阿爾茨海默病血漿中IL—6、Aβ1—40、M—CSF、IL—1β、TNF—α的臨床診斷意義

晏燕 王萍

[摘要]目的探討血漿中IL-6、Aβ1-40、M-CSF、IL-1β、TNF-α對阿爾茨海默?。ˋD）的臨床診斷意義。方法選擇AD患者組74例，另選取100名健康老年者作為對照組。應(yīng)用ELISA方法檢測血漿Aβ1-40、IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平。結(jié)果（1）AD患者血漿Aβ1-40濃度[（108.4±6.5）pg/mL]與對照組[（103.5±7.1）pg/mL]比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α濃度分別為（180.9±50.6）pg/mL、（524.6±68.1）pg/mL、（40.45±6.14）pg/mL、（60.52±5.64）pg/mL，與正常對照組[（75.2±45.1）pg/mL、（320.5±80.8）pg/mL、（30.46±7.50）pg/mL、（36.64±15.32）pg/mL]比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論檢測AD患者血漿中Aβ1-40濃度對診斷無意義，而IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平的檢測可以成為臨床輔助診斷AD的生物學(xué)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]阿爾茨海默??；IL-6；Aβ1-40；M-CSF；IL-1β；TNF-α

[中圖分類號]R749.1+6 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1674-4721（2012）12（a）-0017-03

阿爾茨海默?。ˋlzheimer'sdisease，AD）是一種發(fā)生于老年和老年前期最常見的以進(jìn)行性癡呆為特征的原發(fā)性大腦退行性疾病，其主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶減退、認(rèn)知障礙、個性改變及皮層分離癥，自制力和理解力喪失，晚期則為記憶力完全喪失，語言與行為能力喪失。病程一般為10年左右，最后呈嚴(yán)重癡呆以至植物人狀態(tài)，不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，而且給家庭和社會帶來沉重負(fù)擔(dān)，隨著社會老齡化現(xiàn)象的日益嚴(yán)重，AD已成為引起死亡的主要疾病之一[1]。目前AD的臨床診斷只是可能AD，最終確診仍需靠腦組織病檢，發(fā)現(xiàn)一定數(shù)量的神經(jīng)炎斑（neuriticplagues）和神經(jīng)元纖維纏結(jié)（neurofibrillarytangles）作為確診AD的生物學(xué)依據(jù)外，AD患者生前仍無其他可靠的生物學(xué)診斷指標(biāo)。由于缺乏生物學(xué)標(biāo)志，AD的臨床診斷主要基于各種以排除為主的診斷標(biāo)準(zhǔn)，它們提高了AD臨床診斷的準(zhǔn)確率，但對早期AD與血管性癡呆（vasculardementia，VD）及正常衰老的鑒別卻較困難，這對AD的早期干預(yù)十分不利。雖然腦組織活檢可為其生前診斷提供重要的確診依據(jù)，但還很難用于臨床常規(guī)開展。因此，尋找AD生（化）物標(biāo)記物已成為當(dāng)前國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者極力關(guān)注的熱點(diǎn)課題。本研究通過聯(lián)合觀察幾種指標(biāo)如血清中IL-6、Aβ1-40、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平的變化，企圖尋找AD患者早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)，延緩發(fā)病過程，提高患者生活質(zhì)量，減少對家庭和社會造成的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2-3]。

1資料與方法

1.1一般資料

選自2009年1月～2011年1月本院門診和住院部患者采用簡易智能狀態(tài)量表（MMSE）進(jìn)行癡呆篩選，MMSE在相應(yīng)教育程度分值以下為癡呆（文盲≤17分，小學(xué)文化≤20分，初中以上文化≤24分）。AD患者組74例，其中，男41例，女33例；年齡60～72歲，平均（65.8±5.8）歲。均符合美國國立神經(jīng)病語言障礙卒中研究所（NINCDS）和Alzheimer病及相關(guān)疾病協(xié)會（ADRDA）的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。選取100名健康老年者作為對照組，其中，男58例，女42例；年齡58～75歲，平均（64.2±6.7）歲。兩組間年齡、性別構(gòu)成比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。均排除其他神經(jīng)系統(tǒng)及其他系統(tǒng)和物質(zhì)原因所致的癡呆。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)本采集 取靜脈血5mL，置聚丙烯EDTA抗凝管中，于4℃低溫以1000r/min離心3min，取上清于-70℃冰箱內(nèi)保存。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），操作嚴(yán)格按試劑盒說明書要求進(jìn)行，IL-6、Aβ1-40、M-CSF、IL-1β、TNF-α試劑盒由晶美生物工程有限公司提供。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，對兩組性別構(gòu)成進(jìn)行卡方一致性檢驗(yàn)，對兩組年齡、兩兩組間比較采用方差分析。統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS13.0，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

