掌葉大黃水提取物對大鼠離體胸主動(dòng)脈的舒張作用

王 雷，金德山，金范學(xué)

(延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，吉林延吉133002)

掌葉大黃為蓼科多年生宿根草本植物，以根莖入藥，具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃之功效［1］。藥理研究表明，大黃有清除氧自由基、調(diào)節(jié)血脂、抗動(dòng)脈硬化、抗癌、抗衰老、抗精神病、抗菌消炎、保肝利膽、抗病毒等功效［2］。2013年4～8月，我們觀察了掌葉大黃水提取物對大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)舒縮功能的影響。

1 材料與方法

1．1 材料 取雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量250～300 g，由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供。隨機(jī)分為5組:對照組，內(nèi)皮完整掌葉大黃水提取物大、小劑量組，去內(nèi)皮掌葉大黃水提取物大、小劑量組，每組8只。準(zhǔn)確稱取掌葉大黃100．0 g，加入蒸餾水2 L，80℃煮沸2 h，過濾減壓濃縮干燥，得到32．5 g粉末。苯腎上腺素(PE)、乙酰膽堿(Ach)、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、亞甲藍(lán)(MB)、吲哚美辛、四乙銨、格列本脲、4-氨基吡啶均為美國Sigma公司產(chǎn)品。

1．2 方法

1．2．1 大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的制備 采用戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，打開胸腔，迅速分離胸主動(dòng)脈。將取下的胸主動(dòng)脈置入4℃ Kreb’s營養(yǎng)液(pH 7．4)中，去除血管周圍的脂肪及結(jié)締組織，將動(dòng)脈剪成4 mm長的血管環(huán)，操作過程中避免過度牽拉，以防損傷內(nèi)皮。去除血管內(nèi)皮時(shí)，使用小鑷子輕輕磨擦血管環(huán)內(nèi)表面，以去除內(nèi)皮細(xì)胞。將血管環(huán)懸掛于37℃預(yù)熱的、盛有Kreb’s營養(yǎng)液的20 mL浴槽內(nèi)，一端固定，另一端通過張力換能器連接至RM6240BD型多道生理信號采集處理系統(tǒng)，持續(xù)通以含有95 mL/L O2和5 mL/L CO2的混合氣體，將靜息張力逐漸調(diào)節(jié)至2．0 g，在37℃下穩(wěn)定1 h，期間每15 min換液1次。用50 mmol/L KCl刺激達(dá)峰值，用Kreb’s營養(yǎng)液沖洗3次，以誘發(fā)血管環(huán)的最大收縮幅度。待動(dòng)脈環(huán)穩(wěn)定后，換液1次，向浴槽中加入PE 1．0 μmol/L，收縮達(dá)峰值 15 min 后，加入 Ach 1．0 μmol/L。若加入Ach后使PE預(yù)收縮的血管舒張60% ～90%，可認(rèn)為內(nèi)皮完整，反之則認(rèn)為去內(nèi)皮。

1．2．2 掌葉大黃水提取物對PE縮血管作用的影響取內(nèi)皮完整的血管環(huán)，首先給予PE 1μmol/L刺激血管環(huán)收縮到達(dá)平臺(tái)期后，浴槽內(nèi)累計(jì)加入0．03、0．1 mg/mL掌葉大黃水提取物，向?qū)φ战M內(nèi)加入20 mL Kreb’s營養(yǎng)液，觀察血管環(huán)的舒張反應(yīng)。舒張百分比=(PE作用后血管張力－掌葉大黃水提取物給藥后血管張力)/PE作用后血管張力×100%。

1．2．3 內(nèi)皮對掌葉大黃水提取物舒血管作用的影響 PE 1μmol/L刺激前，在內(nèi)皮完整的血管環(huán)分別給予L-NAME 100μmol/L、MB 10μmol/L或吲哚美辛5μmol/L預(yù)孵育20 min，并設(shè)PE 1μmol/L刺激對照組，觀察其對掌葉大黃水提取物舒血管作用的影響。掌葉大黃水提取物累積濃度為0．1 mg/mL，給藥間隔為5 min。

