青風(fēng)藤植物不同部位中青藤堿的含量測定

謝麗明 李榮貴 巴文強

（1廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣州510120；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州510006）

青風(fēng)藤植物不同部位中青藤堿的含量測定

謝麗明1李榮貴1巴文強2

（1廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣州510120；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州510006）

目的測定青風(fēng)藤植物不同部位中青藤堿的含量，為合理有效地開發(fā)青風(fēng)藤中藥資源提供依據(jù)。方法 采用高效液相色譜法，以Diamonsil-C18（4.6×250mm，5μm）為色譜柱，甲醇-水（50∶50）為流動相，檢測波長為262nm，流速：1.0ml／min；進樣量10μl條件下測定。結(jié)果 青藤堿在0.27μg～13.50μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.46%，RSD值為1.66%；青風(fēng)藤根中青藤堿的平均含量為1.65%，藤莖皮為1.35%，莖為0.28%，葉為0.11%。結(jié)論 不同部位青風(fēng)藤中青藤堿的含量具有較大差異，其中根中最高，藤莖皮次之，莖和葉中較低。

青風(fēng)藤；青藤堿；高效液相色譜法

青風(fēng)藤為防己科植物青藤Sinomenium acutum（Thunb.）Rehd.et Wils.和毛青藤Sinomenium acutum（Thunb.）Rehd.et Wils.var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥藤莖，功能祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，利小便，用于治療風(fēng)濕痹痛，關(guān)節(jié)腫脹，麻痹瘙癢等癥［1］。中醫(yī)應(yīng)用青風(fēng)藤治療疾病已有千年的歷史，《本草匯言》：清風(fēng)藤，散風(fēng)寒濕痹之藥也，能舒筋活血，正骨利髓，故風(fēng)病軟弱無力，并勁強偏廢之證，久服常服，大建奇功?！侗静荼阕x》：凡藤蔓之屬，皆可通經(jīng)入絡(luò)，此物善治風(fēng)疾，故一切歷節(jié)麻痹皆治之，浸酒尤妙。

《日本藥局方》第15改正版收載的青風(fēng)藤，以根入藥，治療肌肉、神經(jīng)和關(guān)節(jié)等疼痛。《陜西中草藥》收載的青風(fēng)藤，也是以根入藥?！侗静輬D經(jīng)》：“清風(fēng)藤，生天臺山中。其苗蔓延木上，四時常有，彼土人采其葉入藥?！眲t是用其葉入藥，這與中國藥典規(guī)定的青風(fēng)藤以藤莖入藥不同［2］。青風(fēng)藤中的化學(xué)成分主要有青藤堿、胡蘿卜苷、尖防己堿、蝙蝠葛波酚堿等［3-4］。有文獻報道從青風(fēng)藤根中提取青藤堿的

研究［5-6］。青藤堿的含量測定方法有反相離子對色譜法、RPHPLC、HPLC等［7-9］。本試驗建立了青藤堿的HPLC測定法，對青風(fēng)藤的根、藤莖皮、莖枝和葉進行測定，為青風(fēng)藤入藥部位選擇及合理利用資源提供試驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器Summit P680型高效液相色譜儀（德國Dionex公司）；色譜柱Diamonsil柱-C18（4.6mm×250mm，5μm，美國菲羅門公司）；KQ5200DE型數(shù)控超聲清洗器（功率：200W，江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；AUW120電子分析天平（日本島津）；中藥粉碎機（浙江瑞安市永歷制藥機械有限公司）。

1.2試藥青藤堿對照品（含量測定用，中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110774-200806）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純；青風(fēng)藤植物在秋末采自廣東，經(jīng)鑒定為防己科植物青藤Sinomenium acutum（Thunb.）Rehd.et Wils.。將采來的新鮮植物除去雜質(zhì)，分為青風(fēng)藤根、藤莖皮、莖、葉，曬干，粉碎、過3號篩制得試驗樣品，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備精密稱取五氧化二磷干燥至恒重的青藤堿對照品5.4mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.54mg／ml的對照品溶液，置4℃冰箱保存，備用。