AD患者血漿Aβ1-40濃度[（108.4±6.5）pg/mL]與對照組[（103.5±7.1）pg/mL]比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。AD患者血漿IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平分別為（180.9±50.6）pg/mL、（524.6±68.1）pg/mL、（40.45±6.14）pg/mL、（60.52±5.64）pg/mL，與正常對照組[（75.2±45.1）pg/mL、（320.5±80.8）pg/mL、（30.46±7.50）pg/mL、（36.64±15.32）pg/mL]比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

3討論

阿爾茨海默?。ˋD）是最常見的成人癡呆病，雖然國內(nèi)外許多學(xué)者進(jìn)行了大量的研究工作，AD的病因及發(fā)病機(jī)制仍然不十分清楚[4]。AD的診斷目前主要仍采取排除法，依靠詳細(xì)的病史、認(rèn)知功能檢查、體格檢查及有關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查包括腦CT、PET、腦電地形圖等，以排除其他原因引起的癡呆。雖然很多學(xué)者都在試圖尋找AD的特異性標(biāo)志，以便對AD做出早期和確切的診斷，但目前缺乏確切可靠的資料，尚無公認(rèn)的單一生物學(xué)指標(biāo)可以確診，最終確診需進(jìn)行腦病理組織學(xué)檢查，依據(jù)發(fā)現(xiàn)一定數(shù)量的神經(jīng)炎斑和神經(jīng)元纖維纏結(jié)。雖然腦組織活檢可為其生前診斷提供重要的依據(jù)，但還很難用于臨床常規(guī)開展，因此，找到大腦中樞神經(jīng)組織以外的能夠早期發(fā)現(xiàn)和確診AD的生物學(xué)指標(biāo)是至關(guān)重要的[5-6]。

大量尸檢資料證實(shí)，AD腦內(nèi)存在炎癥病理改變，而近年來的體外研究和動物體內(nèi)誘發(fā)實(shí)驗(yàn)表明，異常沉積的Aβ可能是炎癥反應(yīng)的激發(fā)因子，它持續(xù)地激活炎癥修復(fù)機(jī)制，并將正常情況下的急性反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝装Y損傷。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及其產(chǎn)生的多種炎性產(chǎn)物介導(dǎo)了這一病理損傷過程。在Aβ刺激下，小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生IL-1是始動環(huán)節(jié)，IL-1除上調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)其他細(xì)胞因子外，尚誘導(dǎo)補(bǔ)體、急性期蛋白、氧自由基、前列腺素、一氧化氮、β-淀粉樣前體蛋白（β-APP）等生成增加。這些分子各自通過作用于膠質(zhì)細(xì)胞或神經(jīng)元，促進(jìn)其他炎性分子的產(chǎn)生，這種交互作用促成了慢性炎癥反應(yīng)的形成和炎性產(chǎn)物水平持續(xù)升高，對神經(jīng)生長與神經(jīng)可塑性、損傷與變性及各種死亡機(jī)制產(chǎn)生廣泛的影響[7-9]。

Aβ淀粉樣蛋白源于一種大的跨膜蛋白、由淀粉樣前體蛋白（APP）水解而成，由39～42個氨基酸組成，而APP具有神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用。APP可被α-、β-和γ-分泌酶裂解。關(guān)鍵的第一步是由β-分泌酶（BASE）或者α-分泌酶[ADAM10或ADAN7（TACE）]消化，成為無毒的較小的產(chǎn)物[10]。第二步是γ-分泌酶再對經(jīng)β-分泌酶分解的產(chǎn)物進(jìn)行裂解，成為有毒的Aβ1-42肽和Aβ1-40肽。Aβ1-42含有42個氨基酸，在老年斑的形成中可能起著重要作用；Aβ1-40在C端少兩個氨基酸，存在于AD患者和正常人群中，它可能是細(xì)胞代謝的非病理性產(chǎn)物[4]。本研究證明，AD患者血漿Aβ1-40濃度與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示檢測Aβ1-40濃度對診斷AD無意義。

隨著神經(jīng)免疫研究的進(jìn)展，已有不少報道指出AD與免疫因子密切相關(guān)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)AD患者血清中白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平升高，亦有文獻(xiàn)報道，在AD患者血清中巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）水平明顯升高[11-12]。而M-CSF是一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，通常在免疫應(yīng)答的早期階段上調(diào)，誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生前炎癥細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6、TNF-α等，啟動炎癥反應(yīng)。因此，在AD的早期階段M-CSF明顯上調(diào)，表明其在AD的病理發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。

基于上述發(fā)現(xiàn)和理論分析，本研究通過聯(lián)合觀察幾種指標(biāo)如血清中IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α等水平的變化，找出各指標(biāo)與AD的相關(guān)性，以期尋找AD患者早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)，鑒別癡呆類型，并且為監(jiān)視癡呆患者的病情變化提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；通過觀察以上血清學(xué)指標(biāo)，企圖達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早預(yù)防、早治療，進(jìn)而延緩AD的病程，改善預(yù)后，提高生活質(zhì)量；從以上多個指標(biāo)入手，以期進(jìn)一步深入研究導(dǎo)致AD發(fā)病的幾種不同的病理生理機(jī)制。

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（收稿日期：2012-10-15 本文編輯：陳 ?。?/p>