1．2．4 鉀通道對掌葉大黃水提取物舒血管作用的影響 采用去除內(nèi)皮的血管環(huán)，觀察三種鉀通道阻滯劑四乙銨5μmol/L、格列本脲10μmol/L和4-氨基吡啶100μmol/L在加入PE 1μmol/L前，預(yù)孵育20 min后，掌葉大黃水提取物舒張血管的作用變化。設(shè)PE 1μmol/L刺激對照組，掌葉大黃水提取物累積濃度為0．1 mg/mL，給藥間隔為5 min。

1．2．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果以ˉ±s表示，并采用t檢驗(yàn)及ANOVA法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P≤0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2．1 掌葉大黃水提取物對PE預(yù)收縮大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用 用0．03、0．1 mg/mL掌葉大黃水提取物處理后，大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張百分比分別為(41．91 ±10．13)% 和(86．44 ±3．91)%，其舒張作用呈濃度依賴性。

2．2 掌葉大黃水提取物舒張血管與內(nèi)皮的關(guān)系 掌葉大黃水提取物0．03、0．1 mg/mL處理時(shí)，內(nèi)皮完整組的舒張百分比分別為(41．91±10．13)%和(86．44±3．91)%，相同劑量的去內(nèi)皮組分別為(36．21±12．73)%和(85．84 ±2．19)%，兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0．05)。內(nèi)皮完整血管環(huán)用L-NAME、MB和吲哚美辛預(yù)處理時(shí)，其舒張百分比分別為(72．01±12．18)%、(79．81 ±27．01)%、(83．63 ±49．27)%，與對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＞0．05)。

2．3 掌葉大黃水提取物舒血管作用與鉀離子通道的關(guān)系 格列本脲和4-氨基吡啶組的舒張百分比分別為(80．81 ±18．21)%、(84．60 ±26．51)%，四乙銨組為(23．98±10．51)%，與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P 均 ＜0．01)。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，掌葉大黃水提取物的舒血管作用是非內(nèi)皮依賴性的。血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量的變化是血管收縮和舒張的關(guān)鍵因素。血管平滑肌細(xì)胞膜上存在電壓依賴的鈣通道(VDC)及受體操縱的鈣通道(ROC)［3］。PE誘導(dǎo)的血管收縮主要作用于α1腎上腺素受體，激活磷脂酶C，產(chǎn)生三磷酸肌醇，刺激平滑肌細(xì)胞內(nèi)貯鈣的釋放;也可通過激活細(xì)胞膜上的受體操縱性鈣通道和磷酸化電壓依賴性鈣通道使細(xì)胞外鈣內(nèi)流［4］。內(nèi)皮對血管張力的調(diào)節(jié)起重要作用。內(nèi)皮細(xì)胞分泌各種血管活性物質(zhì)如一氧化氮(NO)、前列腺素、血管緊張素Ⅱ等。掌葉大黃水提取物的舒血管作用是非內(nèi)皮依賴性的，故推測與內(nèi)皮無關(guān)。研究顯示，NO在內(nèi)皮一氧化氮合酶的作用下，由左旋精氨酸轉(zhuǎn)化而來，并通過激活平滑肌細(xì)胞可溶性鳥苷酸環(huán)化酶增加環(huán)鳥苷酸含量，通過cGMP依賴性蛋白激酶使鈣內(nèi)流減少，增加鈣ATP酶對鈣的攝取或直接作用于收縮蛋白去磷酸化，使血管平滑肌舒張［5～7］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，用左旋硝基精氨酸甲酯或MB預(yù)處理，對掌葉大黃水提取物的舒張血管作用無影響，提示其張血管與NO無關(guān)。研究報(bào)道，血管平滑肌細(xì)胞上K+通道的開放可引起細(xì)胞膜超極化，最終引起血管平滑肌舒張［8］。因此本實(shí)驗(yàn)選用了四乙銨、格列本脲和4-氨基吡啶對掌葉大黃水提取物舒張血管的作用進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，四乙銨可使掌葉大黃水提取物舒張血管的作用降低，而格列本脲和4-氨基吡啶對其舒血管作用無明顯影響。提示掌葉大黃水提取物的作用可能與直接開放血管平滑肌細(xì)胞上鈣激活的鉀通道有關(guān)。

綜上所述，掌葉大黃水提取物舒張血管的效應(yīng)可能不依賴于血管內(nèi)皮功能，而是通過直接開放血管平滑肌上鈣激活的鉀通道發(fā)揮作用。

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