八味益腎丸的質(zhì)量控制研究

蘇國(guó)林 李 君

（頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，承德067000）

八味益腎丸的質(zhì)量控制研究

蘇國(guó)林 李 君*

（頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，承德067000）

目的 建立八味益腎丸的質(zhì)量控制方法。方法 采用TLC法對(duì)蠶蛾和當(dāng)歸進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法對(duì)淫羊藿苷進(jìn)行定量分析。結(jié)果 薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾；淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.0126～0.0756mg／ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.9998），平均加樣回收率為95.8%，RSD為0.31%。結(jié)論 所建立的方法能準(zhǔn)確可靠地進(jìn)行定性、定量檢測(cè)，重復(fù)性好，可作為本產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。

八味益腎丸；淫羊藿苷；TLC；HPLC；質(zhì)量控制

八味益腎丸是根據(jù)中醫(yī)藥學(xué)文獻(xiàn)的有關(guān)記載，結(jié)合當(dāng)代有關(guān)理論和臨床研究的最新成果及我們幾十年的臨床經(jīng)驗(yàn)，充分發(fā)揮中醫(yī)藥在治療腎陽(yáng)不足諸癥的優(yōu)勢(shì)，研制出的一種療效可靠、使用安全，服用方便的中藥復(fù)方新藥，由蠶蛾和淫羊藿等藥味組成，臨床主要用于治療腎陽(yáng)不足，陽(yáng)痿、滑精以及氣怯神疲，畏寒肢冷，腰膝酸軟等癥。年老、久病而見上述諸癥者亦可用之。為有效地控制該制劑的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，采用薄層色譜法對(duì)蠶蛾和當(dāng)歸進(jìn)行了鑒別，采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)淫羊藿苷進(jìn)行含量測(cè)定［1］。

1 儀器與試藥

島津LC-10A型高效液相色譜儀（島津LC-10AT泵；SPD-M10A二級(jí)管陣列檢測(cè)器；CLASS-LC10色譜工作站）；色譜柱：Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），AL104萬分之一分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；AE240十萬分之一分析天平 （瑞士METTLER公司）；KQ-700DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；硅膠G（山東青島海洋化工研究所）。

對(duì)照藥品和藥材均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，淫羊藿苷對(duì)照品（批號(hào)：110737-200313）；當(dāng)歸對(duì)照藥材（120927-200512）；蠶蛾對(duì)照藥材（121457-200501）；八味益腎丸樣品 （頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司制）；乙腈為色譜純 （美國(guó)Tedia公司）；水為雙蒸水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1薄層鑒別

2.1.1當(dāng)歸取本品2g，研碎，加乙醚10ml，浸漬1小時(shí)，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。照處方配比，除去當(dāng)歸，按八味益腎丸工藝制備當(dāng)歸陰性樣品。取當(dāng)歸陰性樣品，照供試品溶液制備方法同法制成陰性樣品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，加乙醚10ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中華人民共和國(guó)藥典，2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯 （9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 （365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。陰性樣品色譜則無此斑點(diǎn)。

2.1.2蠶蛾取本品2g，研碎，加無水乙醇10ml，超聲處理10min，濾過，取濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液。照處方配比，除去蠶蛾，按八味益腎丸工藝制備當(dāng)歸陰性樣品。取蠶蛾陰性樣品，照供試品溶液制備方法同法制成陰性樣品溶液。另取蠶蛾對(duì)照藥材0.2g，加無水乙醇10ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中華人民共和國(guó)藥典，2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（18∶3∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品色譜則無此斑點(diǎn)。

2.2含量測(cè)定

2.2.1對(duì)照品溶液的制備取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml含0.03mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取細(xì)粉約0.2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入20ml稀乙醇，密塞，稱定重量，超聲處理（功率500W，頻率40k Hz）20分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，通過聚酰胺柱，用水40ml洗脫，棄去水洗脫液，再用乙醇50ml洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相使溶解，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得。

2.2.3陰性供試品溶液的制備取按處方除去淫羊藿藥材的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液，按照上述色譜條件，吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，繪制色譜圖。見圖1。

圖1 八味益腎丸對(duì)照品

2.2.4色譜條件與系統(tǒng)適用性色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），乙腈-水（30∶70）為流動(dòng)相，流速1ml／min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，進(jìn)樣量10μl。見圖1。

