中藥鉤藤化學(xué)成分研究

焦 揚(yáng)，王模強(qiáng)，華 丹，趙 川，唐 鋮，金美花，段宏泉，唐生安

（1.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070；2.四川綿竹鴻基制藥有限責(zé)任公司，綿竹618200）

中藥鉤藤以茜草科鉤藤屬鉤藤Uncaria rhynchophylla（Miq.）Jacks、大葉鉤藤Uncariamacrophylla Wall、毛鉤藤Uncaria hirsute Havil、華鉤藤Uncaria sinensis（Oliv.）Havil或無柄果鉤藤Uncaria sessilifmctus Roxb的帶鉤莖枝為主[1]。以帶鉤的莖枝入藥。春秋季采收，除去葉片，切斷，曬干。主要分布于江西、廣東、廣西、湖南、云南等地。其性微寒味甘，歸肝、心包經(jīng)，可清熱平肝、熄風(fēng)定驚。用于心痛眩暈，感冒夾涼，驚癇抽搐，高血壓等癥[2-3]。迄今從中分離鑒定的化合物結(jié)構(gòu)類型主要為生物堿類、三萜類和黃酮類[4]。本文以天然藥物化學(xué)研究手段，對中藥鉤藤（Uncaria rhynchophylla）進(jìn)行了提取分離，采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和HPLC制備色譜和重結(jié)晶方法分離純化得到單體化合物，采用1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HMBC、HSQC等有機(jī)波譜方法鑒定化合物結(jié)構(gòu)。

1 儀器與方法

1.1 儀器、試劑及材料 核磁共振儀：Bruker AV 400instrument（TMS內(nèi)標(biāo)）；液質(zhì)聯(lián)用色譜儀：Alliance 2695,Quattro Micro TM ESI（Waters）；半制備高效液相色譜儀：日本分光公司（JASCO），PU-2089（泵），RI-2031和UV-2075（檢測器）；制備HPLC色譜柱：C-18反相柱：YMC-Pack ODS-A SH-343-5（20mm×250mm），GPC（凝膠滲透色譜柱）：Shodex, Asahipak GS-20G，（20mm×500mm×2）；凝膠柱色譜：Toyopearl HW-40C（Tosoh）；氘代試劑（ALDRICH公司）；柱色譜和薄層色譜用硅膠均系青島海洋化工廠生產(chǎn)，所用試劑均系分析純。

本文所用藥材鉤藤于2009年5月購自河北安國藥材市場，由天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室周曄教授鑒定為鉤藤Uncaria rhynchophylla（Miq.）Jacks。標(biāo)本存放于天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。

1.2 提取分離 鉤藤20kg，粉碎，用氨水浸潤，然后用80%的乙醇冷浸提取3次，每次24h，提取液過濾，濾液經(jīng)濃縮至無醇味得總浸膏，加1%的鹽酸溶液溶解，酸水液用氨水調(diào)節(jié)pH值為9～10，繼而用二氯甲烷進(jìn)行萃取，萃取液經(jīng)濃縮得總生物堿提取物（43.5g）。

鉤藤的總生物堿提取物（43.5g），以硅膠柱層析（硅膠600g，300～400目）分離，依次用CH2Cl2→CH2Cl2∶EtOAc（20∶1→10∶1→5∶1→2∶1）→EtOAc→MeOH梯度洗脫，通過TLC鑒定合并類似組分。將上述組分樣品分別經(jīng)過硅膠柱常壓柱，凝膠柱層析Sephadex LH-20，凝膠滲透柱色譜Toyopeal HW-40，制備薄層色譜以及制備高效液相色譜分離純化，分別得到化合物1（11.2mg），2（10.8mg），3（6.5mg），4（11.2mg），5（33.0mg），6（14.6mg）。

