核酸檢測標(biāo)本運輸模式的探討

徐 忠，邱穎婕，章 懌，章舜瑋，周筱嫣（上海市血液中心 200051）

為有效地縮短病毒特異性抗原和抗體免疫測定的“窗口期”，從而減少輸血風(fēng)險，提高輸血安全性，2010年衛(wèi)生部在全國部署了血站核酸檢測的試點工作。依據(jù)衛(wèi)生部下發(fā)的《血站核酸檢測試點實驗室技術(shù)指導(dǎo)意見》，核酸標(biāo)本的運輸溫度要求為2～8℃，高于現(xiàn)行的血液運輸要求（2～10℃），這就意味著血站對于標(biāo)本運輸?shù)睦滏溈刂菩柰度敫蟮娜肆Α⑽锪?。本中心為適應(yīng)核酸檢測的需求，自行研發(fā)了符合核酸標(biāo)本運輸要求的標(biāo)本運輸箱，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本運輸箱 內(nèi)外殼使用蓋塑板，中間使用高強(qiáng)度發(fā)泡塑料填充。有大小兩種規(guī)格。

1.1.1 規(guī)格一 外形尺寸53cm×33cm×23cm（放置2個試管架，可放200根標(biāo)本管），下文簡稱為小箱。

1.1.2 規(guī)格二 外形尺寸53cm×33cm×37cm（放置4個試管架，可放400根標(biāo)本管），下文簡稱為大箱。

1.2 保溫劑 為耦氮二甲酰胺（AC）高分子材料與純凈水復(fù)合而成，外部使用多元醇磷酸酯（PAPE）材料包裹，安全無毒性。規(guī)格為每袋250g，尺寸為12cm×18cm×2.5cm。該保溫劑存放于－20℃～－10℃冷凍箱內(nèi)冰凍12h以上，待其完全凍結(jié)，即可使用。

1.3 溫度計 Microlog EC600溫度監(jiān)測儀（上海錦諾），溫度檢測范圍－30℃～50℃。EX500－B－04R數(shù)字溫度計（上海自動化儀表公司），溫度檢測范圍－100℃～300℃。EC600溫度監(jiān)測儀在使用前，用經(jīng)計量合格的EX500－B－04R數(shù)字溫度計進(jìn)行校準(zhǔn)。使用時，設(shè)定該溫度計1min自動記錄一次溫度，待檢測完成后，在電腦中通過配套軟件讀取溫度數(shù)據(jù)。

1.4 孵育箱 MIR－254（三洋公司）溫度控制范圍－10℃～60℃。

1.5 標(biāo)本運輸模式

1.5.1 獻(xiàn)血屋標(biāo)本運輸模式 獻(xiàn)血屋的標(biāo)本需派專車至各個點接取。考慮到保溫劑需放在冷凍箱中保存，而各個獻(xiàn)血屋通常只有冷藏冰箱，無法保存保溫劑。故到各個獻(xiàn)血屋接取標(biāo)本時，需同時帶上保溫劑外出。即先在運輸箱中放入保溫劑，過一段時間后，再放入標(biāo)本。在驗證標(biāo)本運輸箱保溫性能時，盡量模擬實際的運輸情況。在大箱中放入12塊保溫劑，在小箱中放入8塊保溫劑，將上述兩個標(biāo)本運輸箱在25℃～30℃環(huán)境中放置2h后，再放入裝滿標(biāo)本的試管架，為防止保溫劑上的冷凝水對標(biāo)本上的標(biāo)簽造成影響，在試管架外包裹塑料袋。大箱在箱體的長壁各擺放2塊保溫劑，在短壁各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放6塊保溫劑，共12塊保溫劑。小箱在箱體內(nèi)壁的四周各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放4塊保溫劑，共8塊保溫劑。

1.5.2 標(biāo)本長途運輸模式 即在運輸箱中同時放入保溫劑和標(biāo)本。裝滿標(biāo)本的試管架外包裹塑料袋后，放入標(biāo)本運輸箱。大箱在箱體的長壁各擺放2塊保溫劑，在短壁各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放6塊保溫劑，共12塊保溫劑。小箱在箱體內(nèi)壁的四周各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放4塊保溫劑，共8塊保溫劑。

1.6 保溫性能驗證 將標(biāo)本運輸箱置于溫度為43℃的三洋孵育箱中，標(biāo)本運輸箱內(nèi)的溫度要求保持在2℃～8℃，觀察其保溫時間。同一規(guī)格的標(biāo)本運輸箱，每種運輸模式各驗證3次。在3次運輸溫度驗證后，對置于標(biāo)本運輸箱中的標(biāo)本，進(jìn)行外觀目視檢查。

