錐栗植株再生體系的建立

楊志堅(jiān)　馮金玲　陳輝

摘 要： 【目的】為了建立錐栗再生體系，【方法】以錐栗胚為外植體，分析不同基因型、基本培養(yǎng)基及激素組合對(duì)錐栗不定芽的誘導(dǎo)、增殖和生根的影響。【結(jié)果】結(jié)果表明，油榛是錐栗組織培養(yǎng)最佳的基因型；錐栗不定芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為M（NH4NO3 804 mg·L-1+ KNO3 1011 mg·L-1 +FeSO4·H2O 27.8 mg·L-1 + 1/2MS 其余無(wú)機(jī)鹽 + MS有機(jī)）+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1，其出芽率為76%；芽增殖的最佳培養(yǎng)基為M（同上）+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1，其增殖倍數(shù)達(dá)18；誘導(dǎo)生根的最佳培養(yǎng)基為M（同上）+IBA 0.5 mg·L-1，其生根率為48%?！窘Y(jié)論】運(yùn)用上述體系可獲得完整錐栗再生植株。

關(guān)鍵詞： 錐栗； 組織培養(yǎng)； 植株再生

中圖分類(lèi)號(hào)：S664.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980？穴2013？雪01-0105-05

錐栗（Castanea henryi）屬殼斗科栗屬，是我國(guó)著名的木本果材兼用樹(shù)種。其人工林主要集中在閩北和浙南，已成為閩北地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)林樹(shù)種之一[1]。錐栗果實(shí)外形光潔美觀、果肉細(xì)嫩香甜， 含有淀粉、糖、蛋白質(zhì)等主要營(yíng)養(yǎng)成分及18種鈣、鋅、磷、鉀、鐵等礦物質(zhì)，深受消費(fèi)者青睞，在國(guó)際市場(chǎng)中具有強(qiáng)大的競(jìng)爭(zhēng)力。錐栗栽培品種多且亂，為了保持其優(yōu)良特性，目前繁殖大部分采用扦插、嫁接等無(wú)性繁殖方法，但扦插受限于生根率和優(yōu)質(zhì)插條的數(shù)量，嫁接受砧木與接穗親和力、接穗數(shù)量和生活力以及生長(zhǎng)環(huán)境等因素的影響，同時(shí)扦插和嫁接出苗周期長(zhǎng)，造成它們擴(kuò)繁速度慢，育苗效率低，在種質(zhì)資源有限的條件下不能滿足錐栗良種的大量推廣[2]。而組織培養(yǎng)快速繁殖苗木，不僅可以加速良種繁育，而且在離體條件下群體大，實(shí)驗(yàn)條件易于控制，不受時(shí)間和季節(jié)的限制，并在一定程度上保持母本的優(yōu)良性狀。近來(lái)學(xué)者對(duì)錐栗的生理生化、良種繁育、生態(tài)、栽培技術(shù)、病蟲(chóng)害、加工利用等方面開(kāi)展了研究[3]，但對(duì)錐栗組織培養(yǎng)的研究相對(duì)較少，迄今為止，未見(jiàn)錐栗再生體系建立的研究報(bào)道[4-5]。我們進(jìn)行錐栗組培快繁技術(shù)和再生體系的研究，旨在為遺傳改良研究提供基礎(chǔ)和進(jìn)一步加快錐栗優(yōu)良品種的推廣應(yīng)用。

1 材料和方法

1.1 材料

14個(gè)錐栗品種均來(lái)自福建省建甌市水源鄉(xiāng)，每份材料采集健康飽滿的種子 200 粒。

1.2 方法

1.2.1 無(wú)菌外植體的建立 將錐栗種子放在流水中沖洗 10 min，剝?nèi)ス麣?，取出種仁，經(jīng) 70% 酒精浸潤(rùn) 30s 左右，移到含有吐溫 80 的 0.2%HgCI2 溶液中消毒 8 min，接著用無(wú)菌水搖洗4～5遍，每次搖洗時(shí)間不少于 1 min，放到滅菌濾紙上， 吸干表面水分[5]。在超凈工作臺(tái)上用解剖刀切開(kāi)種仁，取出種胚接種到初代培養(yǎng)基上。