2 結(jié)果

從鉤藤的總生物堿提取物中分離得到6個(gè)化合物，見圖1。

圖1 從中藥鉤藤中分離得到的化合物Fig 1 Compounds 1～6isolated from Uncaria rhynchophylla

2.1 化合物1淺黃色固體，ESI-MS m/z:765[2M+ H]+,1H-NMR（400MHz,CDCl3）給出一組芳環(huán)質(zhì)子信號[δH7.53（1H,d,J=8.0Hz,H-12）,7.47（1H,d, J=8.0Hz,H-9）,7.21（1H,t,J=8.0Hz,H-10）,7.15（1H,t,J=8.0Hz,H-11）],3個(gè)烯質(zhì)子信號 [δH7.30（1H,s,H-17）,5.29（1H,m,H-19）,5.00（1H,J=15.2Hz,H-18a）,4.94（1H,J=11.0Hz,H-18b）],并給出了兩個(gè)甲氧基信號：[δH3.78（3H,s,17-OCH3），3.67（3H,s,22-OCH3）。13C-NMR（100MHz,CDCl3）δC130.2（C-2）,70.6（C-3）,68.4（C-5）,19.9（C-6）, 105.8（C-7）,126.4（C-8）,118.0（C-9）,122.4（C-10）, 119.7（C-11）,112.1（C-12）,127.5（C-13）,26.7（C-14）,33.0（C-15）,109.8（C-16）,160.4（C-17）,117.4（C-18）,136.7（C-19）,37.3（C-20）,62.8（C-21）, 168.5（C-22），61.8（17-OCH3），51.4（22-OCH3）。分析化合物1的1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)其與文獻(xiàn)[5-7]報(bào)道的去氫硬毛鉤藤堿的結(jié)構(gòu)相似，但是在N-4周圍碳的化學(xué)位移發(fā)生了較大的變化，化合物1的碳化學(xué)位移相對于去氫硬毛鉤藤堿明顯向低場偏移；再綜合解析2D NMR波譜數(shù)據(jù)（1H-1H COSY,HSQC，HMBC，ROESY）的相關(guān)信號，得到與去氫硬毛鉤藤堿相同的結(jié)構(gòu)，但是質(zhì)譜數(shù)據(jù)提示化合物1比去氫硬毛鉤藤堿多16當(dāng)量的分子量，結(jié)合化合物1的碳譜化學(xué)位移變化，推斷化合物1為去氫硬毛鉤藤堿的氮氧化物（hirsuteine N-oxide），該化合物為新天然產(chǎn)物，本文首次報(bào)道了它的波譜數(shù)據(jù)。

2.2 化合物2淺黃色固體，ESI MS m/z:545[M+H]+,1H-NMR（400MHz,CDCl3）:δH2.61（1H,m,Ha-5）, 2.71（2H,m,H-6）,3.08（1H,m,5-Hb）,7.47（1H,d, J=7.6Hz,9-H）,6.99（1H,t,J=7.6Hz,10-H）, 7.01（1H,t,J=7.6Hz,11-H）,7.32（1H,d,J=7.6Hz, 12-H）,1.76（1H,m,14-Ha）,2.02（1H,m,14-Hb）, 3.20（1H,m,15-H）,7.56（1H,s,17-H）,2.90（1H, dd,J=10.2,6.6Hz,18-Ha）,3.43(1H,d,J=10.2Hz, 18-Hb）,4.76（1H,br d,J=7.2Hz,19-H）,1.73（1H,m, 20-H）,5.76（1H,d,J=9.2Hz,21-H）,3.58（3H,s, -OCH3）,4.66（1H,d,J=8.0Hz,1′-H）,3.65（1H,m, 6′-Ha）,3.89（1H,dd,J=10.4,1.5Hz,6′-Hb）。

13C-NMR（DMSO-d6）:δC133.6（C-2）,90.9（C-3）, 52.2（C-5）,22.0（C-6）,109.7（C-7）,125.6（C-8）, 119.1（C-9）,119.1（C-10）,122.0（C-11）,111.9（C-12）,136.7（C-13）,42.2（C-14）,25.3（C-15）,110.1（C-16）,152.9（C-17）,58.4（C-18）,72.7（C-19）, 39.5（C-20）,96.8（C-21）,167.0（C-22）,51.1（-OCH3）,100.7（C-1′）,73.7（C-2′）,77.0（C-3′）,70.6（C-4′）,77.4（C-5′）,62.0（C-6′）。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物2為卡達(dá)賓（cadambine）[8-9]。