2.2供試品溶液制備精密稱定青風(fēng)藤根的粉末0.5g，置100ml具塞錐形瓶中，加入70%乙醇15ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率200W，頻率為30k Hz）30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液置蒸發(fā)皿中，水浴揮干溶劑，殘渣加入水15mL，加稀HCl（1%）調(diào)節(jié)pH至2，充分?jǐn)嚢?，離心，棄去沉淀，用氨試液調(diào)pH至11，加氯仿使氯仿：溶液為1∶2，分別萃取3次，合并氯仿，水浴揮干溶劑，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得供試品溶液，置4℃冰箱保存，備用。

2.3色譜條件與系統(tǒng)適用性色譜柱：Diamonsil-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（50∶50，V／V），加入0.25%的乙二胺作為改性劑調(diào)節(jié)p H；檢測波長：262nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml／min；進樣量：10μl。分別取對照品溶液、供試品溶液進樣，記錄色譜圖。青藤堿保留時間約為9.8min，與其他組分達基線分離，分離度不低于2.0，理論塔板數(shù)以青藤堿峰面積計算不低于1500。

2.4線性關(guān)系考察分別精密吸取上述青藤堿對照品溶液0.5、1、5、10、15、20、25μl進樣，測定色譜峰面積積分值，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，青藤堿對照品進樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算求得回歸方程為：Y= 568.656X-16.257，r=0.9997（n=7）。結(jié)果表明，青藤堿在0.27～13.50μg質(zhì)量范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗精密吸取青藤堿對照品溶液10μl進樣，重復(fù)6次，測定青藤堿峰面積積分值，并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值（RSD），結(jié)果RSD=0.38%，說明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗精密吸取同一份供試品溶液各10μl，分別于1、2、4、8、12h進樣，測定，青藤堿峰面積積分值RSD為1.12%（n=5），表明供試品溶液12h以內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重現(xiàn)性試驗取同一批青風(fēng)藤根粉末0.5g，5份，分別按照“2.2”方法制備成供試品溶液，精密吸取10μl，進行測定。結(jié)果青藤堿RSD為1.68%（n=5），表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.8回收率試驗取已知含量的青風(fēng)藤根粉末樣品約0.25g，5份，精密稱定，精密加入一定量的青藤堿對照品溶液，揮干，分別按照“2.2”方法制備成供試品溶液，精密吸取10μl，進行測定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算青藤堿回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明青藤堿平均回收率為99.46%，RSD值為1.66%。本方法準(zhǔn)確性好。

表1 加樣回收率測定結(jié)果（%）

2.9青風(fēng)藤中根、藤莖皮、莖枝、葉中的青藤堿含量測定分別稱取不同部位的藥材粉末，各取約0.5g，精密稱定，按照“2.2”方法制備供試品溶液，采用HPLC外標(biāo)一點法，分別精密吸取對照品溶液10μl與各供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，計算各部位中青藤堿的含量。結(jié)果見表2。測得青風(fēng)藤根中青藤堿的平均含量為1.65%，藤莖皮為1.35%，莖枝為0.28%，葉為0.11%。

表2 青風(fēng)藤不同部位青藤堿含量測定結(jié)果（%）

3 討論

不同地區(qū)的氣候、土壤，不同采收季節(jié)等因素對藥材的質(zhì)量也有很大的影響。大多數(shù)文獻都是以產(chǎn)自北方的青風(fēng)藤作為研究對象，本試驗則是對華南地區(qū)

生長的青風(fēng)藤來進行研究，對開發(fā)華南地區(qū)青風(fēng)藤資源提供了依據(jù)。試驗結(jié)果表明，同株青風(fēng)藤不同部位中青藤堿的含量不同，根中青藤堿含量最高，藤莖皮次之，莖和葉較低。藤莖皮和莖比較可知青藤堿在莖中主要存在于韌皮部，原因可能是藤莖中間木質(zhì)化程度比外圍要高。

《中國藥典》2010年版收載青風(fēng)藤的入藥部位為青風(fēng)藤植物的干燥藤莖，且臨床上大多是以藤莖入藥。根據(jù)試驗結(jié)果可知，青風(fēng)藤植物根中的青藤堿含量最高，葉中最低，可以考慮將青風(fēng)藤根作為新的藥用部位收載。