1.2.2 基因型篩選 將14個(gè)供試材料（表1）的成熟胚為材料，消毒后，接種于MS+BA1 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1 培養(yǎng)基中[5]，其中蔗糖 40 g·L-1，瓊脂 7g·L-1，pH 為 5.5。每處理接 50 個(gè)外植體，重復(fù) 3 次。接種材料置于溫度 （26±1）℃，空氣相對(duì)濕度 50%～60%，光照 12 h·d-1，光照度為1 500～2 000 lx。30 d 后統(tǒng)計(jì)分化率，觀察材料狀態(tài)。

1.2.3 基本培養(yǎng)基 以油榛的成熟胚為材料，消毒后，接種于按無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽含量高低選取White、WPM、MS、1/2MS（1/2的大量元素）、改良 MS 以及 M（NH4NO3 804 mg·L-1+ KNO3 1 011 mg·L-1+ FeSO4·H2O 27.8 mg·L-1+ 1/2MS 其余無(wú)機(jī)鹽 + MS有機(jī)） 這 6 種基本培養(yǎng)基作為錐栗胚誘導(dǎo)、分化、增殖的基本培養(yǎng)基，分別加入激素 BA 1 mg·L-1和 NAA 0.5 mg·L-1，其余條件同上。1 個(gè)月后觀察。

1.2.4 叢生芽誘導(dǎo) 以油榛的成熟胚為材料，消毒后，取無(wú)菌胚接種于培養(yǎng)基上?；九囵B(yǎng)基為M，添加不同的分裂素濃度 6-BA（1、2 、0.5 mg·L-1），不同類(lèi)型的生長(zhǎng)素 （IAA、NAA、IBA） 及不同濃度的 IBA（0.1、0.2、0.5 mg·L-1）[4]進(jìn)行組合實(shí)驗(yàn)。其余條件同上。1 個(gè)月后觀察。

1.2.5 不定芽的增殖 將初代培養(yǎng)的芽長(zhǎng)至 5～6 個(gè)葉芽時(shí)，分割，接入增殖培養(yǎng)基。以 M 為基本培養(yǎng)，蔗糖 30 g·L-1、瓊脂 6 g ·L-1，pH 5.5，附加 6-BA（0.25、0.5、1 mg·L-1）、IBA（0.1、0.2、0.3 mg·L-1）、0.1 mg·L-1（IAA、NAA、IBA）進(jìn)行激素組合實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)條件同上。觀察記錄，30 d 后繼代1次。

1.2.6 生根培養(yǎng) 不定芽伸長(zhǎng)至2.0～3.0 cm時(shí)自基部切下，移至生根培養(yǎng)基?；九囵B(yǎng)基為White、1/2 MS、M。蔗糖 30 g·L-1，瓊脂 6 g·L-1， pH5.5，附加 IBA（0.3、0.5、0.7 mg·L-1）、0.5 mg·L-1（IAA、NAA、IBA）、0.1 mg·L-1 6-BA 進(jìn)行組合實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)條件同上。培養(yǎng)30 d 后，記錄試驗(yàn)結(jié)果，觀察記錄每個(gè)組合不定芽的生根狀況及芽的生長(zhǎng)反應(yīng)情況。生根率（%）=生根苗數(shù)量/外植體數(shù)量×100。

1.2.7 煉苗及移栽 移栽時(shí)選擇粗壯、均一、長(zhǎng)勢(shì)好，無(wú)變異的試管苗，先移到自然光的環(huán)境中煉苗 2 d，再開(kāi)口煉苗 2 d 后移栽。在瓶?jī)?nèi)倒入適量清水，搖動(dòng)使培養(yǎng)基與幼苗分離，用鑷子把幼苗取出，迅速用水沖洗粘附在根部的培養(yǎng)基，移植于沙質(zhì)中，用 1/2MS 溶液保濕培養(yǎng) 15 d 后，移栽到營(yíng)養(yǎng)土中正常栽培管理。

2 結(jié)果與分析

2.1 基因型對(duì)錐栗不定芽誘導(dǎo)的影響

將 14 個(gè)供試材料的胚外植體消毒后，接種于 MS+BA1 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1分化培養(yǎng)基中， 7 d 左右外植體膨大，14 d 左右可見(jiàn)綠色的芽點(diǎn)（圖版-A），1 個(gè)月后14個(gè)品種的芽分化率為 0.12～0.72，品種之間存在著明顯差異（表 1），長(zhǎng)勢(shì)見(jiàn)（圖版-B）?！畨晤^子、‘歐寧子、‘處署紅的長(zhǎng)勢(shì)最差，‘油栗子、‘烏榛長(zhǎng)勢(shì)在 14 個(gè)品種中最好。綜合外植體分化率和長(zhǎng)勢(shì)，得出‘油榛是最好的實(shí)驗(yàn)材料。

