卵巢功能早衰的實(shí)驗(yàn)研究概述

胡曉華 陳冬梅 賈 磊

（河南省中醫(yī)院婦產(chǎn)科，鄭州450002）

卵巢功能早衰的實(shí)驗(yàn)研究概述

胡曉華 陳冬梅 賈 磊

（河南省中醫(yī)院婦產(chǎn)科，鄭州450002）

卵巢早衰；實(shí)驗(yàn)研究；綜述

卵巢早衰（premat ure ovarian failure，POF）是指婦女在40歲以前因某種原因引起的閉經(jīng)、不孕、雌激素缺乏，以及促性腺激素水平升高為特征的一種疾?。?］。臨床主要表現(xiàn)為閉經(jīng)、不孕，兼有面色潮紅、烘熱汗出、情緒波動、白帶減少、失眠、性欲低下、陰道干澀等低雌激素的癥狀。中醫(yī)學(xué)雖然沒有卵巢早衰之名，但依據(jù)其臨床表現(xiàn)，可歸屬于 “血枯”“閉經(jīng)”“不孕”“絕經(jīng)前后諸癥”等范疇。POF的人群發(fā)生率約1%～3%，閉經(jīng)患者中約2%～10%系卵巢早衰［2］，且近年來發(fā)病率呈上升趨勢。近年來卵巢早衰的實(shí)驗(yàn)研究取得了很大進(jìn)展，主要從以下幾個方面進(jìn)行研究。

1 動物模型的研究

由于POF病因涉及多方面，其具體發(fā)病機(jī)理尚不清楚?，F(xiàn)將近年國內(nèi)外學(xué)者根據(jù)POF的基本病因建立的較成熟動物模型總結(jié)如下。

1.1化療藥物模型Yucebilgin等［3］分別給雌性小鼠腹腔注射紫杉醇、順鉑、生理鹽水，探討紫杉醇和順鉑降低小鼠原始卵泡儲備的作用。結(jié)果表明，年輕小鼠腹腔注射高劑量紫杉醇和順鉑會導(dǎo)致原始卵泡衰竭。Yeh等［4］通過觀察腹腔注射不同劑量順鉑對大鼠各系統(tǒng)的影響，以此建立了化療損傷性卵巢功能早衰動物模型。結(jié)果表明，順鉑可引起大鼠卵巢功能減退，并出現(xiàn)劑量相關(guān)性化療藥物所致卵泡細(xì)胞凋亡增加。Meirow等［5］用腹腔注射環(huán)磷酰胺形成雌性小鼠卵巢儲備的亞臨床損害模型，表明環(huán)磷酰胺對小鼠卵巢各級卵泡均有損傷，對始基卵泡的損傷明顯，且隨劑量遞增損傷程度加重。

1.2自身免疫模型

1.2.1抗原免疫動物林建華等［6］以正常小鼠卵巢勻漿抽提物作為抗原免疫兔，制備兔抗鼠卵巢抗血清，并提取抗卵巢抗體（AOA），將AOA被動免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)AOA可導(dǎo)致卵巢組織的病理改變，尤為明顯的是透明帶和顆粒細(xì)胞，隨AOA劑量的增加而損傷加重，影響排卵和受精，從而降低卵巢功能。孫曉溪等［7］分別用豬卵透明帶（PZP）、PZF單克隆抗體靶抗原和PZP的抗獨(dú)特型抗體 （Ab2）免疫小鼠，其卵巢均出現(xiàn)不同程度的卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞損傷，黃體數(shù)減少、消失；在正常對照組均無明顯損傷。蔡立榮等［8］以免疫層析分離的豬卵透明帶皮下和兩后腳掌多點(diǎn)注射免疫小鼠建立POF的動物模型，其免疫組的生長濾泡和黃體數(shù)均下降。

