CyclinD1、p27及PTEN蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

楊麗麗 徐佳瑛 吳 偉 祝桂祥 陳啟林

鱗狀細(xì)胞癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤之一，其中口腔黏膜部位發(fā)生的鱗狀細(xì)胞癌較為多見，與其他部位發(fā)生的鱗狀細(xì)胞癌相比，OSCC更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，明顯降低了患者的生活質(zhì)量。據(jù)相關(guān)研究顯示，與OSCC發(fā)生密切相關(guān)的基因是PTEN，PTEN是1種抑癌基因，主要位于10號(hào)染色體上，具有磷酸激酶活性［1］。PTEN基因的缺失及表達(dá)異常會(huì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，此外，細(xì)胞周期中CyclinD1、p27蛋白對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)也具有一定的調(diào)控作用。目前，臨床上對(duì)OSCC患者CyclinD1、p27及 PTEN蛋白表達(dá)情況的研究較少［2］。本研究分析OSCC及正?？谇火つせ颊?CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表達(dá)情況，旨在探究三者表達(dá)的相關(guān)性及與組織分化程度的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2011年10月-2012年10月我院收治的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者50例作為觀察組;另選取正?？谇火つせ颊?0例作為對(duì)照組。對(duì)照組男性27例，女性23例，年齡17～66歲，平均為(40.5±1.9)歲。觀察組男性26例，女性24例，年齡18～65歲，平均為(43.6±1.2)歲。其中口腔鱗癌患者高分化22例、中分化18例、低分化10例。兩組患者在年齡、性別等方面比較無顯著性差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

采取免疫組織化學(xué)SP法，檢測(cè)正?？谇火つぜ翱谇击[癌組織中CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表達(dá)情況。主要試劑有鼠抗人PTEN，由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的工作型;鼠抗人PIP3，是由武漢博士德生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的濃縮型;鼠抗人CyclinD1是由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)的濃縮型;3種試劑的工作濃度均為1∶100。將標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，4 μm切片，經(jīng)脫蠟、水化、微波修復(fù)、SP法免疫組織染色、DAB顯色等處理。SP法檢測(cè)試劑盒為鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化物酶(SP)試劑盒，顯色液為DAB顯色液。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并比較兩組患者CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表達(dá)情況，并觀察口腔鱗狀細(xì)胞癌中CyclinD1、p27及PTEN蛋白表達(dá)與組織分化程度的關(guān)系。胞質(zhì)內(nèi)若出現(xiàn)明顯的黃色或棕褐色顆粒即為CyclinD1、p27及PTEN蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞。隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。＜10%為“-”，10% ～50% 為“+”，51% ～75%為“++”，＞75%為“+++”。“-”為陰性表達(dá);“+”、“++”、“+++”均為陽性表達(dá)［3-5］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正?？谇火つぜ翱谇击[癌組織中CyclinD1蛋白表達(dá)情況

正?？谇火つそM織中CyclinD1蛋白主要呈陰性表達(dá)，陰性表達(dá)率明顯高于觀察組;而口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中CyclinD1蛋白以弱陽性表達(dá)為主，陽性表達(dá)率明顯高于正?？谇火つそM織，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 兩組CyclinD1蛋白表達(dá)情況(例，%)

2.2 兩組p27蛋白表達(dá)情況

與對(duì)照組相比，觀察組p27蛋白陽性表達(dá)率明顯較高，P ＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表 2。

表2 兩組p27蛋白表達(dá)情況(例，%)

2.3 兩組PTEN蛋白表達(dá)情況

對(duì)照組PTEN蛋白以弱陽性表達(dá)為主，陽性表達(dá)率明顯高于觀察組，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

2.4 口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中CyclinD1、p27及PTEN蛋白表達(dá)與其組織分化程度的關(guān)系

低分化者p27、PTEN蛋白表達(dá)陽性率較高分化者低，而低分化者CyclinD1蛋白表達(dá)陽性率較高分化者高，P ＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表4。

表3 兩組PTEN蛋白表達(dá)情況(例，%)

表4 CyclinD1、p27及PTEN蛋白與口腔鱗狀細(xì)胞癌組織分化程度的關(guān)系(例，%)

3 討論

口腔鱗狀細(xì)胞癌是口腔科發(fā)病率較高的惡性腫瘤，在口腔癌癥中的發(fā)病率較高，居80%以上，該類患者臨床上的生存率較低，且預(yù)后情況也較差。近年來，隨著外科診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步及分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，口腔鱗狀細(xì)胞癌的早期診斷率不斷提高，從分子學(xué)上水平上對(duì)OSCC發(fā)生機(jī)制的闡述也不斷完善［6］。目前，臨床上對(duì)口腔鱗癌的研究重點(diǎn)主要在于分子生物學(xué)研究，旨在探尋有效的分子生物學(xué)指標(biāo)，從而對(duì)口腔鱗癌進(jìn)行診斷篩選。