2.2 基本培養(yǎng)基對(duì)錐栗不定芽的影響

以‘油榛胚為材料，選用附加激素的 6 種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，1 個(gè)月后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（表 2）發(fā)現(xiàn)，芽分化率 0.32～0.84，差異明顯。同時(shí)分化出的不定芽長(zhǎng)勢(shì)差異也較大，White、1/2MS 培養(yǎng)基芽勢(shì)弱，MS 分化出的不定芽壯且伴有大量愈傷組織生長(zhǎng)，WPM、改良 MS 褐變嚴(yán)重，M 培養(yǎng)基分化出的不定芽壯，但伴有少量愈傷組織。

2.3 不同激素組合對(duì)錐栗不定芽分化誘導(dǎo)的影響

以‘油榛的胚為材料，以M為基本培養(yǎng)基，分別附加不同激素組合進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，每處理 50 個(gè)外植體。1 個(gè)月后觀察不定芽分化率（表3）， 1.0 mg·L-1 6-BA 與0.5 mg·L-1 IBA 組合時(shí)分化率最高，其次分別為 0.5 mg·L-1 NAA 和 0.5 mg·L-1 IAA。在IBA為 0.5 mg·L-1，2 mg·L-1的 6-BA 分化率高于 1 mg·L-1的6-BA的分化率。在 6-BA 為 2.0 mg·L-1，IBA 為 0.2 mg·L-1 時(shí)，胚不定芽分化率最高，達(dá)到 92%。

故不定芽分化的培養(yǎng)基為 M+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖4.0%+瓊脂粉0.6%，pH 5.5。

2.4 不同激素組合對(duì)錐栗不定芽的增殖的影響

將不定芽分別接種含有不同激素種類(lèi)及其配比的 M 培養(yǎng)基中，進(jìn)行增殖實(shí)驗(yàn)，每個(gè)處理50 個(gè)外植體，一個(gè)月后觀察（圖版-C，D，表4）。各個(gè)處理之間的增殖倍數(shù)變化幅度大，為1～18，其中倍數(shù)最高的是6-BA 0.5 mg·L-1 和IBA 0.1 mg·L-1的組合。從生長(zhǎng)狀況看，不同類(lèi)型的生長(zhǎng)素對(duì)芽生長(zhǎng)影響不同，IBA 增殖的芽正常，IAA 促進(jìn)節(jié)間伸長(zhǎng)，NAA 有利于根毛分化；高濃度的分裂素促進(jìn)愈傷形成；適當(dāng)濃度的IBA 有利于不定芽的增殖。

故芽增殖的最優(yōu)培養(yǎng)基為 M+6-BA0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+蔗糖3.0%+瓊脂粉0.6%，pH 5.5。

2.5 不同激素組合對(duì)錐栗不定芽的生根的影響

將不定芽分別接種M基本培養(yǎng)基中，每處理 50 個(gè)外植體。 15 d 左右不定根開(kāi)始形成，1 個(gè)月后形成發(fā)達(dá)根系（圖版-E，F(xiàn)），并觀察其生根率和根的生長(zhǎng)狀況（表5）。從整體上看，錐栗的生根率比較低。3種基本培養(yǎng)基生根率最高的是M，其次是 1/2MS，最低的是 White 基本培養(yǎng)基，為0。從根的生長(zhǎng)狀況看，M基本培養(yǎng)基生根質(zhì)量最好。在錐栗生根中，分裂素起抑制作用，生根率為 0。3種生長(zhǎng)素的生根作用存在著差異，生根率最高的是 IBA，且根系質(zhì)量也最好；最低的是NAA為 0.12。不同濃度 IBA 對(duì)生根影響也有明顯差異，過(guò)高或過(guò)低都不利于錐栗不定芽的生根。

