血清高遷移率族蛋白B1檢測(cè)在T3N0M0期前列腺癌冷凍治療后復(fù)發(fā)中的意義

胡 萍，司同國(guó)，郭 志

前列腺癌是老年男性常見的泌尿系惡性腫瘤，近年發(fā)病率直線上升且呈年輕化趨勢(shì)[1]。經(jīng)皮穿刺前列腺癌氬氦冷凍消融治療具備操作簡(jiǎn)單、微創(chuàng)、療效確切等優(yōu)點(diǎn)，由根治術(shù)或放療后復(fù)發(fā)的補(bǔ)救治療手段發(fā)展為早期局限性前列腺癌的一線治療手段[2]。與放射治療、外科手術(shù)治療一樣，前列腺癌氬氦冷凍治療亦有局部復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，而T3期前列腺癌患者更是局部復(fù)發(fā)的高危人群。早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)的前列腺癌患者，及時(shí)予以補(bǔ)救治療，可顯著提高生存率。目前，常用血清前列腺特異抗原（prostatespecific antigen，PSA）進(jìn)行隨訪指導(dǎo)穿刺病理活檢，但其對(duì)于局部復(fù)發(fā)的診斷敏感度偏低，探討新的血清標(biāo)志物是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)高遷移率族蛋白B1（high-mobility group box 1 protein，HMGB1）在前列腺癌中呈高表達(dá)，與腫瘤形成、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)[3]。同時(shí)，血清HMGB1對(duì)于腫瘤的診斷價(jià)值已在結(jié)腸癌、宮頸癌等多種腫瘤中進(jìn)行研究。本文檢測(cè)前列腺癌氬氦冷凍治療的T3期患者術(shù)前血清HMGB1和PSA水平，結(jié)合臨床檢測(cè)疾病復(fù)發(fā)的金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)HMGB1預(yù)測(cè)前列腺癌患者治療后復(fù)發(fā)的臨床價(jià)值。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集2005年1月—2011年6月在我科診治的T3N0M0前列腺癌患者65例，年齡65～80歲，中位年齡72歲。所有患者均經(jīng)前列腺穿刺活檢確診，病理均為腺泡癌，Gleason評(píng)分5～9分，術(shù)前均行前列腺M(fèi)RI檢查、全身骨掃描、胸部CT檢查，排除其他合并腫瘤，術(shù)前均未接受內(nèi)分泌及其他治療。選擇同期30例前列腺良性增生門診患者作為對(duì)照組，取血48 h內(nèi)不做直腸指檢。兩組患者年齡分布具可比性（P ＞ 0.05）。

1.2 方法

1.2.1 血清HMGB1檢測(cè) 所有患者術(shù)前晨起抽取空腹靜脈血 5 ml，1 h 內(nèi)離心（300 g× 5 min，5000 g×5 min），去除細(xì)胞成分取上清，等量分裝置-80℃超低溫冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA，R&D公司）檢測(cè)血清HMGB1水平。板條室溫平衡20 min后使用，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品50 μl；樣本孔加待測(cè)樣本10 μl（樣本室溫平衡20 min后進(jìn)行檢測(cè)），空白孔不加樣本。除空白孔，各孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體100 μl，封板膜封孔，置37℃恒溫箱中溫育60 min；棄液體，洗板、拍干（重復(fù) 5次）；加底物 50 μl于 37℃避光孵育 15 min；各孔加終止液，15 min內(nèi)于波長(zhǎng)450 nm處測(cè)吸光度（A）值，通過線性回歸方程計(jì)算樣本濃度。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取均值。

1.2.2 冷凍治療 采用美國(guó)Endocare公司氬氦冷凍治療設(shè)備，低位硬膜外麻醉或全身麻醉下取膀胱截石位，留置三腔氣囊導(dǎo)尿管，38～39℃生理鹽水常壓下循環(huán)保護(hù)尿道。BK1101型超聲雙平面直腸探頭，軸面、矢狀面導(dǎo)引下定位穿刺，根據(jù)腫瘤大小，選擇2～6個(gè)2 mm的冷凍器。冷凍消融治療始于腹側(cè)，依次向背側(cè)進(jìn)行。根據(jù)冰球擴(kuò)展速度及范圍，調(diào)整輸出功率，控制溫度在-45～-80℃，持續(xù)18～20 min后氦氣迅速?gòu)?fù)溫，完成2個(gè)循環(huán)的冷凍-復(fù)溫治療。操作均在超聲、心電監(jiān)護(hù)下進(jìn)行。術(shù)后局部壓迫穿刺點(diǎn)10～15 min；維持尿道循環(huán)灌注大于30 min，持續(xù)膀胱沖洗大于24 h，留置導(dǎo)尿管14 d。