2.2.5線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品母液 （淫羊藿苷濃度0.126mg／ml）1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值（Y，mAu*s）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的進(jìn)樣量 （X，mg／ml）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得淫羊藿苷回歸方程為Y＝29635721.09X-14297.8（r＝0.9998），線性范圍為0.0126～0.0756mg／ml。

2.2.6精密度實(shí)驗(yàn)取上述取同一淫羊藿苷對(duì)照品溶液，精密吸取10μl，按2.2.4色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果淫羊藿苷RSD為0.6%，表明儀器精密度良好。

2.2.7試品溶液穩(wěn)定性考察取供試品溶液，按2.2.4色譜條件，分別于0、2、4、6、8、24h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD分別為0.21%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批八味益腎丸 （批號(hào)：297023），研細(xì)，分別稱取9份，分為三組，每組分別為0.16g、0.20g、0.24g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，測(cè)定淫羊藿苷峰面積并計(jì)算含量，平均含量為1.93mg／g，RSD為0.33%所建方法重復(fù)性良好。

2.2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)已知含量供試品（批號(hào)：297023，淫羊藿苷含量為1.93mg／g），研細(xì)，分別稱取9份，每份0.1g，精密加入不同量的對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定淫羊藿苷的峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果淫羊藿苷的平均回收率為95.8%（n＝9），RSD＝0.31%，見表1。

表1 淫羊藿苷含量測(cè)定加樣回收率實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果 （%）

2.2.10樣品測(cè)定結(jié)果取5批樣品，按上述2.2.1和2.2.2項(xiàng)方法分別制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果 （n＝5）

3 討論

淫羊藿為本方中的君藥，淫羊藿性味辛甘溫，入肝腎二經(jīng)，亦能補(bǔ)腎壯陽(yáng)，為治陽(yáng)萎不舉之要藥。且淫羊藿苷中含有的黃酮類成分具有促進(jìn)免疫功能等多方面的藥理作用［2］，故選擇黃酮類成分淫羊藿苷作為含量測(cè)定指標(biāo)。

本文對(duì)淫羊藿苷對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，淫羊藿苷在270nm處有最大吸收峰，該波長(zhǎng)與2010年版中國(guó)藥典基本一致，故選擇270nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。本文還對(duì)流動(dòng)相甲醇-水的組成比例進(jìn)行了考察。

在含量測(cè)定中，分別對(duì)供試品溶液制備中的提取溶媒、提取方式和提取時(shí)間進(jìn)行了考察。提取溶媒考察中，分別采用甲醇和稀乙醇提取，結(jié)果表明采用稀乙醇提取效果好。提取方式考察中分別采用了超聲和回流提取，結(jié)果以超聲法提取效果較好。在超聲時(shí)間的考察中，分別考察了提取10～30min對(duì)淫羊藿苷含量的影響，結(jié)果選取20min即可。

［1］王艷輝，陳亞，紹禹，等．蠶蛾的應(yīng)用研究進(jìn)展［J］．中國(guó)蠶業(yè)，2008，（4）：14-15．

［2］李德勛．壯骨關(guān)節(jié)丸中淫羊藿、骨碎補(bǔ)的薄層色譜鑒別［J］．中成藥，2003，25（8）：682-683．

Quality Control of Bawei Yishen Pills

Su Guolin Li Jun
(Chengde Jingfukang Pharmaceutical Group Co.Ltd,Chengde 067000,China)

Object1ve To establish effective methods for the determination of Bawei Yishen Pills．Methods TLC was performed to identify Silkworm moth and angelica Bawei Yishen Pills．HPLC was used to determine the contents of icariin．Results The spots on TLC plates were clear without interference．The calibration curves were linear within the range of 0.0126～0.0756 mg／ml for icariin，the average recovery rate was 95.8%，RSD＝0.31%．Conclusions：The method issimple，reliable，accurateand reproducible．It is suitable for the quality control of Bawei Yishen Pills．

Bawei Yishen Pills；Icariin；TLC；HPLC；Quality Control

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.22.119

：1672-2779（2013）-22-0155-03

吳義紅

2013-09-23）

* 通訊作者