綜上所述，最優(yōu)生根培養(yǎng)基是 M +IBA0.5 mg·L-1+蔗糖3.0%+瓊脂粉0.6%，pH 5.5。

2.6 移栽成苗

移栽時(shí)，選擇根長(zhǎng) 3 cm 左右，粗壯、均一、長(zhǎng)勢(shì)好，無(wú)變異的試管苗，先移到自然光的環(huán)境中煉苗 2 d，再開(kāi)口煉苗 2 d 后移栽。在瓶?jī)?nèi)倒入適量清水，搖動(dòng)使培養(yǎng)基與幼苗分離，用鑷子把幼苗取出，迅速用水沖洗根部，移植于沙質(zhì)中（圖版-G），用 1/2MS 溶液保濕培養(yǎng) 15 d 后，移栽到營(yíng)養(yǎng)土中正常栽培管理。成活率 75%。

3 討 論

前人[6-8]報(bào)道，基因型的選擇對(duì)于能否獲得再生植株十分重要。本研究得到，以胚為外植體，錐栗不同品種在不定芽誘導(dǎo)和分化中存在明顯差異?！烷环只首罡?，達(dá)到 0.72；‘壩頭子最低，僅為 0.12。這是因?yàn)殄F栗不同品種遺傳控制再生能力或?qū)φT導(dǎo)條件的要求不同存在差異[9]，從而造成了不同基因型供體植株發(fā)育狀態(tài)的差異。

基本培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)重要的基質(zhì)，由于各種植物的遺傳特性，生物學(xué)特性和生態(tài)學(xué)特性不一樣，因而各種植物需求的營(yíng)養(yǎng)成分也不盡相同，對(duì)培養(yǎng)基成分要求也有差異[10]，同時(shí)器官發(fā)生的不同時(shí)期對(duì)培養(yǎng)基的要求是不一樣的[11]。本課題組在錐栗組織培養(yǎng)初期得出，適合錐栗胚分化的基本培養(yǎng)基是 White[4]，但本次試驗(yàn)得出錐栗組織培養(yǎng)最適宜的基本培養(yǎng)基為M。這是因?yàn)殡m然 White 基本培養(yǎng)基中的分化率很高，但芽的質(zhì)量不好，有可能是 White 基本培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽含量低有利于胚分化，有機(jī)質(zhì)含量不高造成芽生長(zhǎng)不好。而M基本培養(yǎng)基用有機(jī)質(zhì)含量高的 MS作基礎(chǔ)降低大量元素含量，即 NH4NO3 804 mg·L-1+ KNO31011 mg·L-1 + FeSO4·H2O 27.8 mg·L-1+ 1/2MS 其余無(wú)機(jī)鹽 + MS有機(jī)。因此是最適宜的基本培養(yǎng)基是 M。同時(shí)也說(shuō)明錐栗組培適合于總鹽量中等及銨態(tài)氮和硝態(tài)氨的比值為1的培養(yǎng)基。

在木本植物器官發(fā)生過(guò)程中，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素對(duì)芽的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)發(fā)育均起著重要的作用，一般誘導(dǎo)不定芽的形成時(shí)細(xì)胞分裂素高于生長(zhǎng)素的用量或只用細(xì)胞分裂素；而誘導(dǎo)不定根發(fā)生只用生長(zhǎng)素或配合使用較低濃度的細(xì)胞分裂素[12]。本試驗(yàn)結(jié)果也類(lèi)似，芽分化中 6-BA 2.0 mg·L-1+IBA0.2 mg·L-1組合效果好，芽增殖實(shí)驗(yàn)中 6-BA0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1的組合效果最好。生根激素 IBA0.5 mg·L-1。在激素配比中，分裂素與生長(zhǎng)素的比例為 10 時(shí)，錐栗分化不定芽效果最好；比例為 5 時(shí)，增殖效果最好；但分裂素對(duì)錐栗不定芽生根有抑制作用。這有可能是因?yàn)殡S著繼代次數(shù)的增多，激素的含量和比例相對(duì)降低[13-14]，且由于有不同種類(lèi)植物激素的生理效應(yīng)相互促進(jìn)和相互拮抗，影響植物生理生化的合成、運(yùn)輸、代謝及效應(yīng)導(dǎo)致每一個(gè)培養(yǎng)階段只需一定范圍的濃度和配比[15]。在 6-BA 與不同類(lèi)型的生長(zhǎng)素組合中，IBA 對(duì)錐栗組織培養(yǎng)效果最好，其次是 NAA，最后是 IAA。這也許是IAA是一種內(nèi)源激素，在外界環(huán)境中易分解的原因[16-17]。