1.2.2初生小鼠胸腺切除模型付莉等［9］以初生3天以內(nèi)的BALB／c小鼠實(shí)施胸腺切除術(shù)后，在鼠齡24天時出現(xiàn)急性卵巢炎的表現(xiàn)，大量的卵泡受到淋巴細(xì)胞浸潤、破壞，隨后出現(xiàn)卵巢的萎縮。同時在外周血中促性腺激素水平增高、雌激素水平降低，出現(xiàn)抗卵細(xì)胞、抗ZP抗體。

1.3藥物去勢模型英國科學(xué)家Yu等［10］研究了給予超數(shù)排卵劑量的孕馬血清促性腺激素 （PMSG）所致卵巢功能下降大鼠模型，發(fā)現(xiàn)模型鼠卵母細(xì)胞數(shù)量呈下降趨勢，異常形態(tài)卵母細(xì)胞百分率均顯著升高，卵巢干重下降，但無顯著性差異。超數(shù)排卵鼠初、中、后期卵泡相呈現(xiàn)生長竇卵泡的異常形態(tài)，卵泡閉鎖呈增多趨勢，血清雄激素和雌二醇水平呈下降趨勢。

2 性激素的研究

鐘雪梅［11］以雌性幼年大鼠為研究對象，結(jié)果表明，補(bǔ)腎益精、養(yǎng)血益氣藥可顯著增加大鼠子宮及卵巢重量，提高血清E2、P含量，使陰道上皮出現(xiàn)大量的角化細(xì)胞，增加大鼠卵巢的卵泡數(shù)和卵泡直徑。其作用機(jī)理可能是通過補(bǔ)腎調(diào)節(jié)性腺軸的功能，促進(jìn)卵泡發(fā)育及排卵。此外，補(bǔ)腎活血中藥也能抑制體內(nèi)抗體的產(chǎn)生，進(jìn)而對POF的免疫機(jī)制產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。朱玲［12］等研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎養(yǎng)精之代表方左歸丸能減緩免疫性POF小鼠外周血FSH的升高，提高體內(nèi)E2水平，抑制AOAb產(chǎn)生，改善POF小鼠卵巢免疫性炎癥的損傷。Kimura等［13］研究發(fā)現(xiàn)雄激素受體缺陷型小鼠容易發(fā)生卵泡發(fā)育障礙和卵巢早衰，由此證明雄激素在卵泡發(fā)育中的重要作用。

3 自身免疫的研究

Bagavant H等［14］在動物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在體內(nèi)若有高濃度的透明帶 （ZP）自身抗體，會引起雌鼠的生育能力下降。一般認(rèn)為，ZP抗體妨礙受精、影響卵泡的發(fā)育，導(dǎo)致卵泡衰竭，從而引起絕經(jīng)。ZP3是一種重要的透明帶糖蛋白、精子受體，用ZP3免疫動物可以引起卵巢炎，而且，在用ZP3免疫后的動物血清中可以測得ZP3特異性T細(xì)胞應(yīng)答及抗ZP3杭體，抗人類重組ZP3的IgG杭體可以導(dǎo)致卵泡破壞。孫曉溪等［15］分別用豬卵透明帶（PZP）、PZP單克隆抗體靶抗原和PZP的抗獨(dú)特型抗體（Ab2）免疫小鼠，其卵巢均出現(xiàn)不同程度的卵母細(xì)胞及顆粒細(xì)胞損傷，黃體數(shù)減少、消失；在正常對照組則均無明顯損傷。Ab2免疫組IL-2水平與正常對照組無明顯差異，IL-4水平有升高趨勢；PZP免疫組IL-2水平明顯升高，而IL-4水平則無明顯差異；抗體效價與IL-4／IL-2比值呈負(fù)相關(guān)，說明隨著抗體效價的逐漸增加，IL-4／IL-2比值有逐漸下降趨勢。IL-2主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答（Th1型免疫應(yīng)答），IL-4主要介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答（Th2型免疫應(yīng)答），從IL-4／IL-2比值結(jié)果來看，正常兔IgG和Ab2免疫組主要介導(dǎo)的是Th2型免疫應(yīng)答，而PZP免疫組主要介導(dǎo)的是Th1型免疫應(yīng)答，提示自身免疫性卵巢功能損傷與Th1型免疫應(yīng)答有關(guān)。

