喉咽鱗癌組織中CK4基因的表達及其臨床意義

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(1 青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，山東 青島 266003； 2 即墨市人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科)

細胞角蛋白(CK)是一類由CK基因編碼的水溶性聚合多肽，是構(gòu)成哺乳類動物上皮細胞骨架。腫瘤細胞具有保留產(chǎn)生CK細胞的能力，也可能會獲得一種新的能力產(chǎn)生新型的細胞中間絲，因此CK亞型在研究腫瘤細胞不同階段和分化狀態(tài)的演進中成為具有潛力的生物學標記物[1]。CK4主要表達于非角化復(fù)層鱗狀上皮細胞內(nèi)。研究顯示，CK4是食管鱗狀細胞癌的重要生物學標記物[2]。目前對于CK4基因的表達與喉咽鱗癌的關(guān)系研究較少，本研究采用免疫組化方法檢測60例喉咽鱗癌和癌旁黏膜組織中CK4表達，并探討其臨床意義?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源

2005年1月—2008年1月，選取我院耳鼻咽喉-頭頸外科手術(shù)切除的喉咽鱗狀細胞癌標本60例。其中男58例，女2例；年齡44～74歲。腫瘤的病理分級采用2009年美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)和國際抗癌聯(lián)盟 (UICC)頭頸部腫瘤分級分期標準[3]。60例中高分化4例，中分化35例，低分化21例。對照組選取喉咽癌切除術(shù)中腫瘤邊緣外1.0～3.0 cm處的黏膜組織，經(jīng)病理證實未發(fā)生癌變。

1.2 免疫組化染色

采用PV 9000二步法進行免疫組化染色，一抗為CK4兔抗人單克隆抗體，具體操作參照說明書進行。PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照。

1.3 免疫組化結(jié)果的判定

顯微鏡下以細胞膜和(或)細胞漿中出現(xiàn)清晰棕黃色顆粒作為陽性判斷標準。染色數(shù)量指數(shù)和強度指數(shù)相乘，得到染色反應(yīng)指數(shù)(IRS)。IRS 0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中等陽性()，≥6分為強陽性()。將染色陽性的病理切片先置于200倍顯微鏡下觀察組織中各抗原的表達，然后用VIDAS圖像分析儀分析其圖像的積分吸光度(A)值，表示抗原的表達水平，A值越大，說明抗原表達的水平越高，反之亦然。相同的方法觀察癌旁組織。由2位病理科醫(yī)生根據(jù)標準閱片。

2 結(jié) 果

2.1 癌旁組織與喉咽鱗癌組織中CK4的表達

喉咽鱗癌組織中，CK4的表達水平為：(-)6例、(+)20例、()28例、()6例；癌旁組織中，CK4的表達水平為：()8例、()52例。喉咽鱗癌組織與癌旁組織中CK4的表達差異有顯著意義(χ2=73.594，P<0.05)。

2.2 喉咽鱗癌不同分化組織中CK4的表達

高、中、低分化鱗癌組織中CK4的表達水平分別為12.71±1.67、9.57±1.06、7.09±1.12，高、中、低分化鱗癌組織中CK4的表達差異均有顯著意義(F=57.082，q=7.50～13.02，P<0.05)。

3 討 論

喉咽癌是惡性程度較高的頭頸部腫瘤之一，近年來，喉咽癌發(fā)病率呈明顯增高的趨勢，中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院對收治病例統(tǒng)計結(jié)果顯示，喉咽惡性腫瘤占頭頸部惡性腫瘤的1.4%，占全身惡性腫瘤的0.2%[4]。目前有關(guān)喉咽癌分子生物學方面的研究資料較少，尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)CK4基因在喉咽鱗癌中的表達及其與喉咽鱗癌關(guān)系的報道。

CK據(jù)相對分子質(zhì)量和化學等電點可分為Ⅰ、Ⅱ兩種亞型[2]。不同亞型的CK是由不同的基因在不同的細胞及其細胞發(fā)展的不同時期及階段表達的結(jié)果[5]。不同CK在上皮細胞中的表達因所在器官、上皮細胞的類型及分化狀態(tài)的不同而不同。在組織病理學診斷中，CK的表達可以作為腫瘤性改變和腫瘤性上皮損傷的生物學標記物。CK4是Ⅱ型CK中的一種，是與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切的多肽，主要表達于非角化復(fù)層鱗狀上皮細胞(食管型)、喉咽部黏膜的無纖毛鱗狀細胞及部分基底細胞、聲帶等非角化復(fù)層鱗狀上皮。

目前，關(guān)于CK4與食管鱗狀細胞癌關(guān)系的研究較多，通過對癌前病變和侵襲性腫瘤組織進行免疫組化分析顯示，CK4主要表達在食管上部非角化復(fù)層鱗狀上皮細胞內(nèi)。CHUNG等[6]研究證實，與正常上皮組織相比，CK4在食管鱗狀細胞癌組織中的表達會下降80%～85%。研究顯示，CK4在食管鱗癌組織中的表達幾乎為陰性，而其他腫瘤組織中84%的CK4表達陽性[6]。VIAENE等[7]研究顯示，高分化食管鱗狀細胞癌中CK4呈局灶性表達，而在低分化的食管鱗狀細胞癌中沒有檢測到CK4的表達。由此可以說明食管鱗狀細胞癌的組織學分化程度的不同可以影響CK4因子的表達。CK4在食管鱗狀細胞癌的演進過程對食管鱗狀細胞癌的早期診斷具有重要的意義。

本文實驗結(jié)果顯示，CK4在癌旁組織中表達呈強陽性，而在喉咽鱗癌組織中表達下調(diào)，差異有顯著性。CK4在高分化喉咽鱗癌組織中表達水平較高，隨著喉咽鱗癌分化程度的降低，CK4在癌組織中的表達也逐漸下降，且差異有顯著性。由此推測在由上皮細胞構(gòu)成的癌旁組織中，CK4仍然保持其穩(wěn)定和保守的特點。但當由上皮細胞構(gòu)成的喉咽黏膜發(fā)生癌變后，CK4的表達隨之發(fā)生變化。隨著腫瘤性上皮損傷程度的加重，構(gòu)成上皮細胞骨架的主要成分CK4的結(jié)構(gòu)被破壞就越重，CK4呈現(xiàn)低表達或不表達。因此，CK4在喉咽鱗癌組織中的低表達對探討喉咽鱗癌的生物學行為有一定的意義，CK4有望成為判斷喉咽鱗癌惡性程度的生物學標記物。

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