在錐栗組織培養(yǎng)研究過(guò)程中也存在一些問(wèn)題。首先錐栗不定芽分化率不高。這有可能是因?yàn)殄F栗為多年生的木本植物，次生代謝旺盛且復(fù)雜，易導(dǎo)致組培過(guò)程中發(fā)生褐變。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)基因型選擇和基本培養(yǎng)基中大量元素的調(diào)節(jié)，在保證有效的控制褐變的前題下，提高不定芽分化率。其次生根率低，是因?yàn)殄F栗本身就是難生根的物種[1]，而且對(duì)于木本成年樹(shù)來(lái)說(shuō)，不定芽生根的問(wèn)題是整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中最難克服的[18]。（本文圖版見(jiàn)插3）

參考文獻(xiàn) References：

[1] CHEN hui. The ecological cultivation of Castanea henryi plantation[M]. Beijing： China Forestry Publishing House， 2000.

陳輝. 錐栗人工林生態(tài)培育[M]. 北京： 中國(guó)林業(yè)出版社， 2000.

[2] XU Jin-song， ZOU Shuang-quan. Current production status and development strategies for HenryChinkapin in Fujian Province[J]. Economic Forest Reseaches，1997， 15（4）： 13-15.

許勁松， 鄒雙全. 福建錐栗經(jīng)營(yíng)現(xiàn)狀與發(fā)展策略研究[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究， 1997，15（4）： 13-15.

[3] FENG Jin-ling， YANG Zhi-jian， CHEN Hui. Advances in Castanea henryi[J]. Subtropical Agriculture Research，2009，5（4）： 237-241.

馮金玲， 楊志堅(jiān)， 陳輝. 錐栗的研究進(jìn)展[J]. 亞熱帶農(nóng)業(yè)研究， 2009， 5（4）： 237-241.

[4] FENG Jin-ling， CHEN Hui， CHEN Shi-pin， YANG Zhi-jian. Issue cultivation research of Castanea hengri[J]. Economic Forest Researches， 2004， 22（3）： 29-31.

馮金玲， 陳輝 ，陳世品， 楊志堅(jiān). 錐栗成熟胚離體培養(yǎng)初報(bào)[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究， 2004， 22（3）： 29-31.

[5] FENG Jin-ling，CHEN Hui， YANG Zhi-jian， CHEN Shi-pin. The selection and sterilization of explant of Castanea henryi in tissue culture[J]. Journal of Fujian College of Forestry， 2006， 26（1）： 22-25.

馮金玲， 陳輝， 楊志堅(jiān)， 陳世品. 錐栗組織培養(yǎng)外植體消毒和選擇[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報(bào)， 2006， 26（1）： 22-25.

[6] MULLER A， ISER M， HESS D. StabLe transformation of sunf Lower using a non-meristematic regeneration protocoL andgreen fLuorescent protein as a vitaL marker[J]. Transgenic Res，2001，10（5）： 435 -444.

[7] LIU Hai-xue， WANG Yu-jie. Research progress on the tissue culture of sunflower[J]. Journal of Inner Mongolia University for Nationalities： Natural Sciences， 2006， 21（2）： 169-172.

劉海學(xué)， 王玉潔. 向日葵組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J]. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)： 自然科學(xué)版， 2006， 21（2）： 169-172.

[8] LIANG Ji-nan， TAN Zhong-wen， TAN Zhi-yong， ZHANG Zhi-sheng， KONG Chui-hua， HU Fei. Studies on the properties of tissue culture of different sugarcane genotypes[J]. Journal of South China Agricultural University： Natural Sciences， 2002， 23（4）： 37-40.

梁計(jì)南， 譚中文， 譚志勇， 張志勝， 孔垂華， 胡飛. 甘蔗不同基因型組織培養(yǎng)特性的研究[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)： 自然科學(xué)版， 2002， 23（4）： 37-40.

[9] XU Zhi-hong. Plant biotechnology[M]. Shanghai： Shanghai Science & Technology Press， 1998.

許智宏. 植物生物技術(shù)[M]. 上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 1998.