4 自由基的研究

艾浩等［16］在順鉑致卵巢功能早衰發(fā)病機(jī)制與金雀異黃素調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，順鉑 （CDDP）用藥后小鼠卵巢丙二醛 （MDA）含量明顯升高，總氧化能力（T-AOC）明顯降低，卵巢分泌性激素功能紊亂，HE染色顯示排卵障礙的特點(diǎn)。提示氧化損傷和抗氧化能力的降低可能是CDDP造成卵巢功能早衰的一個重要原因。而應(yīng)用金雀異黃素（GEN）后，MDA含量呈現(xiàn)降低的趨勢，T-AOC也呈現(xiàn)升高的趨勢，當(dāng)給藥量達(dá)到100mg／kg以上后兩指標(biāo)均接近正常水平，卵巢功能得到明顯改善。減少氧化損傷和脂質(zhì)過氧化物的沉積，增強(qiáng)卵巢局部抗氧化能力可能有利于卵巢功能早衰疾病的治療。

5 組織形態(tài)學(xué)研究

伍娟娟等［17］在護(hù)卵湯對免疫性卵巢早衰模型小鼠CD4、+CD25+Treg和FoxP3表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，造模成功后卵巢體積縮小，各級卵泡可見，發(fā)育成熟的卵泡極少，卵泡顆粒細(xì)胞層減少，排列紊亂。部分卵泡發(fā)育不良，卵泡外形扭曲，伴有不規(guī)則地向鄰近的間質(zhì)延伸，有卵泡破碎產(chǎn)生顆粒細(xì)胞小巢或條索。卵巢間質(zhì)可見較多淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤；小鼠性周期隨著免疫時間的延長，其周期性改變逐漸消失；小鼠卵巢重量指數(shù)下降明顯。通過灌服護(hù)卵湯可使卵巢體積增加（卵巢重量指數(shù)上升），發(fā)育成熟卵泡，卵泡顆粒細(xì)胞層增多，卵巢間質(zhì)淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤減少。性周期在用藥后趨向有規(guī)律。高慧等［18］在補(bǔ)腎調(diào)沖方對卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢組織形態(tài)學(xué)的影響實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎調(diào)沖中藥可使受損的卵巢組織各級卵泡恢復(fù)生長，卵泡數(shù)明顯增多，卵泡顆粒細(xì)胞層亦增多，黃體數(shù)增多，血管豐富，間質(zhì)及纖維組織減少。電鏡下可見卵泡顆粒細(xì)胞層豐富，顆粒細(xì)胞排列有序，結(jié)構(gòu)清晰，胞質(zhì)內(nèi)線粒體較多，細(xì)胞核染色質(zhì)均勻。

6 存在問題

卵巢功能早衰是一類嚴(yán)重影響婦女生殖健康及身心健康的疾病，是當(dāng)今婦科學(xué)和生殖醫(yī)學(xué)研究的難點(diǎn)。近年來中醫(yī)藥治療卵巢功能早衰取得可喜的進(jìn)展，但尚存在著一些不容忽視的問題，主要有以下幾個方面：①研究出更加符合人類卵巢早衰病變的動物模型，最好能建立不同的證候模型使該模型更符合臨床發(fā)病病因。②加強(qiáng)對藥物作用機(jī)制研究，從不同層次進(jìn)行藥物作用的機(jī)制研究，如整體的、細(xì)胞的、分子的等，使藥物在治療該病方面的理論與現(xiàn)代科學(xué)緊密結(jié)合。③藥物成分、藥物組方的研究，如在中藥方中究竟哪些中藥具有明顯的治療卵巢功能早衰的作用，其有效成分是什么，哪些藥物可以刪減，以求用藥的合理性。