1.2.3 隨訪 所有前列腺癌患者，術(shù)后每月定期復(fù)查 PSA，若 PSA ＞0.5 μg/ml，1周內(nèi)行 MRI檢查及超聲引導(dǎo)下穿刺組織病理檢查。對(duì)PSA＜0.5 μg/ml患者，術(shù)后1、3、6個(gè)月行前列腺M(fèi)RI檢查，影像學(xué)異常者行病理穿刺活檢。對(duì)于PSA、MRI或CT結(jié)果無(wú)異常患者，于術(shù)后12個(gè)月行超聲引導(dǎo)下穿刺活檢病理檢查。術(shù)后病理活檢證實(shí)腫瘤細(xì)胞存活者，定義為術(shù)后局部復(fù)發(fā)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組術(shù)前血清HMGB1、PSA檢測(cè)結(jié)果

術(shù)前血清HMGB1水平在前列腺癌組為（55.28±29.37）ng/ml，明顯高于對(duì)照組的（34.61±13.15）ng/ml，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）；對(duì)照組和前列腺癌組術(shù)前PSA分別為（3.65±1.95）μg/L和（26.7±8.3）μg/L，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 冷凍治療后臨床隨訪

65例前列腺癌患者冷凍術(shù)后3年內(nèi)局部復(fù)發(fā)15例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移4例，無(wú)進(jìn)展生存46例。局部復(fù)發(fā)組中 11例為 PSA 生化復(fù)發(fā)（PSA ＞ 0.5 μg/L），4例PSA生化無(wú)復(fù)發(fā)而活檢證實(shí)局部復(fù)發(fā)；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組4例患者為MRI及全身骨顯像提示盆腔淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（無(wú)原位復(fù)發(fā)）；無(wú)進(jìn)展組中2例出現(xiàn)非特異性PSA升高，活檢、MRI、腹部CT及全身骨顯像均未見原位復(fù)發(fā)及明顯轉(zhuǎn)移灶。

2.3 HMGB1在前列腺癌各亞組患者中的表達(dá)水平

將65例前列腺癌患者按治療后有無(wú)復(fù)發(fā)分為局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和無(wú)進(jìn)展生存亞組。在無(wú)進(jìn)展生存組，患者術(shù)前血清HMGB1平均值為（55.49±7.12）ng/ml。在局部復(fù)發(fā)組，患者血清HMGB1平均值為（73.13±7.89）ng/ml，其中 11例 PSA 生化復(fù)發(fā)患者術(shù)前血清HMGB1平均值為（81.91±17.67）ng/ml，4例PSA生化無(wú)復(fù)發(fā)患者血清HMGB1均值為（62.75±5.87）ng/ml。在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組，患者血清HMGB1平均值為（94.23±17.91）ng/ml。 局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組術(shù)前血清HMGB1顯著高于無(wú)進(jìn)展生存組（P=0.003），而遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組亦明顯高于局部復(fù)發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。局部復(fù)發(fā)組中4例局部復(fù)發(fā)而PSA生化無(wú)復(fù)發(fā)患者的術(shù)前血清HMGB1水平亦明顯高于無(wú)進(jìn)展生存組（P＜0.001）。無(wú)進(jìn)展生存組中2例術(shù)后PSA非特異性升高患者術(shù)前血清HMGB1平均值為50.04 ng/ml。