2.3 化合物3淺黃色固體，1H-NMR（400MHz, CDCl3）:δH8.06（1H,br s,NH-1）,7.15（1H,s,H-17）, 7.40（1H,d,J=7.2Hz,H-9）,7.18（1H,t,J=7.2Hz, H-11）,7.04（1H,t,J=7.2Hz,H-10）,6.85（1H,d,J= 7.2Hz,H-12）,5.52（1H,m,H-19）,4.97（1H,br d, J=16.0Hz,H-18a）,4.90（1H,dd,J=1.6,10.3,H-18b）,3.69（3H,s,OCH3）,3.57（3H,s,COOCH3）,3.30（1H,t,J=8.0Hz,H-3）,3.20（1H,dd,J=3.8,10.7Hz, H-15）,2.80（1H,m,H-20）,2.55-2.48（3H,m,H-5a, 5b,21b）,2.38（1H,m,H-21a）,2.10-1.96（2H,m,H-6a,6b）,1.56（1H,m,H-14b）,1.09（1H,t,J=9.2Hz, H-14a）。13C-NMR（100MHz,CDCl3）:δc 181.8（C-2）,168.8（C-22）,159.4（C-17）,140.1（C-19）,139.6（C-13）,133.9（C-8）,127.5（C-11）,125.2（C-9）, 122.3（C-10）,115.3（C-18）,112.0（C-16）,109.3（C-12）,72.0（C-3）,61.3（C-21）,58.7（-OCH3）,56.8（C-7）,54.0（C-5）,51.0（-OCH3）,42.5（C-20）,37.7（C-15）,35.5（C-6）,29.6（C-14）。其碳?xì)浜舜艛?shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]中報(bào)道的去氫鉤藤堿數(shù)據(jù)一致，可鑒定該化合物為去氫鉤藤堿（corynoxeine）。

2.4 化合物4白色粉末，ESI MS m/z:499[M+H]+。1H-NMR（400MHz,DMSO-d6）δH:10.91（1H,br s,H-l）,4.92（1H,d,J=11.0Hz,H-3）,2.93（1H,m,H-5）, 5.06（1H,m,H-5）,2.70（1H,m,H-6）,2.75（1H,m, H-6）,7.42（1H,d,J=7.6Hz,H-9）,6,98（1H,t,J= 7.6Hz,H-10）,7.05（1H,t,J=7.6Hz,H-11）,7.31（1H,d,J=7.6Hz,H-12）,l.30（1H,m,H-14）,2.45（1H,m,H-14）,2.95（1H,m,H-15）,7.32（1H,s,H-17）,5.17（1H,dd,J=2.5,10.0Hz,H-18a）,5.30（lH, dd,J=2.5,12.0Hz,H-18b）,5.45(1H,m,H-19）, 2.70（1H,m,H-20）,5.50（1H,br s,H-21）,4.56（1H, d,J=7.9Hz,H-1’）;13C-NMR(100MHz,DMSO-d6）: δc 134.6（C-2）,52.9（C-3）,39.2（C-5）,21.2（C-6）, 108.2（C-7）,126.7（C-8）,118.3（C-9）,119.1（C-10）, 121.5（C-11）,111.6（C-12）,136.7（C-13）,31.5（C-14）,26.2（C-15）,108.3（C-16）,147.0（C-17）,120.4（C-18）,133.4（C-19）,42.9（C-20）,95.4（C-21）, 162.9（C-22）,98.4（C-l’）,73.7（C-2’）,77.0（C-3）, 70.6（C-4’）,77.7（C-5’）,61.5（C-6’）。以上MS，1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故確定化合物4為喜果苷（vincoside Lactam）。

2.5 化合物5白色粉末，與鉤藤堿對照品共薄層，Rf值完全一致;經(jīng)HPLC共色譜，與鉤藤堿對照品保留時(shí)間完全一致，且混合熔點(diǎn)不下降。由此，可鑒定該化合物為鉤藤堿（rhynchophylline）。

2.6 化合物6白色粉末，與異鉤藤堿對照品共薄層，Rf值完全一致；經(jīng)HPLC共色譜，與異鉤藤堿對照品保留時(shí)間完全一致，且混合熔點(diǎn)不下降。由此，可鑒定該化合物為異鉤藤堿（isorhynchophylline）。

3 討論

鉤藤為中醫(yī)臨床的常用中藥，在我國藥源豐富。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，鉤藤類生物堿有較強(qiáng)的降壓作用以及對心臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響等多種藥理活性。因此，對鉤藤進(jìn)行化學(xué)成分研究，最大限度地開發(fā)鉤藤的藥用價(jià)值，是非常必要的。本文從中藥鉤藤中分離得到的去氫硬毛鉤藤堿的氮氧化物（hirsuteine N-oxide）為一個(gè)新天然產(chǎn)物，該研究結(jié)果進(jìn)一步豐富了鉤藤的化學(xué)成分研究內(nèi)容。

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