［1］徐苓，宋亦軍．卵巢早衰的臨床表現(xiàn)和診斷標(biāo)準(zhǔn)［J］．實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2003，19（4）：195-196．

［2］楊業(yè)洲．卵巢早衰［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：102-108．

［3］Samuel S，Naora H．Homeobox gene exp ression in cancer．In sights from developmental regulation and deregulation［J］．Eur J Cancer．2005，41：2428-2437．

［4］Hyman E，Kauraniemi P，Hautaniemi S，et al．Impact of DNA amp lification on gene expression patterns in breast cancer［J］．Cancer Res，2002，62：6240-6245．

［5］Hirasawa A，Saito-Ohara F，Inoue J，et al．Association of 17q21-q24 gain in ovarian clear cell adenocarcinomas with poor prognosis and identification of PPM1Dand APPBP2 as likely amp lification targets［J］．Clin Cancer Res，2003，9：1995-2004．

［6］林建華，嚴(yán)雋鴻，林其德，等．抗卵巢抗體對卵巢組織及其功能的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中華婦產(chǎn)科雜志，1998，33（1）：20-22．

［7］孫曉溪，李大金，王明雁，等．自身免疫性卵巢功能損傷與TH1／TH2型細(xì)胞因子表達(dá)關(guān)系的研究［J］．中國免疫學(xué)雜志，2001，17（2）：96-98．

［8］蔡立榮，李大金，孫曉溪，等．補(bǔ)腎活血方對小鼠實(shí)驗(yàn)性卵巢早衰防治作用的研究［J］．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，21（2））：126-129．

［9］付莉，李守柔．自身免疫性卵巢早衰［J］．國外醫(yī)學(xué)·幼保健分冊，2004，15（4）：240-242．

［10］Wook-Joon YU，Beom-Jun LEE，Sang2Yoon NAM，et al．Modulating effects of Korean ginseng saponins on ovarian function in immature rats［J］．Biol Pharm Bull，2003，26（11）：1574-1580．

［11］鐘雪梅，周靈，楊家林．補(bǔ)經(jīng)合劑促卵泡發(fā)育和排卵的實(shí)驗(yàn)研究［J］．江蘇中醫(yī)，1998，19（3）：45-46．

［12］朱玲，羅頌平，許麗綿，等．左歸丸對免疫性卵巢早衰小鼠抗卵巢抗體的影響［J］．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15（4）：435-438．

［13］Kimura S，Matsumot o T，Matsuyama R，et al．Androgen receptor function in folliculogenesis and its clinicalimp lica2 tion in premature ovarian failure［J］．TrendsEndocrinol Metab，2007，18（4）：426．

［14］Bagavant H，Adams S，Terranova P，et al．Autoimmune ovarian inflaMemation triggered by proinflammatory（Thl）T cells is compatible with normal ovarian function in mice［J］．Biol ReProd，1999，61（3）：635-642．

［15］孫曉溪，李大金，王明雁等．自身免疫性卵巢功能損傷與TH1／TH2型細(xì)胞因子表達(dá)關(guān)系的研究［J］．中國免疫學(xué)雜志，2001，17（2）：96298．

［16］艾浩，牛建昭．順鉑致卵巢功能早衰發(fā)病機(jī)制與金雀異黃素調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究［D］．北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2007：89-93．

［17］伍娟娟，尤昭玲．護(hù)卵湯對免疫性卵巢早衰模型小鼠CD4+CD25+Treg和FoxP3表達(dá)的影響［D］．長沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2009：37-39．

［18］高慧，楊涓．補(bǔ)腎調(diào)沖方對卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢組織形態(tài)學(xué)的影響［J］．國醫(yī)論壇，2008，23（1）：35-39．

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.22.123

：1672-2779（2013）-22-0164-02

吳義紅

2013-09-28）