多數(shù)國內(nèi)外關(guān)于OSCC的研究顯示，抑癌基因(PTEN)在OSCC的發(fā)展過程中具有較為重要的作用，可通過誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，從而抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)還能抑制端粒酶的活性，從而抑制原癌基因的表達(dá)［7-8］。惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與PTEN存在較為緊密的關(guān)系，其中關(guān)于子宮內(nèi)膜癌、神經(jīng)膠質(zhì)癌、前列腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤方面的研究報(bào)道較多，而關(guān)于口腔鱗癌PTEN的報(bào)道較少，經(jīng)不斷的研究發(fā)現(xiàn)，PTEN的改變多發(fā)生在蛋白水平上，而基因水平上的改變不明顯。PTEN基因參與機(jī)體的正常發(fā)育，該基因功能的缺失對(duì)于癌癥的發(fā)展具有明顯的促進(jìn)作用［9］。PTEN是目前唯一一個(gè)發(fā)現(xiàn)的具有磷酸酶活性的抑癌基因，主要位于人體10q23.3，編碼的蛋白質(zhì)主要分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，在OSCC的發(fā)展過程中的陽性表達(dá)率呈不斷變化的趨勢(shì)。OSCC的癌變過程依次為正?？谇火つ?、上皮單純?cè)錾?、上皮異常增生、口腔鱗狀細(xì)胞癌，有研究顯示，隨著病變的不斷進(jìn)展，PTEN的陽性表達(dá)率不斷的降低，表明癌細(xì)胞正在不斷的生長(zhǎng)，病情演變也越來越重，表明OSCC患者腫瘤的惡性轉(zhuǎn)變過程與PTEN基因的異常遺傳學(xué)改變有關(guān)［10］。

本研究對(duì)OSCC與正常口腔黏膜患者PTEN蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)可知，OSCC患者PTEN蛋白表達(dá)的陽性率較正常口腔黏膜組患者低;高分化組患者PTEN蛋白的陽性率較低分化高，表明PTEN與OSCC的分化程度呈顯著相關(guān)性。細(xì)胞正常生長(zhǎng)過程中細(xì)胞周期的平衡調(diào)控是由各種調(diào)控因子決定的，包括細(xì)胞周期素依賴性激酶(p27)和細(xì)胞周期D1(CyclinD1)等調(diào)控因子，其中p27對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)呈負(fù)性調(diào)控，而CyclinD1對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)則呈正性調(diào)控，OSCC患者細(xì)胞的生長(zhǎng)與p27、CyclinD1的表達(dá)有關(guān)，p27對(duì)細(xì)胞增殖起抑制作用，CyclinD1起促進(jìn)作用［11-12］。CyclinD1與細(xì)胞周期的G1期相關(guān)，可促進(jìn)G1期細(xì)胞轉(zhuǎn)向S期。在正常的細(xì)胞周期中CyclinD1為低表達(dá)，陽性表達(dá)率低，在細(xì)胞周期的調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用。p27是1種新近發(fā)現(xiàn)的屬于細(xì)胞周期素依賴激酶抑制物之一，可抑制細(xì)胞周期G1期的CyclinD CDK4/6復(fù)合物和CyclinE-CDK2復(fù)合物活性，在細(xì)胞周期與分化調(diào)控中起著重要的作用，當(dāng)p27過度表達(dá)時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞周期持續(xù)的維持在G1期，阻礙細(xì)胞從G1期轉(zhuǎn)向S期。有研究顯示，在正?？谇火つそM織中p27呈強(qiáng)陽性表達(dá)，而在口腔鱗癌患者中呈弱陽性表達(dá)［13-14］。本組結(jié)果顯示，口腔鱗癌組患者p27陽性表達(dá)率較正?？谇火つそM織高，且口腔鱗癌患者呈強(qiáng)陽性表達(dá);口腔鱗癌患者中CyclinD1呈弱陽性表達(dá)，且表達(dá)的陽性率高于正?？谇火つせ颊?。p27、CyclinD1的表達(dá)與口腔鱗癌分化程度相關(guān)，患者鱗癌分化程度越差，p27表達(dá)水平越低，而CyclinD1表達(dá)水平越高。p27、CyclinD1等調(diào)控因子在調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖過程中具有重要作用，調(diào)控因子的紊亂可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖出現(xiàn)異常，最終誘發(fā)腫瘤的發(fā)生。綜上所述，口腔鱗癌的發(fā)生和發(fā)展與PTEN基因的表達(dá)具有存在較為重要的關(guān)系，3種蛋白的表達(dá)情況與組織分化程度相關(guān)，三者的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)OSCC的早期診斷具有較為重要的臨床價(jià)值。

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