2 結(jié) 果

2.1 獻(xiàn)血屋標(biāo)本運輸模式 獻(xiàn)血屋標(biāo)本運輸模式結(jié)果見圖1。小箱內(nèi)部溫度波動范圍為3.75℃～5.75℃。說明在獻(xiàn)血屋標(biāo)本運輸模式中，可以保持3h的運輸時間，能滿足使用需求。2.2 標(biāo)本長途運輸模式 標(biāo)本長途運輸模式結(jié)果見圖2。

圖1 獻(xiàn)血屋標(biāo)本運輸模式驗證結(jié)果

圖2 標(biāo)本長途運輸模式驗證結(jié)果

3次驗證結(jié)果表明，在本運輸模式中，標(biāo)本運輸箱在43℃環(huán)境中放置3h，大箱內(nèi)部溫度波動范圍為5.50℃～6.67℃，

3次驗證結(jié)果表明，在本運輸模式中，標(biāo)本運輸箱在43℃環(huán)境中放置6h，大箱內(nèi)部溫度波動范圍為4.0℃～7.75℃，小箱內(nèi)部溫度波動范圍為4.75℃～7.75℃。說明在標(biāo)本長途運輸模式中，可以保持6h的運輸時間，能滿足使用需求。

2.3 標(biāo)本外觀檢查 經(jīng)肉眼觀察，存放于標(biāo)本運輸箱中的核酸檢測標(biāo)本經(jīng)多次驗證后，上清液無溶血等異?，F(xiàn)象。

3 討 論

實踐證明，使用核酸篩查血液能分別將丙型肝炎病毒抗體和人類免疫缺陷病毒抗體的“窗口期”縮短70%和50%，能進(jìn)一步降低輸血傳播傳染性疾病的風(fēng)險［1］。1999年，日本率先對臨床血液進(jìn)行核酸篩查，目前已有歐美、澳大利亞、加拿大等多個國家開展常規(guī)的血液核酸篩查。今年在全國各大血站試點進(jìn)行的核酸檢測，正反映了我國對輸血安全性的重視，在全國范圍內(nèi)開展核酸檢測，是將來的發(fā)展趨勢。

近幾年，隨著檢驗技術(shù)的發(fā)展，國內(nèi)檢驗界已經(jīng)越來越意識到檢驗前控制，即標(biāo)本質(zhì)量控制的重要性［2］。而在核酸檢測中，標(biāo)本的采集、運輸和保存對檢驗結(jié)果往往有決定性的影響［3］。這是由于核酸檢測對象的特殊性，即檢測的靶核酸DNA、RNA極易降解。有研究表明，標(biāo)本在室溫放置一段時間后，病毒的檢出率較存放于4℃環(huán)境中的同濃度標(biāo)本，有一定比例的下降。對核酸檢測影響最大的是標(biāo)本溶血產(chǎn)生的RNase、DNase等酶類，可直接降解標(biāo)本中的病毒顆粒和從病毒顆粒中釋放出的核酸［4］。所以保障核酸檢測的質(zhì)量，首先要保障核酸標(biāo)本的質(zhì)量。

本文著重討論核酸標(biāo)本運輸過程中的冷鏈控制，提供一種簡便易行且成本低廉的標(biāo)本運輸模式，為核酸檢測順利開展提供保障。本中心自行研制的標(biāo)本運輸箱，在外界環(huán)境為43℃的惡劣環(huán)境中，能確保運輸箱內(nèi)溫度3～6h，滿足不同標(biāo)本運輸模式的要求。標(biāo)本運輸箱的箱體內(nèi)外均采用蓋塑板包裹，防水、防潮，且便于日常的清潔和消毒。同時考慮到箱體的搬運問題，每個標(biāo)本運輸箱外均配有專用的帆布袋，易于運輸途中的拎取。該標(biāo)本運輸箱與目前市面上保溫箱相比，保溫性能相接近，但自重僅1.6kg和2kg，而同樣容量的保溫箱自重達(dá)到5～6kg，使用該標(biāo)本運輸箱大大減輕了工作人員的日常負(fù)擔(dān)。

但從實驗數(shù)據(jù)也可以看出，如事先把保溫劑置于室溫中一段時間后，標(biāo)本運輸箱的保溫時間會縮短一半（3h）。提示在日常的使用中，特別需注意保溫劑的保存和使用，以保證在運輸?shù)娜^程中標(biāo)本運輸箱內(nèi)的溫度能符合要求，以確保核酸檢測的質(zhì)量。

［1］ 王迅.采供血機(jī)構(gòu)開展血液血液病毒核酸檢測的條件及意義［J］.中國輸血雜志，2008，21（11）：825－826.

［2］ 鄭春蘇.血液標(biāo)本檢驗前的質(zhì)量控制［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（18）：1589.

［3］ 李金明.實時熒光PCR技術(shù)［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2007：63.

［4］ 王德文.現(xiàn)行常規(guī)采血流程對HIV RNA篩查的影響評估［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2007，7（11）：2100－2101.