5組，生理鹽水組、陽性對照組、女貞葉醇提取物低、中、高劑量組（小鼠10、20、30 g/kg，大鼠5、10、15 g/kg），分別采用小鼠醋酸致痛、熱板致痛，二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠誘導大鼠足趾腫脹。觀察女貞葉醇提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用。 結果 女貞葉醇提取物高劑量能顯著提高小鼠痛閥值（P<0.01），并能抑制小鼠耳廓和大鼠足趾腫脹（P<0.05），能減少角叉菜膠所致大鼠炎性滲出液中前列腺素E2的含量。 結論 女貞葉醇提物具有一定抗炎鎮(zhèn)痛作用。

[關鍵詞] 女貞葉；醇提取物；抗炎；鎮(zhèn)痛

[中圖分類號] R971+.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）06-26-03

女貞葉是木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的葉，具有消腫止痛、祛瘀散結、生肌及收斂防腐之功效。主要用于治療頭目昏痛，風熱赤眼，瘡腫潰爛，燙傷及口腔炎等疾病[1]。女貞葉在生藥學、化學成分及臨床應用方面均有報道[2]，到目前為止，未見有關其抗炎鎮(zhèn)痛方面的藥理研究。本項目以女貞子葉作為研究對象，觀察其醇提物的抗炎鎮(zhèn)痛作用，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV2550型紫外分光光度計（日本島津公司），循環(huán)水真空泵（SHZ-Ⅲ），旋轉蒸發(fā)器（RE-52AA）（上海亞榮生化儀器廠），HH-W600型數(shù)顯三用恒溫水箱（金壇市科析儀器有限公司），離心機（美國雅培），BT2245型電子公析天平（上海精科天平）。

1.2 試藥

女貞葉自采于桂林市郊，藥材經桂林醫(yī)學院藥學系天然藥物化學教研室唐愛蓮副教授鑒定為木犀科植物女貞

Ligustrum lucidum Ait.的葉。將女貞葉干燥后粉碎為粗粉，用6倍75%乙醇于80℃水浴中回流提取2次，減壓回收乙醇濃縮成1︰1藥液待用[3]；吲哚美辛腸溶片（廣東華南藥業(yè)集團有限公司，批號：20120528）；羅通定片（桂林裕民制藥有限公司，批號：20120402）。

1.3 動物

SPF級昆明種小鼠150只，體重（19±2）g；雌雄各半SPF級SD大鼠25只，體重（150±16）g，購自桂林醫(yī)學院實驗動物中心，實驗動物使用許可證號SCXK（桂）2007-0001。

2 方法

2.1 對小鼠熱板反應的影響[4]

篩選合格的小鼠50只，隨機分為5組，即生理鹽水組，陽性組（羅痛定片0.02 g/kg），女貞葉醇提取物3組（按生藥量計10、20、30 g/kg），ig給藥，每天1次，生理鹽水組ig給同等容積的生理鹽水，連續(xù)7 d，于末次給藥后，30、60、120 min分別測定小鼠痛閥值。

2.2 對小鼠醋酸致扭體反應的影響[5]

取小鼠50只，分組給藥按“2.1”項下方法，末次給藥30 min后每只小鼠ip 0.6%醋酸溶液0.1 mL/10 g，觀察小鼠15 min內出現(xiàn)扭體的次數(shù)，并按下公式計算扭體反應抑制率。扭體抑制率=（生理鹽水組平均扭體數(shù)-給藥組平均扭體數(shù)）/生理鹽水組平均扭體數(shù)×100%。

2.3 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

取小鼠50只，♀♂各半，隨機分為5組，對照組（生理鹽水20 mL/kg）陽性組（吲哚美辛腸溶片20 mg/kg）和女貞葉醇提取物3組（10、20、30 g/kg），ig給藥，連續(xù)7 d，末次給藥后60 min，右側耳廓正反面均涂抹二甲苯0.05 mL，左耳涂抹等量生理鹽水對照，30 min后斷頸處死，沿耳廓基線剪下小鼠兩耳，打下左右耳對稱部位耳片并稱量。按下公式計算腫脹度（mg）及腫脹抑制率。

腫脹度（mg）=右耳片（mg）-左耳片質量（mg）。

腫脹抑制率（%）=（生理鹽水組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/生理鹽水組平均腫脹度×100%。

2.4 對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹及炎性滲出液中的前列腺素PGE2含量的影響[6]