青藤堿的提取方法有很多，本試驗是以70%乙醇作為溶媒，超聲提取法提取，能夠有效地減少加熱提取過程中青藤堿的損失。在青藤堿純化中，根據(jù)文獻［10］加稀HCl溶液方法，其目的是將提取的青藤堿轉(zhuǎn)化為青藤堿的鹽酸鹽，水溶性增加，有利于除去酸不溶性雜質(zhì)。本試驗所選用青藤堿的提取方法雖然步驟多，但所含雜質(zhì)較少，測定效果較好。

試驗的流動相曾選用《中國藥典》2010年版收載的甲醇-磷酸鹽緩沖液（0.005mol／L磷酸氫二鈉溶液，以0.005mol／L的磷酸二氫鈉溶液調(diào)節(jié)p H至8.0，再以1%三乙胺調(diào)節(jié)pH至9.0）（55∶45），配制過程煩瑣，進樣后峰形拖尾，影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。參考文獻方法［11-12］改進流動相，采用甲醇-水（50∶50，V／V），加入0.25%的乙二胺作為改性劑調(diào)節(jié)p H作為流動相，結(jié)果色譜圖上峰形較好，不拖尾，保留時間適宜。

［1］藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：182.

［2］王巖，周莉玲，李銳.青風(fēng)藤的研究進展［J］.中藥材，2002，25（3）：209-211.

［3］班小紅，黃筑艷，等.青風(fēng)藤化學(xué)成分的研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（8）：1831-1832.

［4］黃筑艷，張援虎，周嵐.青風(fēng)藤化學(xué)成分的研究（II）［J］.中草藥，2009，40（2）：193-196.

［5］陳曦.HPLC法青風(fēng)藤根中青藤堿含量的測定及其提取工藝的優(yōu)化［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（29）：16236-16238.

［6］潘娓婕，李曉寧，張尊聽，等.超聲法從青風(fēng)藤根中提取青藤堿［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15（2）：127-129.

［7］王慧，葉卿，趙亮，等.反相離子對色譜法測定青風(fēng)藤中青藤堿的含量［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010，31（2）：193-195.

［8］嚴(yán)華，馬雙成.RP-HPLC法測定青風(fēng)藤中青藤堿的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26（2）：201-203.

［9］王海龍，趙慶華，王寶全，等.HPLC法測定神痛靈膠囊中青藤堿的含量［J］.齊魯藥事，2012，31（1）：17-18.

［10］方達任，張志.復(fù)方祛風(fēng)緩釋片中青風(fēng)藤的提取純化工藝研究［J］.湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，13（6）：28-30.

［11］張英豐，周莉玲，汪小根，等.青藤堿微透析體外回收率的測定及影響因素的研究［J］.中藥材，2005，28（12）：1064-1067

［12］張英豐，王利勝，周莉玲.微透析法進行鹽酸青藤堿肌注給藥的藥代動力學(xué)研究［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16（8）：109-112.

焦樹德經(jīng)驗方——天麻丸

天麻180g，牛膝180g（二藥用酒同浸三日，焙干用）、萆薢180g，元參180g，杜仲210g（酒炒去絲）、全當(dāng)歸300g，羌活300g，獨活150g，炮附子30g，生地黃500g（有一方無獨活）上藥研為細(xì)末，煉蜜為丸，如梧桐子大，每服50～70丸，病重者可加至100丸，清晨空腹時，溫開水送服，每日1次。

本方為養(yǎng)血、祛風(fēng)、補腎、壯筋骨之劑?？捎糜谥委熌I經(jīng)虛熱生風(fēng)，筋脈牽掣，遍身疼痛，手足麻木，口眼歪斜，半身不遂等癥。

方中雖然重用生地、當(dāng)歸補腎養(yǎng)血為主藥，但其妙用全在天麻、牛膝同浸同焙，以使風(fēng)痰濁濕下降而不上逆作為輔藥。又以萆薢、杜仲益腎、祛風(fēng)濕、壯筋骨，玄參養(yǎng)腎陰壯水以制火，附子補腎陽溫經(jīng)以通絡(luò)，又可使生地、玄參之“陰得陽助，而源泉不竭”，共為佐藥。更以羌獨二活祛太陽風(fēng)、搜少陰伏風(fēng)以驅(qū)除風(fēng)邪為使藥。諸藥扶正祛邪，標(biāo)本合治，具有養(yǎng)血、祛風(fēng)、壯筋骨、補腎固本之功能。