[10] ZHONG Yu， ZHANG Jian， LUO Cheng-de， CHEN Qi-bing. A study on the technique system of tissue culture in Rhododendron Hybrind（Ⅰ）-selection of medium and explant[J]. Journal of Sichuan Agricultural University， 2001， 19（1）： 37-39.

鐘宇， 張健， 羅承德， 陳其兵. 西洋杜鵑組織培養(yǎng)技術(shù)體系研究（Ⅰ）-基本培養(yǎng)基和外植體的選擇[J]. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2001， 19（1）： 37-39.

[11] XIAO Yu， ZHANG Chao-hong， ZHI Yu-xi， XU Yan， LI Zhi-qian， WANG Yue-jin. Somatic embryogenesis from floral organ and plant regeneration of grapevine[J]. Journal of Fruit Science， 2011， 28（5）： 888-892.

肖宇， 張朝紅， 支玉璽， 徐炎， 李志謙， 王躍進(jìn). 葡萄花器官體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)和植株再生[J]. 果樹(shù)學(xué)報(bào)， 2011， 28（5）： 888- 892.

[12] LI Gui-qin， ZHANG Yu-xing， GAO Zhi-hua， YU Wei-na， NIU Yan-ling. Establishment of shoot regeneration system from leaf of Yali pear[J]. Journal of Fruit Science， 2010， 27（3）： 436-440.

李桂琴， 張玉星， 高志華， 于偉娜， 牛艷玲. 鴨梨葉片不定芽再生體系的建立[J]. 果樹(shù)學(xué)報(bào)， 2010， 27（3）： 436- 440.

[13] QU Su-ping， XIONG Li， LI Shu-fa， WANG Li-hua， TANG Kai-xue. Establishment of plant regeneration from leaves explants of wild Roscoea cautleoides in Yunnan[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2006， 33（2）： 441-444.

瞿素萍， 熊 麗， 李樹(shù)發(fā)， 王麗花， 唐開(kāi)學(xué). 云南野生早花象牙參葉片再生體系的建立[J]. 園藝學(xué)報(bào)， 2006， 33（2）： 441- 444.

[14] ZHANG Chang-qing， HONG Bo， WANG Hai-qin， GAO Jun-ping. High efficiency of in vitro micropropagation and regeneration for Ground Cover Rose Royal Bassino[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2005， 32（6）： 1065-1069.

張常青， 洪 波， 王海琴， 高俊平. 地被月季‘RoyaL Bassino高頻再生體系的建立[J]. 園藝學(xué)報(bào)， 2005， 32（6）： 1065-1069.

[15] CUI Kai-rong， DAI Ruo-lan. Molecular biology in somatic embryogenesis of plants[M]. Beijing： Publications of Science Press， 2000.

崔凱榮， 戴若蘭. 植物體細(xì)胞胚發(fā)生的分子生物學(xué)[M]. 北京： 科學(xué)出版社， 2000.

[16] WU Ke-xian，LI Wei，XU Miao-zhen，DANG Chang-shun，LIU Yue. Study on tissue culture of Larix olgensis[J]. Scientia Silvae Sinicae， 1996， 32（2）： 125-133.

吳克賢， 李偉， 徐妙珍， 黨常順， 劉越. 長(zhǎng)白落葉松組織培養(yǎng)的研究[J]. 林業(yè)科學(xué)， 1996， 32（2）： 125-133.

[17] WANG Zhe-zhi， HU Zheng-hai. Effect of IAA，IBA，NAA and 2，4-D on rooting ability of the test-tube sophora japonica plantlet[J]. Journal of Shaanxi Normal University， 1997， 25（2）： 57-59.

王喆之， 胡正海. IAA、IBA、NAA和2，4-D對(duì)槐樹(shù)試管苗生根的影響[J]. 陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)， 1997， 25（2）： 57-59.

[18] ZHANG Hong-wei， HUANG Xue-lin， FU Jia-rui， YANG Min-quan， CHEN Chuan-qi. Axillary bud culture and plantlet regeneration of Acacia auriculiformis and A. mangium Axillary bud culture and plantlet regeneration of Acacia auriculiformis and A. mangium[J]. Journal of Tropical and Subtropical Botany， 1995， 3（3）： 62-68.

張宏偉， 黃學(xué)林， 傅家瑞， 楊民權(quán)， 陳傳啟. 大葉相思、馬占相思腋芽培養(yǎng)和植株再生[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)， 1995， 3（3）： 62-68.