取大鼠25只，隨機分為5組，即生理鹽水組，陽性組（吲哚美辛腸溶片0.015 g/kg），女貞葉醇提取物3組（按生藥量計5、10、15 g/kg），ig給藥，連續(xù)4 d，末次給藥后用毛細管放大法測量右后足容積，并標出測定記號線，然后在每只大鼠右后足踞皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1 mL，致炎后，每隔1 h測1次右后足趾容積，連續(xù)4次，并按下公式計算腫脹率。斷頸處死大鼠，按標記線剪下右后足稱重并剪碎，用4 mL生理鹽水和1 mL甲醇浸泡10 h，4500 r/min離心3 min，取上清液0.6 mL加0.5 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液2 mL，在50℃水溶中異構化20 min，加甲醇至10 mL，在278 nm波長處測吸光度（A），以每1 g炎性組織相當?shù)腁值表示PGE2含量（A/g足重）。

腫脹率（%）=（致炎后足容積-致炎前足容積）/致炎前足容積×100%。

2.5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析運用EXCEL軟件的數(shù)據(jù)分析功能，計量資料用（）表示，統(tǒng)計采用組間對照進行t檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 對小鼠熱板反應的影響

與生理鹽水相比，女貞葉提取物低、中劑量組沒有鎮(zhèn)痛作用，高劑量組小鼠在3個測定時段痛閾值差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01），其中在120 min時，鎮(zhèn)痛作用最明顯，見表1。

3.2 對小鼠醋酸扭體反應的影響

與生理鹽水組相比女貞葉提取物低劑量組小鼠扭體次數(shù)有所減少，但不明顯，女貞葉提取物中、高劑量組小鼠扭體次數(shù)差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。扭體抑制率分別為27.0%、49.5%，提示女貞葉提取物對小鼠因醋酸刺激引起的疼痛有一定的鎮(zhèn)痛作用。見表2。

3.3 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

女貞葉低、中劑量組小鼠耳廓腫脹與生理鹽水組比較差別不明顯，高劑量組小鼠耳廓腫脹差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），耳廓腫脹抑制率14.67%，見表3。

3.4 對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹及炎性滲出液中前的PGE2含量的影響

與生理鹽水組比較，女貞葉醇提取物低、中劑量組對大鼠足趾腫脹沒有明顯抑制作用，而高劑量組在180～240 min內對大鼠足趾腫脹有抑制作用（P<0.05），提示女貞葉醇提取物對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的抑制作用時間較長，見表4。與生理鹽水組比較，女貞葉醇提取物高劑量組大鼠角叉菜膠炎性滲出液中PGE2含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而低、中劑量組大鼠炎性滲出液中PGE2變化不明顯，見表5。

4 討論

女貞葉微苦、性平無毒，具有消炎消腫、祛瘀散結、生肌

止痛及收斂防腐之功效。故推測女貞葉有抗炎鎮(zhèn)痛作用。本實驗運用扭體法和熱板法研究女貞葉醇提取物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用，結果顯示女貞葉醇提取物對醋酸引起的疼痛有抑制作用。并呈量效關系。而熱板實驗顯示，女貞葉醇提取物低、中劑量組無鎮(zhèn)痛作用，高劑量組有明顯的鎮(zhèn)痛作用。通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹、角叉菜膠致大鼠足趾腫脹實驗研究表明。

女貞葉醇提取物高劑量對小鼠耳廓和大鼠足趾腫脹有一定抑制作用，并能減少大鼠炎性足滲出液中PGE2的含量，提示女貞葉醇提取物抗炎作用可能與抑制炎性部位PGE2的生成有關。女貞葉含有多種化學成分，醇提物中有熊果酸、齊墩果酸、丁香甙、甘露醇、大波菊甙等，具有廣泛的生物活性，其中熊果酸具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、安定和降溫等作用。本研究結果與女貞葉消炎、消腫、止痛功效具有一致性，綜上所述，女貞葉醇提取物有抗炎鎮(zhèn)痛作用。

[參考文獻]

[1] 中藥大辭典編委會.中藥大辭典[M].上海：上海科學技術出版社，1985：239.

[2] 陸林杰.女貞葉的研究開發(fā)利用及前景[J].中華西醫(yī)雜志，2001，2（16）：1495.

[3] 石靜，徐云玲，聶晶.女貞葉三萜類化學成分研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23（6）：1568.

[4] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：347，350.

[5] 陳萍，王愛武，王福文.口潰寧顆粒對小鼠的抗炎和鎮(zhèn)痛作用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2012，32（1）：26.

[6] 秦貽強，李江，蔡小玲.紅魚眼醇提物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究[J].中國藥房，2011，22（43）：4046.

（收稿日期：2013-02-01）