近些年來，臨床上以此方隨證加減治療由腎虛風(fēng)動而出現(xiàn)頭暈?zāi)炕?、頭重腳輕、兩腿無根、肢體麻木或抽痛的高血壓?。ㄑ獕翰桓叩囊部煞茫??？稍僮眉由魇?、生石決明、鉤藤、澤瀉、桑寄生、菊花之類的藥物。

《靈樞·海論》說：“腦為髓之?！保终f：“髓海不足，則腦轉(zhuǎn)耳鳴，脛酸眩冒，目無所見，懈怠安臥。”本方中補腎藥占了很大比重，所以我在治療眩暈、耳鳴以及神經(jīng)衰弱等病出現(xiàn)頭暈、耳鳴、視力減退、健忘、腰腿酸軟、全身倦怠等癥狀，經(jīng)辨證屬于腎虛證者，常用此方加生石決明30g（先煎），養(yǎng)肝陰而潛肝陽，兼能明目；加遠志10～12g，夜交藤15～20g，交通心腎而安神；靈磁石15～25g（先煎），納腎氣而治耳鳴；菊花10g，鉤藤15～20g，祛風(fēng)明目，配合天麻而除頭暈。將原方藥物參考其比例約減少20倍，作為湯劑煎服，每收良效。請參考試用。

本方與風(fēng)引湯（用量加倍）相合，再加生石決明250g，橘紅180g，澤瀉180g，鉤藤180g，作為丸藥，對年過45歲以上之人經(jīng)常出現(xiàn)頭暈眼花、頭脹頭痛、耳鳴健忘、腰酸膝軟、兩腳無根，或血壓時常偏高，或肢體、手指、足趾時有麻木、欲作中風(fēng)者，經(jīng)常服用此丸，可有治療和預(yù)防中風(fēng)的作用（血壓不高有上述諸癥者，也可以用）。

本方與天麻散（《衛(wèi)生寶鑒》方：天麻、半夏、茯苓、白術(shù)，共為細(xì)末，每用3～4g，姜湯水送服）均治中風(fēng)、半身不遂、口眼歪斜、語言艱澀。但本方主用于腎虛、血虛而虛風(fēng)內(nèi)動之證，天麻散則主用于痰濁內(nèi)盛，風(fēng)痰上擾之證。中風(fēng)病名雖同，但二方所主之證卻不同，臨癥者必須加以辨認(rèn)，以免誤治。

附注：古人書中還有一方無獨活，而方中之羌活要求用獨本者（即獨一莖者），謂此“即真獨活，不必更加也。”附此供參考。

Determination of Sinomenine in Different Parts of Caulis Sinomenii Medicinal Materials with HPLC

Xie Liming Li Ronggui Ba Wenqiang
（1 Guangdong Province Hospital of Chinese Medicine，Guangzhou 510120，China；2 College of Chinese Traditional Medicine，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of sinomenine in different parts of caulis sinomenii medicinal materials. Methods Stationary phase was Diamonsil-C18 column（4.6×250mm，5μm）；mobile phase was methanol-water（50∶50）；UV detection wavelength was set at 262nm，and the flow rate was 1.0mL／min.Results Sinomenine showed the good linear relationship in the range of 0.27μg～13.50μg（r=0.9997）.The average recovery rate was 99.46%with RSD1.66%（n=7）.The average content of sinomenine in root of caulis sinomenii was 1.65%，rattan bark was 1.35%，stem was 0.28%and leaf was 0.11%.Conclusions The results showed that there was a significant differentiation in the contents of sinomenine in the above caulis sinomenii medicinal materials samples described in this article and the content is the root was the highest in the samples.

Caulis Sinomenii；Sinomenine；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.12.105

1672-2779（2013）-12-0161-03

??吳義紅

2013-05-19）