3 討論

T3期前列腺癌具有獨(dú)特的生物學(xué)特性，具有潛在治愈性，對(duì)這部分不適合行外科根治術(shù)治療的患者采取前列腺癌氬氦冷凍治療，可達(dá)到與根治術(shù)類似的治療效果。但是，由于T3期前列腺癌患者病理Gleason評(píng)分較高，有較高的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于前列腺癌局部氬氦冷凍治療術(shù)后復(fù)發(fā)的患者，再次補(bǔ)救治療仍有較好的療效。因此，對(duì)于經(jīng)冷凍治療后復(fù)發(fā)的前列腺癌患者，早期診斷至關(guān)重要[4-5]。目前，血清PSA、骨 ECT、MRI、強(qiáng)化 CT等為常用的局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的診斷方法，對(duì)于隨訪異?；颊?，最終可經(jīng)穿刺病理活檢確診。血清PSA雖然在前列腺癌的診斷、監(jiān)測(cè)和隨訪中應(yīng)用廣泛，但其敏感度高、特異度低[6]。而且，PSA對(duì)于前列腺癌的分期及有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提示意義不大。美國(guó)腫瘤放療協(xié)會(huì)（ASTRO）建議前列腺癌放療后前2年每3～4個(gè)月檢測(cè)1次，以后每6個(gè)月1次，PSA降至最低點(diǎn)，連續(xù)檢測(cè)3次逐漸升高，將復(fù)發(fā)時(shí)間定為最低點(diǎn)至第1次升高的中點(diǎn)[7]；而新的Phoenix生化復(fù)發(fā)定義為術(shù)后PSA水平超過PSA谷值加2。通常，臨床中將PSA生化復(fù)發(fā)以0.5 ng/ml為標(biāo)準(zhǔn)。在我國(guó)，前列腺癌患者多數(shù)確診時(shí)即為中晚期，局部治療后復(fù)發(fā)患者很多PSA水平并未升高。既往報(bào)道，血清PSA對(duì)于前列腺癌局部治療后復(fù)發(fā)診斷的敏感度和特異度分別為72%和83%[7]。因此，單一血清PSA對(duì)于監(jiān)測(cè)前列腺癌復(fù)發(fā)價(jià)值有限，需要探討新的腫瘤標(biāo)志物。

HMGB1是一種分布廣泛、進(jìn)化高度保守的非組蛋白核蛋白，因在瓊脂糖凝膠電泳中高遷移率而得名。研究發(fā)現(xiàn)，壞死癌癥細(xì)胞分泌到細(xì)胞外的HMGB1可能有助于癌細(xì)胞的存活、增殖和侵襲[8]。HMGB1在多種人類惡性腫瘤和動(dòng)物模型中呈過表達(dá)，盡管其與腫瘤相互作用的具體機(jī)制尚不清楚，但其作為預(yù)測(cè)腫瘤侵襲性和預(yù)后的標(biāo)志物已在多種腫瘤的免疫組化和免疫測(cè)定過程得到很好的研究，包括胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌等[9-10]。 最近，HMGB1在前列腺癌中的作用受到廣泛關(guān)注，發(fā)現(xiàn)雄激素剝脫可導(dǎo)致前列腺癌細(xì)胞分泌HMGB1[3]。有研究報(bào)道HMGB1過表達(dá)預(yù)示前列腺癌根治術(shù)后預(yù)后差[11]。該研究亦發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌細(xì)胞系中HMGB1高表達(dá)，同時(shí)對(duì)168例前列腺癌切除標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)HMGB1陽(yáng)性染色與生化無(wú)復(fù)發(fā)存活差明顯相關(guān)，同時(shí)是根治術(shù)后生化無(wú)復(fù)發(fā)存活的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。

對(duì)于血清HMGB1表達(dá)在前列腺癌患者中的診斷意義目前尚少見報(bào)道。本研究中，前列腺癌組患者血清HMGB1比對(duì)照組明顯升高。此外，局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者血清HMGB1明顯升高，提示HMGB1可能與腫瘤的形成、轉(zhuǎn)移相關(guān)，而HMGB1通過何種機(jī)制促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，尚需進(jìn)一步研究。此外，4例術(shù)后PSA隨訪陰性的局部復(fù)發(fā)患者，血清HMGB1明顯升高。同時(shí)，2例PSA非特異性升高的未復(fù)發(fā)患者，血清HMGB1未見升高，提示HMGB1在預(yù)測(cè)前列腺癌冷凍治療后復(fù)發(fā)方面可彌補(bǔ)PSA隨訪的不足。因此，在一定程度上血清HMGB1可作為一種新的腫瘤標(biāo)志物，作為局部治療后高復(fù)發(fā)患者的篩查指標(biāo)。由于本研究樣本量較小，存在一定局限性，要進(jìn)一步探討HMGB1與前列腺癌預(yù)后的關(guān)系還需要大樣本的臨床對(duì)照研究。

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